实验1培养基的配制与灭菌目的要求1了解培养基的概念种类和用途，明确培养基配置的原理。通过配制适用于一般细菌，放线菌和真菌的三种培养基来掌握配制培养基的一般方法和步骤。了解常用的灭菌方法和原理，重点掌握高压蒸汽灭菌技术
实验1 培养基的配制与灭菌 一、目的要求 1. 了解培养基的概念种类和用途，明确培养基配置的原 理。 2. 通过配制适用于一般细菌，放线菌和真菌的 三种培养基来掌握配制培养基的一般方法和 步骤。 3. 了解常用的灭菌方法和原理，重点掌握高压 蒸汽灭菌技术
基本原理二、1.培养基配置原理培养基(culturemedium)是指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分比例应合适。为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求还必须控制培养基合适的pH，氧化还原电位等
二、 基本原理 1. 培养基配置原理 培养基(culture medium)是指人工配制的、适合微生 物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之 实验和研究目的不同，所以培养基的种类很多，不同种 类的培养基一般都应含有微生物生长所需的碳源、氮源、 能源、无机盐、生长因子和水六大营养要素，且各成分 比例应合适。 为了满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的要求， 还必须控制培养基合适的pH，氧化还原电位等
常用培养基：牛肉膏蛋白陈培养基广泛用于细菌的培养高氏一号培养基用于培养放线菌：马丁式培养基被广泛用于培养霉菌。常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为1.5%-2%;半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%
常用培养基： 牛肉膏蛋白胨培养基广泛用于细菌的培养； 高氏一号培养基用于培养放线菌； 马丁式培养基被广泛用于培养霉菌。 常用凝固剂是琼脂，固体培养基琼脂加量通常为 1.5%-2%；半固体培养基琼脂加量为0.5%-0.8%
高氏一号培养基：马丁氏培养基：20 g可溶性淀粉牛肉膏蛋白陈培养牛肉膏kH2PO41g基:1 g硝酸钾MgS04.7H200.5g牛肉膏3g0.5 g磷酸氢二钾蛋白陈5g10g蛋白陈NaCl0.5 g葡萄糖10gNaCl5g硫酸镁0.5g琼脂15-20g琼脂15-20g0.01克硫酸亚铁水1000ml水1000ml琼脂15-20g孟加拉红0.033gpH7.4-7.6水1000ml链霉素30ug/mlPH7.2-7.4
牛肉膏蛋白胨培养 基： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.4-7.6 高氏一号培养基： 可溶性淀粉 20 g 硝酸钾 1 g 磷酸氢二钾 0.5 g NaCl 0.5 g 硫酸镁 0.5g 硫酸亚铁 0.01克 琼脂 15-20g 水 1000ml pH 7.2-7.4 马丁氏培养基： 牛肉膏 kH2PO4 1g MgSO4.7H2O0.5g 蛋白胨 5g 葡萄糖10g 琼脂 15-20g 水 1000ml 孟加拉红0.033g 链霉素30ug/mL
2消毒与灭菌一消毒与灭菌两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原体和有害微生物的营养体，灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体，包括芽抱和孢子灭菌原理火焰烧灼干热法热空气灭菌加热法压力蒸汽灭菌间歇灭菌煮沸灭菌湿热法巴斯德消毒
加 热 法 干热法 湿热法 火焰烧灼 热空气灭菌 压力蒸汽灭菌 间歇灭菌 煮沸灭菌 巴斯德消毒 灭菌原理 2 消毒与灭菌 – 消毒与灭菌两者的意义有所不同。消毒一般是 指消灭病原体和有害微生物的营养体，灭菌则是 指杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子
干热法：利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的，主要有火焰灼烧灭菌和热空气灭菌1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160一170C）加热灭菌1一2h，适用于玻璃器皿和培养血等。原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快
干热法： 利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝 固变性而达到灭菌的目的，主要有火焰灼 烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和 金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布 用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气 （160－170C）加热灭菌1－2h，适用于 玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质 变性，与水的含量有关，当环境和细胞含 水量越大，凝固越快
湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低：湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。>高压蒸汽灭菌法：1、设备：高压灭菌锅2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌4、注意事项：1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0"时方可打开
湿热法 ： 原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白 质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热 存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用 于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时 方可打开
(0.1MP,121C)...20/30minutes灭菌时间到后压力降为零装待灭加盖加热断电源开箱取物菌物品木柄放气软管放气阁Autoclave安全陶紧固螺旅菜.Steamandpressure=hightemp~121°℃Steamexhaustvalve (E)Valve (C)Charnber pressuregauge主体Door压力表Steamexhaus拎环消寿桶Jooket (B)ITrapThermometer底架Fig.21.5Steamenters (A)Pressureregulator
（0.1MP，121ºC).20 /30minutes
HIAYAME手提式灭菌锅半自动灭菌锅全自动高压灭菌锅
手提式灭菌锅 半自动灭菌锅 全自动高压灭菌锅
紫外线灭菌：原理：紫外线波长在200一300nm，具有杀菌作用，以265-266nm杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收：可产生臭氧和过UV氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。缺点：穿透力不大。距照射物<1.2m为宜。应用：无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆积物品的灭菌
紫外线灭菌： 原理：紫外线波长在200－300nm，具 有杀菌作用，以265-266nm杀菌力强。此段 波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过 氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成正 比。 缺点：穿透力不大。距照射物<1.2m为 宜。 应用：无菌室，接种箱，手术室内的空气 及物体表面的灭菌。 射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆 积物品的灭菌