实验五氨基酸的分离鉴定纸层析法
氨基酸的分离鉴定纸层析法 实 验 五
一、实验目的掌握氨基酸纸上层析的方法和原理。学会分析未知样品的氨基酸成分。二、实验原理滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离
一、实验目的 掌握氨基酸纸上层析的方法和原理，学会分析 未知样品的氨基酸成分。 二、实验原理 滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析，滤纸纤 维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶 剂为流动相。有机相流经固定相支持物时，与固定相之间 连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离
分配层析：利用不同的物质在两个互不相溶的溶液中的分配系数不同而得到分离的。溶质在固定相的浓度Cs分配系数α=溶质在流动相的浓度C一个物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数
分配层析：利用不同的物质在两个互不相溶的溶液中的 分配系数不同而得到分离的。 分配系数α= 溶质在固定相的浓度Cs 溶质在流动相的浓度CL 一个物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度 下是一个常数
原点到层析斑点中心的距离迁移率R=原点到溶剂前沿的距离R，值的主要决定因素是分配系数（α）。对于某一物质在一定条件下的α值是固定的。因此Rf值为其特征常数。Rf值的影响因素：物质结构，溶剂组成，pH值，温度
原点到层析斑点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离 迁移率 Rf ＝ 物质结构，溶剂组成，pH值，温度 Rf值的影响因素： R f 值的主要决定因素是分配系数（α）。 对于某一物质在一定条件下的α值是固定的。 因此R f值为其特征常数
三、试剂和器材1. 试剂(1)展开剂：正丁醇一乙酸一水（4：1：3，VM)(2)氨基酸溶液：0.5%的脯氨酸、缬氨酸、丝氨酸、酪氨酸、精氨酸溶液及它们的混合液。(3）显色剂：0.1%水合三酮乙醇溶液。2.器材层析缸、毛细管、电吹风
三、试剂和器材 1. 试剂 (1) 展开剂：正丁醇－乙酸－水（4：1：3，V/V) (2) 氨基酸溶液：0.5%的脯氨酸、缬氨酸、丝氨酸、 酪氨酸、精氨酸溶液及它们的混合液。 (3) 显色剂：0.1%水合茚三酮乙醇溶液。 2. 器材 层析缸、毛细管、电吹风
四、实验步骤1．将配好的层析液（约50-60ml)倒入层析缸中，液高0.3cm-0.4cm，盖紧缸盖（确定密封），放置30分钟。2.取层析滤纸一张。在垂直于纸的纹路一端距边缘1.5cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置（共6点），并用铅笔在点样点下端写出所点氨基酸的名称。3.点样：用毛细管吸取样品约1-1.5cm高，将各氨基酸样品分别点在这六个位置上，用电吹风吹于后再点一次，共点三次。每点在纸上扩散的直径最大不超过0.5cm。4．扩展：将滤纸直立于层析缸中，点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1cm。当前沿线到达层析纸2/3处时即取出滤纸用铅笔描出溶剂前沿界线，用电吹风热风吹干。（开始第二个实验）5.显色：用喷雾器均匀喷上01%萌三酮溶液，然后用热风吹干即可显出各层析斑点。6.用铅笔画出层析斑点并算出R.值
四、实验步骤 1．将配好的层析液(约50-60ml)倒入层析缸中，液高0.3cm-0.4cm, 盖紧缸盖（确定密封），放置30分钟。 2．取层析滤纸一张。在垂直于纸的纹路一端距边缘1.5cm处用铅笔 划一条直线，在此直线上每间隔2厘米作一记号，作为点样位置 （共6点），并用铅笔在点样点下端写出所点氨基酸的名称。 3．点样：用毛细管吸取样品约1-1.5cm高，将各氨基酸样品分别点 在这六个位置上，用电吹风吹干后再点一次，共点三次。每点在 纸上扩散的直径最大不超过0.5cm。 4．扩展：将滤纸直立于层析缸中，点样的一端在下，扩展剂的液 面需低于点样线1cm。当前沿线到达层析纸2/3处时即取出滤纸， 用铅笔描出溶剂前沿界线，用电吹风热风吹干。(开始第二个实 验） 5．显色：用喷雾器均匀喷上0. 1%茚三酮溶液，然后用热风吹干即 可显出各层析斑点。 6．用铅笔画出层析斑点并算出Rf值
五、注意事项1为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操作时带手套。2．重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了节三酮后的显色则要用热风吹干滤纸。3.实验报告中一定要写结果分析，即分析每种氨基酸Rf大小的原因
五、注意事项 1. 为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操作时带 手套。 2. 重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了茚三酮 后的显色则要用热风吹干滤纸。 3. 实验报告中一定要写结果分析，即分析每种氨基酸Rf 大小的原因
六、思考题1、请对试验中所用的几种氨基酸移动快慢的原因给予简要分析。2、若增加固定相的pH，本实验分离的几种氨基酸的R,值将如何变化？
六、思考题 1、请对试验中所用的几种氨基酸移动快慢的原因 给予简要分析。 2、若增加固定相的pH，本实验分离的几种氨基酸的 Rf值将如何变化？
实验六蛋白质含量的测定
蛋白质含量的测定 实 验 六
一、目的要求1.学习和掌握蛋白质含量测定的原理2.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的实验流程3.分光光度计的使用
1. 学习和掌握蛋白质含量测定的原理 2.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的实验流程 3.分光光度计的使用 一、目的要求