基础生物学技术实验指导书集美大学水产学院2008年4月
基础生物学技术 实验指导书 集美大学水产学院 2008 年 4 月
目录绪论一实验室规则二实验室安全及防护知识三实验记录与实验报告第一章生物化学试验技术实验一蛋白质的显色反应实验二蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离11实验三蛋白质的粗提及含量测定（考马斯亮蓝G-250法）.14实验四... 17还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）实验五过氧化氢酶活性的测定一-碘量法..20实验六维生素C的定量测定.27实验七葡聚糖凝胶柱层析法基本训练.29.31第二章组织学与胚胎学实验技术.31实验一动物组织切片技术实验二动物组织的鉴别和胚胎发育的比较44第三章生理学实验技术。57实验一坐骨神经-腓肠肌标本的制备57实验二水产动物血液常规检测61实验三血液免疫学实验70实验四水产动物消化酶的测定.73实验五水产动物耗氧率的测定76
目 录 绪 论. 1 一 实验室规则. 1 二 实验室安全及防护知识. 2 三 实验记录与实验报告. 4 第一章 生物化学试验技术. 7 实验一 蛋白质的显色反应. 7 实验二 蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离. 11 实验三 蛋白质的粗提及含量测定（考马斯亮蓝 G-250 法）. 14 实验四 还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）. 17 实验五 过氧化氢酶活性的测定——碘量法. 20 实验六 维生素 C 的定量测定 . 27 实验七 葡聚糖凝胶柱层析法基本训练. 29 第二章 组织学与胚胎学实验技术. 31 实验一 动物组织切片技术. 31 实验二 动物组织的鉴别和胚胎发育的比较. 44 第三章 生理学实验技术. 57 实验一 坐骨神经-腓肠肌标本的制备. 57 实验二 水产动物血液常规检测. 61 实验三 血液免疫学实验. 70 实验四 水产动物消化酶的测定. 73 实验五 水产动物耗氧率的测定. 76
80实验六水产动物应激状态生理学指标的测定实验七植物呼吸作用和光合作用强度的测定.89第四章遗传育种学实验技术..95..95实验一鱼类肾细胞的染色体制作技术...98实验二染色体核型分析方法.102实验三鱼类肝脏酯酶同工酶的电泳分析..105实验四鱼类DNA的简易提取法实验五DNA浓度测定与纯度鉴定107109实验六聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）实验七DNA的琼脂糖凝胶电泳113
实验六 水产动物应激状态生理学指标的测定. 80 实验七 植物呼吸作用和光合作用强度的测定. 89 第四章 遗传育种学实验技术. 95 实验一 鱼类肾细胞的染色体制作技术. 95 实验二 染色体核型分析方法. 98 实验三 鱼类肝脏酯酶同工酶的电泳分析. 102 实验四 鱼类 DNA 的简易提取法 . 105 实验五 DNA 浓度测定与纯度鉴定 . 107 实验六 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） . 109 实验七 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 . 113
绪论一实验室规则1.实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理，写好实验预习报告，否则不能进行实验。2.实验时自觉遵守实验室纪律，保持室内安静，不大声说笑和喧哗。3.实验过程中要听从教师指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想改进和设计新的实验方法，必须取得教师的同意。实验时认真进行实验记录，实验完毕及时整理数据，按时上交实验报告。4：实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整齐，药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架，严禁瓶盖及药勺混杂，切勿使药品（尤其是NaOH）酒落在天平和实验台面上，毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。5.配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。6配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。7.配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缸或冲稀后排放。8：使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。9.实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进行。10.实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，保持实验台面和实验柜内的整洁。11.严禁抄拿他组仪器，不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上，打破了玻璃仪器要及时向教师报告，并自觉登记，按规定进行处理。12.每位学生要熟悉实验室内电闸的位置，烘箱和电炉用毕必须立即断电，不得1
1 绪 论 一 实验室规则 1．实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理， 写好实验预习报告，否则不能进行实验。 2．实验时自觉遵守实验室纪律，保持室内安静，不大声说笑和喧哗。 3．实验过程中要听从教师指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想 改进和设计新的实验方法，必须取得教师的同意。实验时认真进行实验记录，实验完 毕及时整理数据，按时上交实验报告。 4．实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整 齐，药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架，严禁瓶盖及药勺混杂，切勿使药品（尤其 是 NaOH）洒落在天平和实验台面上，毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在 水池内。 5．配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试 剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。 6．配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须 贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液， 必须严密封口。 7．配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缸或冲稀后排放。 8．使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。使用分光光度计时不得将溶液洒在 仪器内外和地面上。仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。 9．实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不 得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进 行。 10．实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，保持实验台面和实验柜内的整 洁。 11．严禁抄拿他组仪器，不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上，打 破了玻璃仪器要及时向教师报告，并自觉登记，按规定进行处理。 12．每位学生要熟悉实验室内电闸的位置，烘箱和电炉用毕必须立即断电，不得
过夜使用，要严格遵守实验室安全用电规则和其他安全规则。13.每日实验完毕，值日生要认真做好实验室的卫生值日工作。最后离开实验室的实验人员，必须检查并关好水、电、门、窗。二实验室安全及防护知识实验室中可以说是“五毒”俱全，即着火、爆炸、中毒、触电和割伤的危险均时刻存在。因此每一位在生化实验室工作的人员都必须有充分的安全意识，严格的防范措施和丰富实用的防护救治知识，一旦发生意外能正确地进行处置，以防事故进一步扩大。1.着火实验室经常使用大量的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等，而实验室又经常使用电炉等火源，因此极易发生着火事故。乙醚、二硫化碳、内酮和苯不得存于可能会产生电火花的普通冰箱内。他们的蒸汽只需接触红热物体的表面便会着火，其中二硫化碳尤其危险。（1）预防火灾必须严格遵守以下操作规程①严禁在开口容器和密闭体系中用明火加热有机溶剂，只能使用加热套或水浴加热。②废有机溶剂不得倒入废物桶，只能倒入回收瓶，以后再集中处理。量少时用水稀释后排入下水道。不得在烘箱内存放、干燥、烘焙有机物。④在有明火的实验台面上不允许放置开口的有机溶剂或倾倒有机溶剂。（2）灭火方法实验室中一旦发生火灾切不可惊慌失措，要保持镇静，根据具体情况正确地进行灭火或立即报火警（火警电话119）。①容器中的易燃物着火时，用灭火毯盖灭。因已确证石棉有致癌性，故改用玻璃纤维布作灭火毯。②乙醇、内酮等可溶于水的有机溶剂着火时可以用水灭火。汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时不能用水，只能用灭火毯和砂土盖灭。③导线、电器和仪器着火时不能用水和二氧化碳灭火器灭火，应先切断电源，然后用1211灭火器（内装二氟一氯一溴甲烷）灭火。④个人衣服着火时，切勿慌张奔跑，以免风助火势，应迅速脱衣，用水龙头浇2
2 过夜使用，要严格遵守实验室安全用电规则和其他安全规则。 13．每日实验完毕，值日生要认真做好实验室的卫生值日工作。最后离开实验室 的实验人员，必须检查并关好水、电、门、窗。 二 实验室安全及防护知识 实验室中可以说是“五毒”俱全，即着火、爆炸、中毒、触电和割伤的危险均时刻 存在。因此每一位在生化实验室工作的人员都必须有充分的安全意识，严格的防范措 施和丰富实用的防护救治知识，一旦发生意外能正确地进行处置，以防事故进一步扩 大。 1．着火 实验室经常使用大量的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等，而实验室又经 常使用电炉等火源，因此极易发生着火事故。 乙醚、二硫化碳、丙酮和苯不得存于可能会产生电火花的普通冰箱内。他们的蒸 汽只需接触红热物体的表面便会着火，其中二硫化碳尤其危险。 （1）预防火灾必须严格遵守以下操作规程 ① 严禁在开口容器和密闭体系中用明火加热有机溶剂，只能使用加热套或水浴 加热。 ② 废有机溶剂不得倒入废物桶，只能倒入回收瓶，以后再集中处理。量少时用 水稀释后排入下水道。 ③ 不得在烘箱内存放、干燥、烘焙有机物。 ④ 在有明火的实验台面上不允许放置开口的有机溶剂或倾倒有机溶剂。 （2）灭火方法 实验室中一旦发生火灾切不可惊慌失措，要保持镇静，根据具体情况正确地进行 灭火或立即报火警（火警电话 119）。 ① 容器中的易燃物着火时，用灭火毯盖灭。因己确证石棉有致癌性，故改用玻 璃纤维布作灭火毯。 ② 乙醇、丙酮等可溶于水的有机溶剂着火时可以用水灭火。汽油、乙醚、甲苯 等有机溶剂着火时不能用水，只能用灭火毯和砂土盖灭。 ③ 导线、电器和仪器着火时不能用水和二氧化碳灭火器灭火，应先切断电源， 然后用 1211 灭火器（内装二氟一氯一溴甲烷）灭火。 ④ 个人衣服着火时，切勿慌张奔跑，以免风助火势，应迅速脱衣，用水龙头浇
水灭火，火势过大时可就地卧倒打滚压灭火焰。2.爆炸实验室防止爆炸事故是极为重要的，因为一旦爆炸其毁坏力极大，后果将十分严重。加热时会发生爆炸的混合物有：有机化合物-氧化铜、浓硫酸-高锰酸钾、三氯甲烷-丙酮等。常见的引起爆炸事故的原因有：①随意混合化学药品，并使其受热、受摩擦和撞击。②在密闭的体系中进行蒸馏、回流等加热操作。③在加压或减压实验中使用了不耐压的玻璃仪器或反应过于激烈而失去控制。易燃易爆气体大量逸入室内。③高压气瓶减压阀摔坏或失灵。3.中毒实验室常见的化学致癌物有：石棉、砷化物、铬酸盐、溴乙锭等。剧毒物有：氰化物、砷化物、乙晴、甲醇、氯化氢、汞及其化合物等。中毒的原因主要是由于不慎吸入、误食或由皮肤渗入。中毒的预防：①保护好眼睛最重要，使用有毒或有刺激性气体时，必须配戴防护眼镜，并应在通风橱内进行。②取用毒品时必须配戴橡皮手套。③严禁用嘴吸移液管，严禁在实验室内饮水、进食、吸烟，禁止赤膊和穿拖鞋。不要用乙醇等有机溶剂擦洗溅洒在皮肤上的药品。中毒急救的方法主要有：①误食了酸和碱，不要催吐，可先立即大量饮水，误食碱者再喝些牛奶，误食酸者，饮水后再服Mg(OH)2乳剂，最后饮些牛奶。②吸入了毒气，立即转移室外，解开衣领，休克者应施以人工呼吸，但不要用口对口法。③砷和汞中毒者应立即送医院急救。4.外伤（1）化学灼伤：①眼晴灼伤或掉进异物：眼内若溅入任何化学药品，应立即用大量水冲洗15min，不可用稀酸或稀碱冲洗。若有玻璃碎片进入眼内则十分危险，必须十分小心谨慎，不可自取，不可转动眼球，可任其流泪，若碎片不出，则用纱布轻轻包住眼晴急送医院处理。若有木屑、尘粒等异物进入，可由他人翻开眼脸，用消毒棉签轻轻取出或任其流泪，待异物排出后再滴几滴鱼肝油。②皮肤灼伤：（a）酸灼伤：先用大量水洗，再用稀NaHCO或稀氨水浸洗，最3
3 水灭火，火势过大时可就地卧倒打滚压灭火焰。 2．爆炸 实验室防止爆炸事故是极为重要的，因为一旦爆炸其毁坏力极大，后果将十分严 重。 加热时会发生爆炸的混合物有：有机化合物-氧化铜、浓硫酸-高锰酸钾、三氯甲 烷-丙酮等。 常见的引起爆炸事故的原因有：① 随意混合化学药品，并使其受热、受摩擦和 撞击。② 在密闭的体系中进行蒸馏、回流等加热操作。③ 在加压或减压实验中使用 了不耐压的玻璃仪器或反应过于激烈而失去控制。④ 易燃易爆气体大量逸入室内。 ⑤ 高压气瓶减压阀摔坏或失灵。 3．中毒 实验室常见的化学致癌物有：石棉、砷化物、铬酸盐、溴乙锭等。 剧毒物有：氰化物、砷化物、乙腈、甲醇、氯化氢、汞及其化合物等。 中毒的原因主要是由于不慎吸入、误食或由皮肤渗入。 中毒的预防：① 保护好眼睛最重要，使用有毒或有刺激性气体时，必须配戴防 护眼镜，并应在通风橱内进行。② 取用毒品时必须配戴橡皮手套。③ 严禁用嘴吸移 液管，严禁在实验室内饮水、进食、吸烟，禁止赤膊和穿拖鞋。④ 不要用乙醇等有 机溶剂擦洗溅洒在皮肤上的药品。 中毒急救的方法主要有：① 误食了酸和碱，不要催吐，可先立即大量饮水，误 食碱者再喝些牛奶，误食酸者，饮水后再服 Mg(OH)2 乳剂，最后饮些牛奶。② 吸入 了毒气，立即转移室外，解开衣领，休克者应施以人工呼吸，但不要用口对口法。③ 砷和汞中毒者应立即送医院急救。 4．外伤 （1）化学灼伤： ① 眼睛灼伤或掉进异物：眼内若溅入任何化学药品，应立即用大量水冲洗15min， 不可用稀酸或稀碱冲洗。若有玻璃碎片进入眼内则十分危险，必须十分小心谨慎，不 可自取，不可转动眼球，可任其流泪，若碎片不出，则用纱布轻轻包住眼睛急送医院 处理。若有木屑、尘粒等异物进入，可由他人翻开眼睑，用消毒棉签轻轻取出或任其 流泪，待异物排出后再滴几滴鱼肝油。 ② 皮肤灼伤：（a）酸灼伤：先用大量水洗，再用稀 NaHCO3 或稀氨水浸洗，最
后再用水洗。（b）碱灼伤：先用大量水冲洗，再用1%硼酸或2%醋酸浸洗，最后再用水洗。（c）漠灼伤：这很危险，伤口不易愈合，一旦灼伤，立即用20%硫代硫酸钠冲洗，再用大量水冲洗，包上消毒纱布后就医。（2）烫伤：使用火焰、蒸汽、红热的玻璃和金属时易发生烫伤，应立即用大量水冲洗和浸泡，若起水泡不可挑破，包上纱布后就医，预防轻度烫伤可涂抹鱼肝油和烫伤膏等。（3）割伤：这是生化实验室常见的伤害，要特别注意预防，尤其是在向橡皮塞中插入温度计、玻璃管时一定要用水或甘油润滑，用布包住玻璃管轻轻旋入，切不可用力过猛，若发生严重割伤时要立即包扎止血，就医时务必检查伤部神经是否被切断。实验室应准备一个完备的小药箱，专供急救时使用。药箱内备有：医用酒精、红药水、紫药水、止血粉、创口贴、烫伤油膏（或万花油）、鱼肝油、1%硼酸溶液或2%醋酸溶液、1%碳酸氢钠溶液、20%硫代硫酸钠溶液、医用镊子和剪刀、纱布、药棉、棉签、绷带等。5.触电实验室要使用大量的仪器、烘箱和电炉等，因此每位实验人员都必须能熟练地安全用电，避免发生一切用电事故。（1）防止触电：①不能用湿手接触电器。②电源裸露部分都应绝缘。③坏的接头、插头、插座和不良导线应及时更换。④先接好线路再插接电源，反之先关电源再拆线路。③仪器使用前要先检查外壳是否带电。③如遇有人触电要先切断电源再救人。（2）防止电器着火：①保险丝、电源线的截面积、插头和插座都要与使用的额定电流相匹配。②三条相线要平均用电。③生锈的电器、接触不良的导线接头要及时处理。④电炉、烘箱等电热设备不可过夜使用。③仪器长时间不用要拨下插头，并及时拉闸。③电器、电线着火时不可用泡沫灭火器灭火。三实验记录与实验报告1.实验记录详细、准确、如实地作好实验记录是极为重要的，记录如果有误，会使整个实验失败，这也是培养学生实验能力和严谨的科学作风的一个重要方面。（1）每位同学必须准备一个实验记录本，实验前认真预习实验，看懂实验原理4
4 后再用水洗。（b）碱灼伤：先用大量水冲洗，再用 1%硼酸或 2%醋酸浸洗，最后再用 水洗。（c）溴灼伤：这很危险，伤口不易愈合，一旦灼伤，立即用 20%硫代硫酸钠冲 洗，再用大量水冲洗，包上消毒纱布后就医。 （2）烫伤：使用火焰、蒸汽、红热的玻璃和金属时易发生烫伤，应立即用大量 水冲洗和浸泡，若起水泡不可挑破，包上纱布后就医，预防轻度烫伤可涂抹鱼肝油和 烫伤膏等。 （3）割伤：这是生化实验室常见的伤害，要特别注意预防，尤其是在向橡皮塞 中插入温度计、玻璃管时一定要用水或甘油润滑，用布包住玻璃管轻轻旋入，切不可 用力过猛，若发生严重割伤时要立即包扎止血，就医时务必检查伤部神经是否被切断。 实验室应准备一个完备的小药箱，专供急救时使用。药箱内备有：医用酒精、红 药水、紫药水、止血粉、创口贴、烫伤油膏（或万花油）、鱼肝油、1%硼酸溶液或 2% 醋酸溶液、1%碳酸氢钠溶液、20%硫代硫酸钠溶液、医用镊子和剪刀、纱布、药棉、 棉签、绷带等。 5．触电 实验室要使用大量的仪器、烘箱和电炉等，因此每位实验人员都必须能熟练地安 全用电，避免发生一切用电事故。 （1）防止触电：①不能用湿手接触电器。②电源裸露部分都应绝缘。③坏的接 头、插头、插座和不良导线应及时更换。④先接好线路再插接电源，反之先关电源再 拆线路。⑤仪器使用前要先检查外壳是否带电。⑥如遇有人触电要先切断电源再救人。 （2）防止电器着火：①保险丝、电源线的截面积、插头和插座都要与使用的额 定电流相匹配。②三条相线要平均用电。③生锈的电器、接触不良的导线接头要及时 处理。 ④电炉、烘箱等电热设备不可过夜使用。⑤仪器长时间不用要拔下插头，并及时拉闸。 ⑥电器、电线着火时不可用泡沫灭火器灭火。 三 实验记录与实验报告 1．实验记录 详细、准确、如实地作好实验记录是极为重要的，记录如果有误，会使整个实验 失败，这也是培养学生实验能力和严谨的科学作风的一个重要方面。 （1）每位同学必须准备一个实验记录本，实验前认真预习实验，看懂实验原理
和操作方法，在记录本上写好实验预习报告，包括详细的实验操作步骤（可以用流程图表示）和数据记录表格等。（2）记录本上要编好页数，不得撕缺和涂改，写错时可以划去重写。不得用铅笔记录，只能用钢笔和圆珠笔。记录本的左页作计算和草稿用，右页用作预习报告和实验记录。同组的两位同学合做同一实验时，两人必须都有相同、完整的记录。（3）实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量的数据，条理清楚，字迹端正，切不可草以致日后无法辨认。实验记录必须公正客观，不可夹杂主观因素。（4）实验中要记录的各种数据，都应事先在记录本上设计好各种记录格式和表格，以免实验中由于忙乱而遗漏测量和记录，造成不可挽回的损失。（5）实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为"0.050”，而不能记成"0.05”。每个结果都要尽可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差很大，也都应如实记录，不得涂改。（6）实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物材料的来源、形态特征、健康状况、选用的组织及其重量等：试剂的规格、化学式、分子量、试剂的浓度等，都应记录清楚。二人一组的实验，必须每人都作记录。2.实验报告实验报告是实验的总结和汇报，通过实验报告的写作可以分析总结实验的经验和同题，学会处理各种实验数据的方法，加深对有关生物化学原理和实验技术的理解和掌握，同时也是学习撰写科学研究论文的过程。实验报告的格式应为：实验目的：②实验原理：③仪器和试剂：④实验步骤：③数据处理：③结果讨论每个实验报告都要按照上述要求来写，实验报告的写作水平也是衡量学生实验成绩的一个重要方面。实验报告必须独立完成，严禁抄装。写实验报告要用实验报告专用纸，以便教师批阅，不要用练习本和其他片页纸。为了使实验结果能够重复，必须详细记录实验现象的所有细节，例如，若实验中生成沉淀，那么沉淀的真实颜色是什么，是白色、淡黄色或是其他？沉淀的量是多还是少，是胶状还是颗粒状？什么时候形成沉淀，立即生成还是缓慢生成，热时生成还是冷却时生成？在科学研究中，仔细地观察，特别注意那些未预想到的实验现象是十分重要的，这些观察常常引起意外的发现，报告并注意分析实验中的真实发现，对学生将是非常重要的科学研究训练。实验报告使用的语言要简明清楚，抓住关键，各种实验数据都要尽可能整理成表5
5 和操作方法，在记录本上写好实验预习报告，包括详细的实验操作步骤（可以用流程 图表示）和数据记录表格等。 （2）记录本上要编好页数，不得撕缺和涂改，写错时可以划去重写。不得用铅 笔记录，只能用钢笔和圆珠笔。记录本的左页作计算和草稿用，右页用作预习报告和 实验记录。同组的两位同学合做同一实验时，两人必须都有相同、完整的记录。 （3）实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量的数据，条理清楚，字迹 端正，切不可潦草以致日后无法辨认。实验记录必须公正客观，不可夹杂主观因素。 （4）实验中要记录的各种数据，都应事先在记录本上设计好各种记录格式和表 格，以免实验中由于忙乱而遗漏测量和记录，造成不可挽回的损失。 （5）实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。 每个结果都要尽可能重复观测二次以上，即使观测的数据相同或偏差很大，也都应如 实记录，不得涂改。 （6）实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物 材料的来源、形态特征、健康状况、选用的组织及其重量等；试剂的规格、化学式、 分子量、试剂的浓度等，都应记录清楚。二人一组的实验，必须每人都作记录。 2．实验报告 实验报告是实验的总结和汇报，通过实验报告的写作可以分析总结实验的经验和 问题，学会处理各种实验数据的方法，加深对有关生物化学原理和实验技术的理解和 掌握，同时也是学习撰写科学研究论文的过程。实验报告的格式应为：① 实验目的； ② 实验原理；③ 仪器和试剂；④ 实验步骤；⑤ 数据处理；⑥ 结果讨论。 每个实验报告都要按照上述要求来写，实验报告的写作水平也是衡量学生实验成 绩的一个重要方面。实验报告必须独立完成，严禁抄袭。写实验报告要用实验报告专 用纸，以便教师批阅，不要用练习本和其他片页纸。 为了使实验结果能够重复，必须详细记录实验现象的所有细节，例如，若实验中 生成沉淀，那么沉淀的真实颜色是什么，是白色、淡黄色或是其他？沉淀的量是多还 是少，是胶状还是颗粒状？什么时候形成沉淀，立即生成还是缓慢生成，热时生成还 是冷却时生成？在科学研究中，仔细地观察，特别注意那些未预想到的实验现象是十 分重要的，这些观察常常引起意外的发现，报告并注意分析实验中的真实发现，对学 生将是非常重要的科学研究训练。 实验报告使用的语言要简明清楚，抓住关键，各种实验数据都要尽可能整理成表
格并作图表示之，以便比较，一目了然。实验作图尤其要严格要求，必须使用坐标纸，每个图都要有明显的标题，坐标轴的名称要清楚完整，要注明合适的单位，坐标轴的分度数字要与有效数字相符，并尽可能简明，若数字太大，可以化简，并在坐标轴的单位上乘以10的方次。实验点要使用专门设计的符号，如：0、·、口、、△、等，符号的大小要与实验数据的误差相符。不要用“×、十”和“”小圆点。有时也可用两端有小横线的垂直线段来表示实验点，其线段的长度与实验误差相符。通常横轴是自变量，往往知道的很准确，纵轴是应变量，是测量的数据。曲线要用曲线板或曲线尺画成光滑连续的曲线，各实验点均匀分布在曲线上和曲线两边，且曲线不可超越最后一个实验点。两条以上的曲线和符号应有说明。实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有关的文献和教科书，充分运用已学过的知识和生物化学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析和见解，并欢迎对实验提出改进意见。6
6 格并作图表示之，以便比较，一目了然。实验作图尤其要严格要求，必须使用坐标纸， 每个图都要有明显的标题，坐标轴的名称要清楚完整，要注明合适的单位，坐标轴的 分度数字要与有效数字相符，并尽可能简明，若数字太大，可以化简，并在坐标轴的 单位上乘以 10 的方次。实验点要使用专门设计的符号，如：○、●、□、■、△、▲等， 符号的大小要与实验数据的误差相符。不要用“×、＋”和“·”小圆点。有时也可用两端 有小横线的垂直线段来表示实验点，其线段的长度与实验误差相符。通常横轴是自变 量，往往知道的很准确，纵轴是应变量，是测量的数据。曲线要用曲线板或曲线尺画 成光滑连续的曲线，各实验点均匀分布在曲线上和曲线两边，且曲线不可超越最后一 个实验点。两条以上的曲线和符号应有说明。 实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有关的文献和教科书，充分运用已学 过的知识和生物化学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析和见解，并欢 迎对实验提出改进意见
第一章生物化学试验技术实验一蛋白质的显色反应蛋白质是由很多氨基酸通过特殊的结构而形成的，氨基酸以及这些特殊的结构与化学试剂作用而产生颜色，称呈色反应。蛋白质的呈色反应非常灵敏，常用作检验蛋白质和某些氨基酸的反应，也是定量测定的依据。一、双缩脲反应（一）原理将尿素加热，则两个分子的尿素放出一个分子的氨而形成双缩脲。NH2C:-0NH2A2NHO+ NH3C=0NH2NH2尿素双缩脲双缩脲在碱性溶液中与Cu2+结合生成的复合物，这一反应称为双缩脲反应。OHOHNH2HNCOCO--NH-0CuNH+ Cu(OH2+ 2NaOHNHNHNa NaC=0CO-NH2H,NCONH2OHOH双缩脲铜-钠-双缩脲配合物双缩脲反应不仅只为双缩脲所特有，凡含有二个以上CO一NH一基的物质均可呈现此反应。蛋白质和肽（三肽以上）则属此类物质，若蛋白质溶液中含有铵盐，如(NH4)2SO4，则产生兰色铜胺复盐，使呈色结果不易观察，若溶液中含有MgSO4时与碱反应生成Mg(OH)2沉淀阻碍反应进行，这两种干扰素都可通过加人大量的NaOH而排除。（二）材料、仪器及试剂1.材料1%卵清蛋白：除去卵黄的鸡蛋白（约含蛋白质11%）加9倍水搅拌，数层纱布过滤。2.仪器：7
7 第一章 生物化学试验技术 实验一 蛋白质的显色反应 蛋白质是由很多氨基酸通过特殊的结构而形成的，氨基酸以及这些特殊的结构与 化学试剂作用而产生颜色，称呈色反应。蛋白质的呈色反应非常灵敏，常用作检验蛋 白质和某些氨基酸的反应，也是定量测定的依据。 一、双缩脲反应 （一）原理 将尿素加热，则两个分子的尿素放出一个分子的氨而形成双缩脲。 NH2 C O NH2 + NH3 NH2 C O NH C O NH2 2 尿素 双缩脲 双缩脲在碱性溶液中与 Cu2+结合生成的复合物，这一反应称为双缩脲反应。 + NH2 C O NH C O NH2 双缩脲 Cu(OH)2 + 2NaOH CO NH2 OH Cu H2N CO OH CO NH2 OH Na H2N CO Na OH NH NH 铜-钠-双缩脲配合物 双缩脲反应不仅只为双缩脲所特有，凡含有二个以上 CO—NH—基的物质均可呈 现此反应。蛋白质和肽（三肽以上）则属此类物质，若蛋白质溶液中含有铵盐，如 (NH4)2SO4，则产生兰色铜胺复盐，使呈色结果不易观察，若溶液中含有 MgSO4 时与 碱反应生成 Mg(OH)2 沉淀阻碍反应进行，这两种干扰素都可通过加人大量的 NaOH 而排除。 （二）材料、仪器及试剂 1．材料 1％卵清蛋白：除去卵黄的鸡蛋白（约含蛋白质 11％）加 9 倍水搅拌，数层纱布 过滤。 2．仪器：