实验五考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
实验五 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
实验目的EREEEREEREREEEEEEREEEREEEERREREEREEEEEERERERERRRRRRER·O实验原理试剂器材实验步骤思考题
1 实验目的 2 实验原理 3 试剂器材 4 实验步骤 5 思考题
实验日的1.掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法。2.熟练分光光度计的使用和操作方法
实验目的 1.掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的 原理与方法。 2.熟练分光光度计的使用和操作方法
实验原理考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种，酸性溶液中呈棕红色，最大光吸收峰在465mm，当它与蛋白质结合形成复合物时，其最大吸收峰改变为595nm。在一定范围内，595nm下光密度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定
实验原理 考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种，酸性溶液 中呈棕红色，最大光吸收峰在465nm，当它与蛋白质结合形成复合 物时，其最大吸收峰改变为595nm。在一定范围内，595nm下光密 度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定
器材试剂1.试剂：（1)0.9%NaC1（2）标准蛋白质（3）待测蛋白（3）考马斯亮蓝G250染液2.器材：试管；吸管10mL、15mL、1mL、0.1mL；722分光光度计
器材试剂 1. 试剂： （1）0.9％NaCl （2）标准蛋白质 （3）待测蛋白 （3）考马斯亮蓝G250染液 2.器材： 试管；吸管10mL、l5mL、lmL、0.1mL；722分光光度计
实验步骤1.标准曲线的制备取6支试管，按下表加入各试剂：管号1#2#3#4#5#6#7#标准蛋白00.20.40.60.81.0溶液（ml)0.9%NaC101.00.80.60.40.2溶液（ml)待测样品1. 0(ml)考马斯亮5.05.05.05.0蓝试剂5.05.05.0(ml)摇匀，放置5min，测吸光度值A595nm以1-6#管相应标准蛋白质含量（mg）为横坐标A595为纵坐标，绘制标准曲线
实验步骤 1. 标准曲线的制备 取6支试管，按下表加入各试剂： 管号 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 标准蛋白 溶液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 ／ 0.9%NaCl 溶液(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 ／ 待测样品 (ml) ／ ／ ／ ／ ／ ／ 1.0 考马斯亮 蓝试剂 (ml) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 摇匀，放置5min，测吸光度值 A595nm 以1-6#管相应标准蛋白质含量（mg）为横坐标、 A595为纵坐标，绘制标准曲线
2.待测样浓度计算：根据待测样A595从标准曲线上查得蛋白质含量，并计算蛋白样品的浓度（mg/ml）
2.待测样浓度计算： 根据待测样A595从标准曲线上查得蛋白质含 量，并计算蛋白样品的浓度（mg/ml）
思考题蛋白质含量的测定还有哪些方法？其优缺点是什么？
思考题 蛋白质含量的测定还有哪些方法？其优 缺点是什么？