实验一氨基酸纸层析法一、实验目的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。二、实验原理纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：原点到层析斑点中心的距离Rf =1原点到溶剂前沿的距离在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目的，这种方法称为双向纸层析法。氨基酸无色，可利用三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。所有氨基酸及具有游离-氨基的肽与三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与三酮反应产生（亮）黄色物质。三、药品器材1器材层析滤纸（新华1号）、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、烘箱、刻度尺（自备）、铅笔（自备)。-
1 实验一 氨基酸纸层析法 一、实验目的 通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。 二、实验原理 纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于 蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展 层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层 时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向 下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相 溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就 将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。 溶质在滤纸上的移动速率用 Rf 值表示： 在一定条件下某种物质的 Rf 值是常数。Rf 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温 度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf 值 是常数，故可根据 Rf 值作定性判断。 样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的 Rf 值相同或 相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动 90 度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目的，这种方法称为双向纸层析法。氨基酸无色，可利 用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与 茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。 三、药品器材 1 器材 层析滤纸（新华 1 号）、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、烘箱、刻度尺（自备）、铅笔（自 备）。 Rf = 原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
2试剂（1)氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液（各组分浓度0.5%）。(2)展层剂：V[正丁醇（A.R.）]:V(80%甲酸):V(水)=15:3:2(3)显色剂：0.5g三酮溶于100mL无水丙酮，贮存于棕色瓶中备用。四、实验方法1.滤纸准备：选用新华1号滤纸，裁成5cm×20cm的长方形，在距纸一端2cm处用铅笔轻轻划一基线，在线上每隔1cm作一记号，标出4个原点。2.点样：用毛细管将氨基酸样品分别点于原点（用量10~20uL），稍干后再点下一次，重复2～3次，点子直径不能超过3mm。3.展层：将点好样的滤纸放入装有展层剂的展层缸内盖展层缸进行展层，展层剂液面不能淹没原点基线，当溶剂上升至15~20cm时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿线，把滤纸烘干。4.显色：用喷雾器在滤纸上均匀喷上显色剂，用热风吹干，层析斑点即可显现。5.结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的Rf值，与标准氨基酸的Rf值对照，确定混合物中含有哪些氨基酸。五、实验结果及分析六、思考题影响氨基酸Rf值的因素有哪些？2
2 2 试剂 (1)氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液（各组分浓度 0.5%）。 (2)展层剂： V[正丁醇（A.R.）]:V(80％甲酸):V(水)=15:3:2 (3)显色剂: 0.5g 茚三酮溶于 100mL 无水丙酮，贮存于棕色瓶中备用。 四、实验方法 1. 滤纸准备：选用新华 1 号滤纸，裁成 5cm×20cm 的长方形，在距纸一端 2cm 处用铅笔轻轻划一 基线，在线上每隔 1cm 作一记号，标出 4 个原点。 2. 点样：用毛细管将氨基酸样品分别点于原点(用量 10~20uL)，稍干后再点下一次，重复 2～3 次，点子直径不能超过 3mm。 3. 展层：将点好样的滤纸放入装有展层剂的展层缸内盖展层缸进行展层，展层剂液面不能淹没原 点基线，当溶剂上升至 15~20cm 时，取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿线，把滤纸烘干。 4. 显色：用喷雾器在滤纸上均匀喷上显色剂，用热风吹干，层析斑点即可显现。 5. 结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离 和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的 Rf 值，与标准氨基酸的 Rf 值对照，确定混合物中含 有哪些氨基酸。 五、实验结果及分析 六、思考题 影响氨基酸 Rf 值的因素有哪些？
实验二甲醛滴定法测定氨基氮一、实验目的初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。二、实验原理氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡：R-CH-COOR-CH-COO-+H1NH2NH3一NH3是弱酸，完全解离时PH为11一12或更高，若用碱滴定一NH3所释放的H来测定氨基酸，一般指示剂变色域小于10，很难准确指示滴定终点。常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使一NH3释放H+，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0左右）。因此可用酚酰作指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。R-CH-CO0"= R-CH-CO0 + H+_NaOH→中和NH2MH3JHCHOR-CH-COO-NHCH20HHCHOR-CH-COO-N(CH20H)2如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。三、器材及试剂1.实验器材25ml锥形瓶；碱式滴定管；吸管。en
3 实验二 甲醛滴定法测定氨基氮 一、实验目的 初步掌握甲醛滴定法测定氨基氮含量的原理和操作要点。 二、实验原理 氨基酸是两性电解质，在水溶液中有如下平衡： －NH3 是弱酸，完全解离时 PH 为 11－12 或更高，若用碱滴定－NH3 所释放的 H ＋来测定氨 基酸，一般指示剂变色域小于 10，很难准确指示滴定终点。 常温下，甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合，生成羟甲基化合物，使上述平衡右移，促使－NH3 释放 H ＋，使溶液的酸度增加，滴定中和终点移至酚酞的变色域内（PH9.0 左右）。因此可用酚酞作 指示剂，用标准氢氧化钠溶液滴定。 如样品为一种已知的氨基酸，从甲醛滴定的结果可算出氨基氮的含量。如样品为多种氨基酸的 混合物如蛋白质水解液，则滴定结果不能作为氨基酸的定量依据。但此法简便快速，常用来测定蛋 白质的水解程度，随水解程度的增加滴定值也增加，滴定值不再增加时，表明水解作用已完全。 三、器材及试剂 1.实验器材 25ml 锥形瓶；碱式滴定管；吸管
2.实验试剂（1）300ml0.05mol/L标准甘氨酸溶液准确称取375mg甘氨酸，溶解后定容至100ml。（2）500ml0.02mol/L标准氢氧化钠溶液（3）20ml酚酞指示剂0.5%酚酞的50%乙醇溶液。（4）400ml中性甲醛溶液在50ml36一37%分析纯甲醛溶液中加入1ml0.5%酚酥乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。四、实验方法1、取3个25ml的锥形瓶，编号。向1、2号瓶内各加入0.05mol/L标准甘氨酸溶液2ml和水5ml混匀。向3号瓶内加入7ml水。然后向三个瓶中各加入5滴酚酥指示剂，混匀后各加2ml甲醛溶液再混匀，分别用0.02mol/L标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸氨基氮的回收率。2、取未知浓度的甘氨酸溶液2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨酸溶液中含有氨基氮的毫克数。五、结果处理1.回收率计算：实际测得量甘氨酸氨基氮回收率%=X100加入理论量公式中实际测得量为滴定1和2号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第3号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以14.008。2.氨基氮计算：(V未一V对)XNNaOHX14.008氨基氮（毫克/毫升）=2公式中V未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。V对为滴定对照液（3号瓶）4
4 2.实验试剂 （1）300ml 0.05mol/L 标准甘氨酸溶液 准确称取 375mg 甘氨酸，溶解后定容至 100ml。 （2）500ml 0.02mol/L 标准氢氧化钠溶液 （3）20ml 酚酞指示剂 0.5 ％酚酞的 50 ％乙醇溶液。 （4）400 ml 中性甲醛溶液 在 50ml 36－37 ％分析纯甲醛溶液中加入 1ml 0.5％酚酞乙醇水溶液，用 0.02mol/L 的氢氧化 钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中。 四、实验方法 1、取 3 个 25 ml 的锥形瓶，编号。向 1、2 号瓶内各加入 0.05mol/L 标准甘氨酸溶液 2ml 和水 5ml， 混匀。向 3 号瓶内加入 7 ml 水。然后向三个瓶中各加入 5 滴酚酞指示剂，混匀后各加 2 ml 甲醛溶 液再混匀，分别用 0.02mol/L 标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。 重复以上实验两次，记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数。取平均值，计算甘氨酸 氨基氮的回收率。 2、取未知浓度的甘氨酸溶液 2ml，依上述方法进行测定，平行做几份，取平均值。计算每毫升甘氨 酸溶液中含有氨基氮的毫克数。 五、结果处理 1. 回收率计算： 甘氨酸氨基氮回收率％＝ 实际测得量 ×100 加入理论量 公式中实际测得量为滴定 1 和 2 号瓶耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数的平均值与第 3 号瓶 耗用的标准氢氧化钠溶液毫升数之差乘以标准氢氧化钠的摩尔浓度，再乘以 14.008。 2. 氨基氮计算： 氨基氮（毫克/毫升）= （V 未－V 对）×NNaOH×14.008 2 公式中 V 未为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。V 对为滴定对照液（3 号瓶）
耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度。六、思考题为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的一NH3+基上的H+，不能用一般的酸碱指示剂？实验三葱酮比色定糖法一，实验目的：1.学习分光光度法的基本原理：2.学习蕙酮比色定糖法对糖含量进行测定的原理及操作。二，实验原理1.分光光度法基本原理：溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比例关系，即符合于比色原理一一比尔定律。2.朗伯-比尔定律A=1g(1/T)=KbcA：为吸光度，T：为透射比，是透射光强度比上入射光强度C：为吸光物质的浓度
5 耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度。 六、思考题 为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—NH3+ 基上的 H+，不能用一般的酸碱指示剂？ 实验三 蒽酮比色定糖法 一．实验目的： 1.学习分光光度法的基本原理； 2.学习蒽酮比色定糖法对糖含量进行测定的原理及操作。 二．实验原理 1.分光光度法基本原理： 溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应，不同的物质具有各自选择性的吸收光 谱，因此，当某单色光通过溶液时，能量会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质浓度有一定比 例关系，即符合于比色原理——比尔定律。 2.朗伯-比尔定律 A=lg(1/T)=Kbc A：为吸光度, T：为透射比,是透射光强度比上入射光强度 c：为吸光物质的浓度
b：为吸收层厚度K：比例常数3.物理意义当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时，起其吸光度A与吸光物质的浓度c及吸收层厚度b成正比。4.葱酮比色法葱酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与葱酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。葱酮可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄糖含量。三．实验试剂（1）葱酮试剂：取0.2g葱酮溶于100mL80%（V/V)硫酸中，当日配制使用；（2）标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL)：（可滴加几滴甲苯作防腐剂)：（3）糖样品溶液。四。实验步骤1.制作标准曲线：取干试管6支，依次加入标准糖溶液0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0ml，并依次用蒸馏水补足体积到1mL，各管均加入葱酮试剂4mL，沸水浴准确煮沸10min，室温放置10min，用1号试管溶液调零，比色测定A620。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线，管号1#7#2#3#4#5#6#6
6 b：为吸收层厚度 K：比例常数 3.物理意义 当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的吸光物质时,起其吸光度 A 与吸光物质的浓度 c 及吸收层厚度 b 成正比。 4.蒽酮比色法 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛 或羟甲基糖醛后，与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物呈蓝绿色，在 620nm 处有最大吸收。 蒽酮 可与其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当样品中存有含较多色氨酸的蛋白质时，反应不 稳定，呈现红色。对于特定的糖类，反应较稳定。 本法多用于测定糖原含量，亦可用于测定葡萄 糖含量。 三．实验试剂 （1）蒽酮试剂：取 0.2g 蒽酮溶于 100mL 80%(V/V)硫酸中，当日配制使用； （2）标准葡萄糖 溶液(0.1mg/mL)：(可滴加几滴甲苯作防腐剂)； （3）糖样品溶液。 四．实验步骤 1.制作标准曲线： 取干试管 6 支，依次加入标准糖溶液 0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0 ml,并依次用蒸馏水补足体 积到 1mL，各管均加入蒽酮试剂 4mL，沸水浴准确煮沸 10min，室温放置 10min，用 1 号试管溶液调 零，比色测定 A620。用标准糖溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制作标准曲线。 管号 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#
标准葡00.20.60.8萄糖溶0. 41.0液(ml)0蒸馏水1.00.80.60. 40. 20(ml)样品液////1. 0/(ml)置冰水浴中冷却5min葱酮试4. 04.04. 04. 04. 04. 04. 0剂(ml)沸水浴中准确加热10min，取出，用自来水冷却，室温放置10minA620nm2.样糖溶液待测浓度00. 020.040.060.080.10品含(mg/ml)糖量测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释100倍，吸取1mL置试管中，再加入4mL葱酮试剂，沸水浴中煮沸10分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量（mg/ml）。五、实验结果
7 2. 样 品 含 糖 量 测定：无蛋白糖溶液样品溶液稀释 100 倍，吸取 1mL 置试管中，再加入 4mL 蒽酮试剂，沸水浴中煮 沸 10 分钟，取出后自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线 查算出样品液的糖含量（mg/ml）。 五、实验结果 标准葡 萄糖溶 液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0 蒸馏水 (ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 样品液 (ml) ／ ／ ／ ／ ／ ／ 1.0 置冰水浴中冷却 5min 蒽酮试 剂(ml) 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 沸水浴中准确加热 10min，取出，用自来水冷却，室温放置 10min A620nm 糖溶液 浓度 (mg/ml) 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 待测
1.制作标准曲线2.计算样品中糖浓度六、思考题H2SO在实验中起什么作用？酪蛋白的制备一、实验目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。二、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。离心机的使用说明：1.要离心的离心管和管套要称重，重量不等时将水加在管套里。2.离心管的放置是对角线放置，要求必须对称。3.先将离心机转速旋钮恢复到零刻度后，再定时间，定好时间后缓慢旋转转速旋钮，使离心机均匀的提速到预定转速。0
8 1.制作标准曲线 2.计算样品中糖浓度 六、思考题 H2SO4 在实验中起什么作用？ 酪蛋白的制备 一、实验目的 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、实验原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电 点为 4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的 pH 调至 4.7 时，酪蛋白就沉淀出来。用乙 醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 离心机的使用说明： 1.要离心的离心管和管套要称重，重量不等时将水加在管套里。 2．离 心管的放置是对角线放置，要求必须对称。 3. 先将离心机转速旋钮恢复到零刻度后，再定时 间，定好时间后缓慢旋转转速旋钮，使离心机均匀的提速到预定转速
三、材料、试剂与仪器1.材料新鲜牛奶2.试剂（1）95%乙醇1200mL（2）无水乙醚1200mL300ml（3）0.2mol/LpH4.7醋酸一醋酸钠缓冲液先配A液与B液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2054.44g，定容至2000ml。B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸一一醋酸钠缓冲液3000ml。（4）乙醇一乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）3.仪器离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、操作步骤1.酪蛋白的粗提25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液25mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。2.酪蛋白的纯化（1）用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇一乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。（3）将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。3.准确称重，计算含量和得率。含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）
9 三、材料、试剂与仪器 1. 材料 新鲜牛奶 2. 试剂 （1）95%乙醇 1 200mL （2）无水乙醚 1 200mL （3）0.2mol/L pH4.7 醋酸—醋酸钠缓冲液 300ml 先配 A 液与 B 液 A 液：0.2mol/L 醋酸钠溶液 称 NaAC·3H2O 54.44g，定容至 2000ml。 B 液：0.2mol/L 醋酸溶液，称优 纯醋酸（含量大于 99.8%）12.0g 定容至 1000ml。 取 A 液 1770ml，B 液 1230ml 混合即得 Ph4.7 的醋酸——醋酸钠缓冲液 3000ml。 （4）乙醇—乙醚混合液 乙醇：乙醚=1 ：1（V/V） 3. 仪器 离心机、抽滤装置、精密 pH 试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计 四、操作步骤 1. 酪蛋白的粗提 25mL 牛奶加热至 40℃。在搅拌下慢慢加入预热至 40℃、pH4.7 的醋酸缓冲液 25mL.用精密 pH 试纸或酸度计调 pH 至 4.7。 将上述悬浮液冷却至室温。离心 15 分钟（3000 r /min）。弃去清 液，得酪蛋白粗制品。 2. 酪蛋白的纯化 （1）用水洗涤沉淀 3 次，离心 10 分钟（3 000r/min），弃去上清液。 （2）在沉淀中加入 30mL 乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚 混合液洗沉淀 2 次。最后用乙醚洗沉淀 2 次，抽干。 （3）将沉淀摊开在表面 上，风干；得酪蛋白纯品。 3. 准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白 g/100 mL 牛乳（g%）
测得含量得率：2×100%理论含量式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。五、实验结果及分析六、思考题1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量一、实验目的1.掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法-
10 式中理论含量为 3.5g/100mL 牛乳。 五、实验结果及分析 六、思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 一、实验目的 1. 掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法