实验一 氨基酸纸层析法 实验二 甲醛滴定法测定氨基氮 实验三 蒽酮比色定糖法 实验四 酪蛋白的制备 实验五 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 实验六 影响酶促反应速度的因素 实验七 酶的活性及专一性测定 实验八 维生素C的定量测定 实验九 质粒DNA的提取与检测 实验十 PCR扩增目的基因

第一节 核酸通论 第二节 核酸的结构 第三节 核酸物化性质 一、核酸的水解 二、核酸的酸碱性质 三、核酸的紫外吸收 四、核酸的变性、复性与杂交 第四节 核酸的研究方法 一、核酸的分离、提纯和定量测定 二、核酸的超速离心 三、核酸的凝胶电泳 四、 DNA聚合酶链反应(PCR) 五、印迹技术 六、核酸的核苷酸序列测定

实验一 动物DNA的提取 . 3 实验二 琼脂糖凝胶电泳检测DNA. 8 实验三 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测外源蛋白的表达. 10 实验四 PCR体外扩增DNA片段与扩增产物的检测分析 . 错误！未定义书签。 实验五 从琼脂糖凝胶中回收DNA片断. 错误！未定义书签。 实验六 目的基因片段与载体连接. 错误！未定义书签。 实验七 RAPD和ISSR技术. 20 实验八 SSR简单序列重复标记 . 22 实验九 PCR 单链构象多态性分析. 错误！未定义书签。 实验十 DNA指纹图谱分析. 24 实验十一 动物总 RNA 的提取及含量测定 . 27 实验十二 动物组织mRNA提取实验方法.34 实验十三 RNA的定量和完整性分析.35 实验十四 综合实验：逆转录 PCR .38 附录：常用缓冲液的配置.41

【掌握】 1. 核酸提取纯化的一般原则、原理及注意事项 2. PCR的原理及方法 3.分子杂交的主要种类（S\\N\\W）及其原理 【熟悉】 1. DNA和RNA的定量方法 2. 细胞的破碎方法 3. 防止核酸降解的方法

实验一 植物基因组DNA的提取及其定性定量分析. 1 实验二 PCR扩增目的片段和胶回收. 8 实验三 目的片段和载体的连接. 15 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化效率检测. 18 实验五 重组质粒的转化. 20 实验六 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定. 23 实验七 RNA的提取（TRIzol法）. 30 实验八 mRNA的分离与纯化. 36 实验九 RT-PCR技术. 38 实验十 用mRNA差异显示法分离特异表达的基因片段 . 40 实验十一 cDNA文库的构建. 46 实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） . 51 实验十三 Southern印迹杂交法（Southern blot）. 56 实验十四 RNA分子杂交（Northern blot）. 62 实验十五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western blot）. 67 实验十六 RFLP技术. 71 实验十七 RAPD技术. 74 实验十八 细胞分裂中期染色体的荧光原位杂交技术(FISH). 76 附录一 常用缓冲液及其配制. 80 附录二 常用抗生素溶液. 85 附录三 常用贮存液的配制. 85 附录四 常用核酸蛋白换算数据. 93 附录五 染料在凝胶中的迁移速度. 94 附录六 实验中的一些好习惯. 95

实验一 蛋白质浓度的测定(1)—— Folin-酚法 实验二 蛋白质浓度测定(2)-紫外线（UV）吸收法 实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 实验四 维生素 C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法 ） 实验五 从动物组织中提取脱氧核糖核酸 实验六 核酸浓度测定——紫外吸收法 实验七 血清谷丙转氨酶的测定（King氏法） 实验八 基于口腔拭子PCR基因组DNA扩增实验 实验一 核酸浓度测定——定磷法 实验二 胍盐-β巯基乙醇法提取RNA 实验三 real-time PCR测端粒酶mRNA表达 实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验五 糖酵解中间产物的鉴定 实验六 荧光分光光度法测定维生素B2的含量 实验八 pH值和温度对酶促反应速度的影响

绪 论. 1 一 实验室规则. 1 二 实验室安全及防护知识. 2 三 实验记录与实验报告. 4 第一章 生物化学试验技术. 7 实验一 蛋白质的显色反应. 7 实验二 蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离. 11 实验三 蛋白质的粗提及含量测定（考马斯亮蓝 G-250 法）. 14 实验四 还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）. 17 实验五 过氧化氢酶活性的测定——碘量法. 20 实验六 维生素 C 的定量测定 . 27 实验七 葡聚糖凝胶柱层析法基本训练. 29 第二章 组织学与胚胎学实验技术. 31 实验一 动物组织切片技术. 31 实验二 动物组织的鉴别和胚胎发育的比较. 44 第三章 生理学实验技术. 57 实验一 坐骨神经-腓肠肌标本的制备. 57 实验二 水产动物血液常规检测. 61 实验三 血液免疫学实验. 70 实验四 水产动物消化酶的测定. 73 实验五 水产动物耗氧率的测定. 76 实验六 水产动物应激状态生理学指标的测定. 80 实验七 植物呼吸作用和光合作用强度的测定. 89 第四章 遗传育种学实验技术. 95 实验一 鱼类肾细胞的染色体制作技术. 95 实验二 染色体核型分析方法. 98 实验三 鱼类肝脏酯酶同工酶的电泳分析. 102 实验四 鱼类 DNA 的简易提取法 . 105 实验五 DNA 浓度测定与纯度鉴定 . 107 实验六 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） . 109 实验七 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 . 113

第一节 体外试验 一、概述 二、体外试验系统 第二节 哺乳动物细胞制备和培养 二、基本技术 三、培养细胞的鉴定 (一) 污染鉴定 (二) 生存指标 (三) 细胞特性鉴定 四、细胞培养在食品毒理学中应用 第三节 亚细胞组分制备及其检测方法 一、基本技术 二、微粒体的制备 三、混合功能氧化酶系的测定方法 四、线粒体的制备 五、线粒体功能的测定 第四节 生物膜的制备与其性质的研究方法 一、大鼠肝细胞膜的制备 二、红细胞膜的制备 三、脂质体的制备 四、大鼠脑突触体膜的制备 五、对生物膜的生物化学性质的研究方法 六、对膜的生物物理性质研究方法 第五节 分子生物学技术在毒理学中的应用 一、PCR技术 二、细胞程序性死亡及其检测方法 三、毒理学中的mRNA定性与定量的测定方法 四、转基因动物 五、基因芯片技术

1.了解某一特定组织或细胞某一特定mRNA转录量的变化,如 RT-PCR、 Northernblot等 2.了解某一特定组织或细胞全部mRNA转录量的变化,如 DD-PCR、基因芯片等。 3.获得某一特定组织或细胞全部mRNA,以便建立cDNA库等

生化大实验是一门综合性的实验课程，教学的目的在于通过对生命物质的分离制备，纯化，分析等综合性实验，在已掌握的基础生物化学理论知识和生化实验常用方法的基本原理、基本操作技术（如滴定、比色、层析、电泳等）的基础上，训练学生的综合实践动手能力，掌握蛋白质、酶、核酸等重要物质的分离、纯化等的测定技术。实验一蛋白质含量的测定实验二离子交换法血清纯化IgG实验三离子交换层析法分离血清白蛋白实验四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量实验五等电聚焦法测定样品的等电点实验六质粒的分离与纯化实验七PCR扩增目的基因片段实验八酶联免疫吸附实验