实验十 PCR扩增基因
实验十 PCR扩增基因
实验目的.....................实验原理试剂器材实验步骤思考题5
1 实验目的 2 实验原理 3 试剂器材 4 实验步骤 5 思考题
实验日的学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法心掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法
实验目的 ❖学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。 ❖掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法
实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白
实验原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电 点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛 乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗 涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白
器材试剂·材料新鲜牛奶·试剂95%乙醇1.200mL无水乙醚1200ml300ml0.2mol/LpH4.7醋酸一醋酸钠缓冲液先配A液与B液A液：0.2mo1/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2054.44g，定容至2000mlB液：0.2mo1/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。取A液1770ml，B液1230m1混合即得Ph4.7的醋酸一醋酸钠缓冲液3000ml。乙醇一乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）·仪器离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计
器材试剂 • 材料 新鲜牛奶 • 试剂 95%乙醇 1 200mL 无水乙醚 1 200mL 0.2mol/L pH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液 300ml 先配A液与B液 A液：0.2mol/L醋酸钠溶液 称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。 B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优 纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至 1000ml。 取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。 乙醇—乙醚混合液 乙醇：乙醚=1 ：1（V/V） • 仪器 离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计
实验步骤1.酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用将上述精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品
实验步骤 1.酪蛋白的粗提 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入 预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用 精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。 将上述 悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品
2.酪蛋白的纯化用水洗涤沉淀3次，离心10分钟（3000r/min），弃去上清液。在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇一乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次抽干。将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品
2. 酪蛋白的纯化 • 用水洗涤沉淀 3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上清液。 • 在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部 悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙 醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次， 抽干。 • 将沉淀摊开在表面 上，风干；得酪蛋白纯品
3.准确称重，计算含量和得率含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳
3. 准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g/100 mL牛乳（g%） 式中理论含量为3.5g/100mL牛乳
思考题制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
思考题 制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？