饵料与生态实验指导书动物科学专业用集美大学水产学院2009年2月
饵料与生态实验指导书 动物科学专业用 集美大学水产学院 2009 年 2 月
目录实验操作守则实验报告要求实验一生物饵料培养2实验二鱼虾的食料分析..11实验三水产品中重金属残留的测定12实验四15水产品中农药残留的测定实验五浮游植物种间竞争18实验六盐度对海洋动物存活率的影响19
目 录 实验操作守则. 1 实验报告要求. 1 实验一 生物饵料培养. 2 实验二 鱼虾的食料分析.11 实验三 水产品中重金属残留的测定. 12 实验四 水产品中农药残留的测定. 15 实验五 浮游植物种间竞争. 18 实验六 盐度对海洋动物存活率的影响 . 19
实验操作守则1.实验前必须详细阅读实验指导书，明确实验目的、要求和内容，并写出预习报告。2.实验前要认真听取教师讲解，不要乱动仪器设备、药品。3.注意安全操作，特别小心使用电炉、烘箱、酒精灯等仪器及乙醚、丙酮等易燃药品。4.爱护仪器设备，节约水电、试剂。对精密仪器如电子天平、分光光度计等应先熟悉使用方法。5.实验室内应保持安静、清洁、整齐、严禁吸烟。6.实验结束后，应检查水电是否关闭。所用试剂、仪器物品妥当收放好，并整理干净。7.按时完成实验操作和实验报告。8.因操作不慎损坏仪器者，按学校规定处理赔偿。9.每位同学需按排位就座。实验报告要求每位同学要准备一本笔记薄。在做好每一个操作步骤的同时，随时把观察的情况及实验数据记录下来：记录数据不能随便涂改，实验后即整理记录，计算结果，写成书面报告，好的实验报告应是写得十分详尽和具科学性，文字端正而通顺。实验报告格式：一、预习报告要求：1.实验题目和日期2.实验的目地和意义：清楚抛要地叙述本次实验所要说明的问题：3.实验仪器和材料：点出本实验所用的仪器和材料：4.实验步骤：理出整个实验的操作步骤及顺序。二、实验报告要求：1.实际操作步骤或过程：详尽叙述实验的操作过程及观察到的一切情况：2.实验结果：详尽记录所得数据，并将计算结果列表或绘成曲线：3.讨论与总结：应简要总结与概括所得结论及体会。1
1 实验操作守则 1. 实验前必须详细阅读实验指导书，明确实验目的、要求和内容，并写出预习报告。 2. 实验前要认真听取教师讲解，不要乱动仪器设备、药品。 3. 注意安全操作，特别小心使用电炉、烘箱、酒精灯等仪器及乙醚、丙酮等易燃药品。 4. 爱护仪器设备，节约水电、试剂。对精密仪器如电子天平、分光光度计等应先熟悉使用 方法。 5. 实验室内应保持安静、清洁、整齐、严禁吸烟。 6. 实验结束后，应检查水电是否关闭。所用试剂、仪器物品妥当收放好，并整理干净。 7. 按时完成实验操作和实验报告。 8. 因操作不慎损坏仪器者，按学校规定处理赔偿。 9. 每位同学需按排位就座。 实验报告要求 每位同学要准备一本笔记簿。在做好每一个操作步骤的同时，随时把观察的情况及实 验数据记录下来；记录数据不能随便涂改，实验后即整理记录，计算结果，写成书面报告， 好的实验报告应是写得十分详尽和具科学性，文字端正而通顺。 实验报告格式： 一、预习报告要求： 1.实验题目和日期 2.实验的目地和意义：清楚扼要地叙述本次实验所要说明的问题； 3.实验仪器和材料：点出本实验所用的仪器和材料； 4.实验步骤：理出整个实验的操作步骤及顺序。 二、实验报告要求： 1.实际操作步骤或过程：详尽叙述实验的操作过程及观察到的一切情况； 2.实验结果：详尽记录所得数据，并将计算结果列表或绘成曲线； 3.讨论与总结：应简要总结与概括所得结论及体会
实验一生物饵料培养附：器血的消毒与灭菌（一）目的1.学习器皿的消毒与灭菌知识，并掌握其方法：2.清洗好实验用的器血，为光合细菌和微藻的培养实验做好准备。（二）器材锥形瓶、烧杯、吸管、废报纸、试管刷、肥皂、硫酸、烘箱（三）消毒与灭菌知识1.消毒消毒和灭菌的意义是有区别的，灭菌是指用物理或化学的方法杀死微生物，包括营养体和芽孢，当只杀死营养体而不杀死芽孢时叫消毒。生物饵料培养实验所用的容器、工具需要灭菌，而在一般生产的单种培养只要消毒就可以了。（1）加热消毒法：加热消毒法是利用高温杀死微生物的方法，不能耐高温的塑料、橡胶制品不能用此法消毒。①直接灼烧消毒：接种环、镊子、试管口、瓶口等可直接在酒精灯火焰上短暂灼热消毒。②煮沸消毒：把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般在水中煮沸1020min，以大型的锥形瓶可在瓶内加进少量淡水，在瓶口放上漏斗，再在漏斗口放一称量瓶盖，加热煮沸5～10min，让蒸汽在瓶中熏热消毒。③烘箱消毒：将玻璃容器，金属工具洗涤干净后放入烘箱中，关闭烘箱门，打开通气孔，接通电源，加热，待温度上升至140℃时关闭电源开关，等烘箱温度逐渐下降到60℃以下，方可打开烘箱门，然后把消毒器皿用消毒纸逐一包装待用。（2）化学药品消毒法：在大规模培养光合细菌和微藻类的生产中，大型容器、工具及培养池一般常用化学药品消毒。①漂白粉(CaOCl2）：工业上用的漂白粉一般含有效氯25～35%，消毒时按万分之一到三（100～300ppm）的水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡30min，再用消毒水（经过煮沸或沉淀过滤处理的水）冲洗3一4次即成。白瓷砖池、水泥池的消毒可配成高浓度浆糊状的漂白粉溶液淋洒池壁与底部，30min后用消毒水冲洗干净，24h后方可接种微藻类。②酒精（CHsOH）：常用于小、中型容器与工具的消毒，方法是用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹，5min后用消毒水冲洗2次即可。③高锰酸钾(KMnO4)：把洗净的容器、工具放在万分之三（300ppm）的高锰酸钾溶液浸泡5min，取出后用消毒水冲洗2一3次即成。白瓷砖池、水泥池可用高锰酸钾水溶液向池壁淋洒几遍，15min后，再用消毒水冲洗干净。高锰酸钾必须当天配制当天使用，而且浸泡时间不宜超过1h，否则留下的痕迹很难洗刷于净，④石炭酸（酚）：消毒时按35%的比例配成溶液，把洗涤清洁的容器、工具在溶液中浸泡30min，再用消毒水冲洗2一3次即可。2.灭菌对任何培养基或器材进行灭菌，必须注意做到既要杀死所带的微生物，但又不能破坏它们的基本性质。为此，必须根据不同情况采用不同的灭菌方式。（1）干热灭菌法2
2 实验一 生物饵料培养 附：器皿的消毒与灭菌 （一）目的 1. 学习器皿的消毒与灭菌知识，并掌握其方法； 2. 清洗好实验用的器皿，为光合细菌和微藻的培养实验做好准备。 （二）器材 锥形瓶、烧杯、吸管、废报纸、试管刷、肥皂、硫酸、烘箱 （三）消毒与灭菌知识 1. 消毒 消毒和灭菌的意义是有区别的，灭菌是指用物理或化学的方法杀死微生物，包括营养 体和芽孢，当只杀死营养体而不杀死芽孢时叫消毒。生物饵料培养实验所用的容器、工具 需要灭菌，而在一般生产的单种培养只要消毒就可以了。 （1）加热消毒法：加热消毒法是利用高温杀死微生物的方法，不能耐高温的塑料、 橡胶制品不能用此法消毒。 ①直接灼烧消毒：接种环、镊子、试管口、瓶口等可直接在酒精灯火焰上短暂灼热消 毒。 ②煮沸消毒：把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般在水中煮沸 10～20min， 以大型的锥形瓶可在瓶内加进少量淡水，在瓶口放上漏斗，再在漏斗口放一称量瓶盖，加 热煮沸 5～10min，让蒸汽在瓶中熏热消毒。 ③烘箱消毒：将玻璃容器，金属工具洗涤干净后放入烘箱中，关闭烘箱门，打开通气 孔，接通电源，加热，待温度上升至 140℃时关闭电源开关，等烘箱温度逐渐下降到 60℃ 以下，方可打开烘箱门，然后把消毒器皿用消毒纸逐一包装待用。 （2）化学药品消毒法：在大规模培养光合细菌和微藻类的生产中，大型容器、工具 及培养池一般常用化学药品消毒。 ①漂白粉(CaOCl2) ：工业上用的漂白粉一般含有效氯 25～35%，消毒时按万分之一 到三（100～300ppm）的水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡 30min，再用消毒水（经过 煮沸或沉淀过滤处理的水）冲洗 3—4 次即成。白瓷砖池、水泥池的消毒可配成高浓度浆 糊状的漂白粉溶液淋洒池壁与底部，30min 后用消毒水冲洗干净，24h 后方可接种微藻类。 ②酒精(C2H5OH) ：常用于小、中型容器与工具的消毒，方法是用纱布蘸 70%酒精在 容器、工具的表面涂抹，5min 后用消毒水冲洗 2 次即可。 ③高锰酸钾(KMnO4)：把洗净的容器、工具放在万分之三（300ppm）的高锰酸钾溶液 浸泡 5min，取出后用消毒水冲洗 2—3 次即成。白瓷砖池、水泥池可用高锰酸钾水溶液向 池壁淋洒几遍，15min 后，再用消毒水冲洗干净。高锰酸钾必须当天配制当天使用，而且 浸泡时间不宜超过 1h，否则留下的痕迹很难洗刷干净。 ④石炭酸（酚）：消毒时按 3～5%的比例配成溶液，把洗涤清洁的容器、工具在溶液 中浸泡 30min，再用消毒水冲洗 2—3 次即可。 2. 灭菌 对任何培养基或器材进行灭菌，必须注意做到既要杀死所带的微生物，但又不能破坏 它们的基本性质。为此，必须根据不同情况采用不同的灭菌方式。 （1）干热灭菌法
①灼烧：接种环、镊子、试管口等可直接在酒精灯上灼烧，酒精灯燃烧时其周围的气温也随着升高，用于无菌操作。②烘箱：把烘箱的温度调节到160℃，并保持2h后可达到灭菌的目的。但含有水份的物质，如培养基等不能用此法灭菌。（2）温热灭菌法①高压蒸汽灭菌：手提式高压灭菌锅是一个耐压的金属锅，在锅里盛3L的水后，把灭菌的物品（温或干均可）置于消毒桶，并移入锅中的底架上，盖上锅盖并旋紧螺栓，打开放汽阀，在加热至放气阀白烟冒直时，关紧放气阀，待压力表指针指定15磅/英寸，并维持15～30min就可杀死一切微生物的营养体和芽孢。然后关掉电源，让其自然冷却至无压力时，方可打开锅盖取出物品。每次使用都得重新加水至3L。②间歇灭菌：在没有高压灭菌设备或在高温灭菌易破坏营养的情况下，用蒸汽锅（或普通锅）蒸锅至温度不超过100℃，隔24h后再蒸煮，反复三次，能灭菌。③过滤除菌：对于加热会变化的培养基或溶液，可用经灭菌的细胞过滤器。减压抽滤来除去其中含有的微生物。④紫外线灭菌：波长200～300nm的紫外线具有杀菌作用，手术室、接种室和空气中微生物常用此法灭菌。③药物灭菌A.0.1%升汞液用于器皿表面杀菌或实验后的废弃物处理。B.70～75%的酒精，用于烧红冷却后的接种针、操作前或器具的表面杀菌。玻片、盖玻片的浸泡等。C.5%新洁尔灭溶液稀释至万分之一到千分之一，用于工作环境和器血表面的灭菌，D.40%甲醛溶液用于空气熏蒸灭菌，将消毒空间密闭，维持24h。E.5%石炭酸（酚），用于处理器械或作喷雾消毒。（四）步骤1.清洗：把锥形瓶、烧杯等用肥皂水刷洗三遍，倒置架（桌）上凉干；2.酸洗：锥形瓶作为培养微藻类和光合细菌之用，为把旧瓶中的残留有机物破坏，需经一道酸洗工序，即把少许浓硫酸倒入干净瓶，小心倾斜转动，使硫酸遍布流经瓶内壁，然后倒入另瓶或回收，最后经10多遍自来水冲洗去酸，倒置架上凉干。3.消毒：将锥形瓶、烧杯放入烘箱，加热至140℃，隔断电源，待冷却至60℃左右，将锥形瓶用无菌纸（或棉塞）封口，套上橡皮筋，收藏待用。（五）作业1.以每2人为一组，洗涤1大瓶2小瓶。并收藏好消毒和灭菌后的器皿。2.写一份详细的实验报告。注意：洗涤要认真，洗后要检查。一、光合细菌（PhotoSyntheticBacteria）的形态观察与培养（一）目的1.观察光合细菌的形态特征：2.学习光合细菌的室内培养方法。（二）器材电子天平、称量瓶、药匙、显微镜、载玻片、吸管、1000ml和50ml三角烧瓶、蒸馏水（或海水）、光合细菌的培养材料、配方中的药品3
3 ①灼烧：接种环、镊子、试管口等可直接在酒精灯上灼烧，酒精灯燃烧时其周围的气 温也随着升高，用于无菌操作。 ②烘箱：把烘箱的温度调节到 160℃，并保持 2h 后可达到灭菌的目的。但含有水份的 物质，如培养基等不能用此法灭菌。 （2）温热灭菌法 ①高压蒸汽灭菌：手提式高压灭菌锅是一个耐压的金属锅，在锅里盛 3L 的水后，把 灭菌的物品（温或干均可）置于消毒桶，并移入锅中的底架上，盖上锅盖并旋紧螺栓，打 开放汽阀，在加热至放气阀白烟冒直时，关紧放气阀，待压力表指针指定 15 磅/英寸，并 维持 15～30min 就可杀死一切微生物的营养体和芽孢。然后关掉电源，让其自然冷却至无 压力时，方可打开锅盖取出物品。每次使用都得重新加水至 3L。 ②间歇灭菌：在没有高压灭菌设备或在高温灭菌易破坏营养的情况下，用蒸汽锅（或 普通锅）蒸锅至温度不超过 100℃，隔 24h 后再蒸煮，反复三次，能灭菌。 ③过滤除菌：对于加热会变化的培养基或溶液，可用经灭菌的细胞过滤器。减压抽滤 来除去其中含有的微生物。 ④紫外线灭菌：波长 200～300nm 的紫外线具有杀菌作用，手术室、接种室和空气中 微生物常用此法灭菌。 ⑤药物灭菌 A. 0.1%升汞液用于器皿表面杀菌或实验后的废弃物处理。 B. 70～75%的酒精，用于烧红冷却后的接种针、操作前或器具的表面杀菌。玻片、盖 玻片的浸泡等。 C. 5%新洁尔灭溶液稀释至万分之一到千分之一，用于工作环境和器皿表面的灭菌。 D. 40%甲醛溶液用于空气熏蒸灭菌，将消毒空间密闭，维持 24h。 E. 5%石炭酸（酚），用于处理器械或作喷雾消毒。 （四）步骤 1. 清洗：把锥形瓶、烧杯等用肥皂水刷洗三遍，倒置架（桌）上凉干； 2. 酸洗：锥形瓶作为培养微藻类和光合细菌之用，为把旧瓶中的残留有机物破坏，需 经一道酸洗工序，即把少许浓硫酸倒入干净瓶，小心倾斜转动，使硫酸遍布流经瓶内壁， 然后倒入另瓶或回收，最后经 10 多遍自来水冲洗去酸，倒置架上凉干。 3. 消毒：将锥形瓶、烧杯放入烘箱，加热至 140℃，隔断电源，待冷却至 60℃左右， 将锥形瓶用无菌纸（或棉塞）封口，套上橡皮筋，收藏待用。 （五）作业 1. 以每 2 人为一组，洗涤 1 大瓶 2 小瓶。并收藏好消毒和灭菌后的器皿。 2. 写一份详细的实验报告。 注意： 洗涤要认真，洗后要检查。 一、光合细菌（Photo Synthetic Bacteria）的形态观察与培养 （一）目的 1. 观察光合细菌的形态特征； 2. 学习光合细菌的室内培养方法。 （二）器材 电子天平、称量瓶、药匙、显微镜、载玻片、吸管、1000ml 和 50ml 三角烧 瓶、蒸馏水（或海水）、光合细菌的培养材料、配方中的药品
（三）步骤1.培养基的配制：根据所培养的光合细菌的菌种不同，选用不同的水源配制培养基，如果菌种为淡水种，用自来水或蒸馏水配制；如果菌种为海水种，则用天然过滤海水配制。按培养基配方把所列物质称量（复合维生素B除外），混合溶解，再煮沸或灭菌，冷却后加入复合维生素B，备用。酵母膏3g蛋白陈3gCaCh20.3g0.5gMgSO4-7H20蒸馏水（或海水）1000ml6.8pH2.形态观察：先将光合细菌的培养材料摇匀，倒出少许于一小烧杯中，用吸管取1滴置于载玻片上，加上盖玻片，先在低倍镜下观察，后转至高倍镜下观察：小园形且数量多，会缓慢运动。3.培养：将培养基装入50ml或100ml三角烧瓶（装2/3），再将光合细菌种倒入三角烧瓶至满，摇匀，倒出少许于一小烧杯中，用血球计数板计数。用保鲜膜加橡胶圈密封。经1～2周培养即可见菌液颜色由橙黄色转变为红褐色，再计数。4.计数方法：将三角烧瓶摇匀后，倒出少许于一小烧杯中，用移液管取1ml置25m或50ml烧杯中，加入蒸馏水24ml或49ml稀释，用血球计数板计数。（四）作业1.试比较光合细菌与微藻类培养方法的不同之处，为什么？2.掌握光合细菌的培养方法。3.写一份详细的实验报告。二、微藻的形态观察与培养（一）饵用微藻类的形态观察1、目的1）重新认识、学习显微镜的使用方法和描绘生物图：2.）观察饵用绿藻、金黄藻、硅藻类、蓝藻类的形态特征；2、器材显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、常见饵用微藻类、鲁哥氏（lugois）液（即碘液）等培养材料3、步骤将各微藻种类的培养材料摇匀，用专用吸管取观察材料置于载玻片上1一2滴，慢慢盖上玻片，先在低倍镜下观察，后逐渐转至中倍和高倍镜下观察，在低倍镜下可观察到种类的大小轮部、运动情况，然后在中倍镜下时，从盖玻片边缘加进半滴碘液，可以看到运动种类遇到碘液时随即死亡。最后在高倍镜下详细观察固定后的细胞形态特征。1）绿藻类：特征：色素体绿色，杯状。①衣藻（Chlamydomonassp.）：单细胞，卵形，细胞壁平清，细胞前端中央常有乳头4
4 （三）步骤 1. 培养基的配制：根据所培养的光合细菌的菌种不同，选用不同的水源配制培养基， 如果菌种为淡水种，用自来水或蒸馏水配制；如果菌种为海水种，则用天然过滤海水配制。 按培养基配方把所列物质称量（复合维生素 B 除外），混合溶解，再煮沸或灭菌，冷却后 加入复合维生素 B，备用。 酵母膏 3g 蛋白胨 3g CaCl2 0.3g MgSO4·7H2O 0.5g 蒸馏水（或海水） 1000ml pH 6.8 2. 形态观察：先将光合细菌的培养材料摇匀，倒出少许于一小烧杯中，用吸管取 1 滴 置于载玻片上，加上盖玻片，先在低倍镜下观察，后转至高倍镜下观察：小园形且数量多， 会缓慢运动。 3. 培养：将培养基装入 50m1 或 100ml 三角烧瓶（装 2/3），再将光合细菌种倒入三角 烧瓶至满，摇匀，倒出少许于一小烧杯中，用血球计数板计数。用保鲜膜加橡胶圈密封。 经 1～2 周培养即可见菌液颜色由橙黄色转变为红褐色，再计数。 4. 计数方法：将三角烧瓶摇匀后，倒出少许于一小烧杯中，用移液管取 1ml 置 25ml 或 50ml 烧杯中，加入蒸馏水 24ml 或 49ml 稀释，用血球计数板计数。 （四）作业 1. 试比较光合细菌与微藻类培养方法的不同之处，为什么？ 2. 掌握光合细菌的培养方法。 3. 写一份详细的实验报告。 二、微藻的形态观察与培养 （一）饵用微藻类的形态观察 1、目的 1） 重新认识、学习显微镜的使用方法和描绘生物图； 2.）观察饵用绿藻、金黄藻、硅藻类、蓝藻类的形态特征； 2、器材 显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、常见饵用微藻类、鲁哥氏（lugois）液（即 碘液）等培养材料 3、步骤 将各微藻种类的培养材料摇匀，用专用吸管取观察材料置于载玻片上 1—2 滴，慢慢 盖上玻片，先在低倍镜下观察，后逐渐转至中倍和高倍镜下观察，在低倍镜下可观察到种 类的大小轮廓、运动情况，然后在中倍镜下时，从盖玻片边缘加进半滴碘液，可以看到运 动种类遇到碘液时随即死亡。最后在高倍镜下详细观察固定后的细胞形态特征。 1） 绿藻类：特征：色素体绿色，杯状。 ①衣藻（Chlamydomonas sp.）：单细胞，卵形，细胞壁平清，细胞前端中央常有乳头
状突起，前端基部着生2条等长的鞭毛，鞭毛基部具1一2个伸缩泡，色素体1个，杯状，绿色，有蛋白核，色素体和碘的作用呈褐色至灰黑色，蛋白核呈暗紫至黑色。细胞核呈淡黄褐色，1个眼点桔红色位于细胞一侧。②亚心形扁藻（Platymonassubcordiformis）：单生，体背后部略隆起，腹平坦，前端较宽阔，中间有浅凹陷由基部处着生4条不等长的鞭毛，鞭毛要在较暗视野方能观察到，1红色眼点位于蛋白核旁，蛋白核大型，向上开口。色素体绿色，杯状。在色素体外有细胞核1个。③青岛大扁藻（Phelgolandica）：形态特征与亚心形扁藻相似，只是个体比其大，且有多眼点的现象。④盐藻（Dunaliellasalina）：单生，细胞梨形，前端着生2条长鞭毛（比细胞长约1/3），色素体杯状，有1个具鞘的蛋白核，细胞核位于原生质中，眼点大，位于体的前端。蛋白核小球藻（Chlorellapyrenoidosa）：单生，细胞球形，具杯状色素体，蛋白核球形，细胞核位于中央。2）金黄藻类：特征：色素体褐色，侧生。①湛江叉鞭金藻(Dicrateriazhanjiangensis)：单生，细胞球形，具2条等长的鞭毛，且和细胞等长。色素体侧生，黄褐色。液泡1一3个，分散在细胞质中。细胞前端或后端常具1个白糖素体，白糖素与碘液不呈色，系白色不透明状。②球等鞭金藻（Isochrysisgalbana）：单生，无细胞壁，形状长椭圆形，具2条等长的长鞭毛约为细胞1一2倍，细胞运动缓慢，是其他运动种类所没有的特点。色素体2片，位置不固定，常是侧生、金黄色乃至褐色、1个暗红色眼点位于中央位置。细胞核1个，中位。代谢产物的白糖体随个体生长而长大。观察球等鞭金藻的群胶相。异胶藻（Hetcrogloeasp.）：属黄藻类。单生，细胞长圆形，色素体1块，侧生，黄绿色。3）蓝藻类：钝顶螺旋藻（Spiralinaplatensis）：细胞近方形，长26um、宽6~8um，藻丝由多细胞组成，兰绿色，横壁略收益。螺旋疏松，螺宽26～36um，旋间距43～57um，细胞内有颗粒体，横壁处无颗粒，未端细胞宽园形。4）硅藻类：特征：色素体黄褐色，块状。①三角褐藻（Phacodactylumtricorntun）：细胞有三出放射形和棱形的，以前者的数量多，后者少，细胞中心部分有一个细胞核，有黄褐色的色素体1一3片。棱形细胞两端略钝，弯向同侧，形态同小新月菱形藻。在固体培养基内会出现卵园形。②小新月菱形藻（Nitzschiaclesrtum）：细胞壁壳面中央膨大，呈纺锤形，两端渐尖，皆朝同方向弯曲。色素体黄褐色2片，位于细胞中央的两侧。③牟勒氏角毛藻（Chaetocerosmuelleri)：绝大多数是单生，偶有2一3个细胞组成群体，壳面椭圆至圆形，中央略凸或平坦。壳环皇长方形至四角形，壳环带不明显，角毛细而长，末端尖，自细胞角长出，几乎与纵轴平行，需调节光源在较暗视野可以看出，或角毛收缩。色素体1个，片状，黄褐色。④简单钙质角毛藻（Chaetocerossimplexvar.calcitrans）：形态同牟勒氏角毛藻，只休眠孢壳上具有细小的刺，而牟勒氏角毛藻的休眠孢的初生壳和次生壳皆光滑无刺。③中肋骨条藻（Skeletonemacostatum）：链状群体，细胞透镜形或圆柱形，壳面圆而5
5 状突起，前端基部着生 2 条等长的鞭毛，鞭毛基部具 1—2 个伸缩泡，色素体 1 个，杯状， 绿色，有蛋白核，色素体和碘的作用呈褐色至灰黑色，蛋白核呈暗紫至黑色。细胞核呈淡 黄褐色，1 个眼点桔红色位于细胞一侧。 ②亚心形扁藻（Platymonas subcordiformis）：单生，体背后部略隆起，腹平坦，前端 较宽阔，中间有浅凹陷由基部处着生 4 条不等长的鞭毛，鞭毛要在较暗视野方能观察到， 1 红色眼点位于蛋白核旁，蛋白核大型，向上开口。色素体绿色，杯状。在色素体外有细 胞核 1 个。 ③青岛大扁藻（P.helgolandica）：形态特征与亚心形扁藻相似，只是个体比其大，且 有多眼点的现象。 ④盐藻（Dunaliella salina）：单生，细胞梨形，前端着生 2 条长鞭毛（比细胞长约 1/3）， 色素体杯状，有 1 个具鞘的蛋白核，细胞核位于原生质中，眼点大，位于体的前端。 ⑤蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）：单生，细胞球形，具杯状色素体，蛋白核 球形，细胞核位于中央。 2）金黄藻类：特征：色素体褐色，侧生。 ①湛江叉鞭金藻(Dicrateria zhanjiangensis)：单生，细胞球形，具2条等长的鞭毛，且 和细胞等长。色素体侧生，黄褐色。液泡1—3个，分散在细胞质中。细胞前端或后端常具 1个白糖素体，白糖素与碘液不呈色，系白色不透明状。 ②球等鞭金藻（Isochrysis galbana）：单生，无细胞壁，形状长椭圆形，具 2 条等长的 长鞭毛约为细胞 1—2 倍，细胞运动缓慢，是其他运动种类所没有的特点。色素体 2 片， 位置不固定，常是侧生、金黄色乃至褐色、1 个暗红色眼点位于中央位置。细胞核 1 个， 中位。代谢产物的白糖体随个体生长而长大。 观察球等鞭金藻的群胶相。 ③异胶藻（Hetcrogloea sp.）：属黄藻类。单生，细胞长圆形，色素体 1 块，侧生，黄 绿色。 3）蓝藻类： 钝顶螺旋藻（Spiralina platensis）：细胞近方形，长 2～6μm、宽 6～8μm，藻丝由多细 胞组成，兰绿色，横壁略收益。螺旋疏松，螺宽 26～36μm，旋间距 43～57μm，细胞内有 颗粒体，横壁处无颗粒，末端细胞宽园形。 4）硅藻类：特征：色素体黄褐色，块状。 ①三角褐藻（Phacodactylum tricorntun）：细胞有三出放射形和棱形的，以前者的数量 多，后者少，细胞中心部分有一个细胞核，有黄褐色的色素体 1—3 片。棱形细胞两端略 钝，弯向同侧，形态同小新月菱形藻。在固体培养基内会出现卵园形。 ②小新月菱形藻（Nitzschia clesrtum）：细胞壁壳面中央膨大，呈纺锤形，两端渐尖， 皆朝同方向弯曲。色素体黄褐色 2 片，位于细胞中央的两侧。 ③牟勒氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）：绝大多数是单生，偶有 2—3 个细胞组成群 体，壳面椭圆至圆形，中央略凸或平坦。壳环呈长方形至四角形，壳环带不明显，角毛细 而长，末端尖，自细胞角长出，几乎与纵轴平行，需调节光源在较暗视野可以看出，或角 毛收缩。色素体 1 个，片状，黄褐色。 ④简单钙质角毛藻（Chaetoceros simplex var.calcitrans）：形态同牟勒氏角毛藻，只休 眠孢壳上具有细小的刺，而牟勒氏角毛藻的休眠孢的初生壳和次生壳皆光滑无刺。 ⑤中肋骨条藻（Skeletonema costatum）：链状群体，细胞透镜形或圆柱形，壳面圆而
鼓起，看生一圈细长的刺与细胞的对应相接组成长链。色素体数目1一10个，通常2个，位于壳面。小形舟形藻（Naviculoaparva）：单生，壳面有直的纵沟线和中结节，壳面直，纵沟也直。每个细胞有色素体2一4个。细胞壳环面长方形。4、作业1）要求会辩认各种常见微藻类。2）绘出观察藻类的形态图。附1：绘生物图的要点1.生物要选择具代表性或典型性。2.整个图需正立，大小比例适当。3.线条要直且粗细均匀。4.打点要园且分布均匀。附2：观察小型生物标本时使用显微镜要领1.光亮适当调暗，光圈打至最小。2.先在低倍镜下找到生物标本位置，可调至盖玻片边缘易观察到。3.转换至高倍镜下，用微调焦距找到生物标本后，再一手调微调，一手调聚光器，直至生物标本清晰为止。注意：1.每种微藻都要观察，不然下一个实验会受影响。2.实验报告：着重写：“结果分析与建议”。（二）微藻类培养液的配制1、目的学习微藻培养母液和仿F/2培养液的配制。2、器材分析天平、药匙、容量瓶、蒸馏水、配方中的药品、电炉等3、步骤1）培养母液的配制①仿F/2培养液配方A.NaNO374.8mg/LB.4.4mg/LKH2PO4C.10mg/LNa2SiO3（硅藻、金藻用）D.3.9mg/LFeCH,O-3H0维生素BI0.2mg/LE.维生素B20.5μg/L23μ/LZnSO4178μg/LMnCl2-4H,012μg/LCaCl2-6H,0F.Na.Mo04-2H,07.3μg/LCuSO.5H,010μg/L4.35μg/LNa,EDTA·2H,O②将上述配方中的药品扩大1000倍称取，按A、B、C、D、E、F分别置于6个烧杯6
6 鼓起，着生一圈细长的刺与邻细胞的刺对应相接组成长链。色素体数目 1—10 个，通常 2 个，位于壳面。 ⑥小形舟形藻（Naviculoa parva）：单生，壳面有直的纵沟线和中结节，壳面直，纵沟 也直。每个细胞有色素体 2—4 个。细胞壳环面长方形。 4、作业 1）要求会辩认各种常见微藻类。 2）绘出观察藻类的形态图。 附 1：绘生物图的要点 1. 生物要选择具代表性或典型性。 2. 整个图需正立，大小比例适当。 3. 线条要直且粗细均匀。 4. 打点要园且分布均匀。 附 2：观察小型生物标本时使用显微镜要领 1. 光亮适当调暗，光圈打至最小。 2. 先在低倍镜下找到生物标本位置，可调至盖玻片边缘易观察到。 3. 转换至高倍镜下，用微调焦距找到生物标本后，再一手调微调，一手调聚光器，直 至生物标本清晰为止。 注意： 1. 每种微藻都要观察，不然下一个实验会受影响。 2. 实验报告：着重写：“结果分析与建议”。 （二）微藻类培养液的配制 1、目的 学习微藻培养母液和仿 F/2 培养液的配制。 2、器材 分析天平、药匙、容量瓶、蒸馏水、配方中的药品、电炉等 3、步骤 1）培养母液的配制 ① 仿 F/2 培养液配方 A. NaNO3 74.8mg/L B. KH2PO4 4.4mg/L C. Na2SiO3 10mg/L （硅藻、金藻用） D. FeC6H5O7•3H2O 3.9mg/L E. 维生素 B1 0.2mg/L 维生素 B2 0.5μg/L F. ZnSO4 23μ/L MnCl2•4H2O 178μg/L CaCl2•6H2O 12μg/L Na2MoO4•2H2O 7.3μg/L CuSO4•5H2O 10μg/L Na2EDTA•2H2O 4.35μg/L ②将上述配方中的药品扩大 1000 倍称取，按 A、B、C、D、E、F 分别置于 6 个烧杯
内，用蒸馏水溶解（注意：FeC6H,O?3H,O需用研磷研碎后，再加热溶解），移入1000ml容量瓶内定容。2）仿F/2培养液配制用量筒量取过滤海水4000ml，并按N→P一Fe一微量元素顺序逐一加入各种营养母液各4ml，加入一种母液后需摇匀一下，然后置电炉上煮沸，冷却即可。4、作业1）分装：将培养液在500ml三角烧瓶中分装入300ml，50ml三角烧瓶中分装入30ml。2）培养瓶上贴标签：取白纸一张，按下列写标签（用铅笔或炭素墨水笔），并用胶水贴于三角瓶中央处。微藻分离（或培养）标签格式：学号：日期：3）写一份详细的实验报告。注意：1.母液保存：营养母液可用2～3年（除维生素B1、B12外）。2.在实际生产上只配制N、P和Fe三种营养母液，其比例为NaNO3：KH2PO4：FeCl3=50~100:5~10:1。（三）微藻的分离与培养1、目的1）学习微藻的分离和培养方法：2）掌握拉毛细管和血球计数板的使用方法：3）观察微藻种群生长情况。2、器材酒精喷灯、$5mm的玻璃管、50ml和500ml三角瓶、滴管、蒸馏水、25ml烧杯3、步骤1）微藻种的分离（1）微吸管的制作：选$5mm的玻璃管一根（约15cm长），在酒精喷灯上中部加热（起先慢慢转动），待熔后，快速拉成口径极细的微管。待冷却后，切掉前段细管直至有通孔。（2）将仿f/2培养液装入50ml和500ml的三角瓶中（装3/5）。（3）分离培养：A，从自然海区（潮间带小水洼）取回水样，在显微镜下观察，若有所要分离的藻种且数量多，可马上分离：若数量少，经为原1/2培养液浓度进行预培养后再分离：B.取在实验室中已被混杂（2一3种）的微藻混合种。*微藻的分离方法有：①微吸管法：将要分离的藻液适度稀释，滴一滴置浅凹载玻片上，镜检，用微吸管挑选要分离的藻细胞，认真仔细地吸出放入另一浅凹载玻片上，镜检这一滴水中是否达到纯分离目的，如不成，反复几次直至达到分离目的为止，然后用滴管吸取少许培养液将这滴分离到的藻细胞冲入装有培养液的三角烧瓶中进行培养。②水滴分离法：用微吸管取稀释适度的藻液，滴到消毒过的载玻片上，水滴尽可能小些，要求在低倍镜下能看到水滴的全部轮廓，一片载玻片滴一滴（如操作熟练可滴2一47
7 内，用蒸馏水溶解（注意：FeC6H5O7•3H2O 需用研砵研碎后，再加热溶解），移入 1000ml 容量瓶内定容。 2）仿 F/2 培养液配制 用量筒量取过滤海水 4000ml，并按 N→P→Fe→微量元素顺序逐一加入各种营养母液 各 4ml，加入一种母液后需摇匀一下，然后置电炉上煮沸，冷却即可。 4、作业 1）分装：将培养液在 500ml 三角烧瓶中分装入 300ml，50ml 三角烧瓶中分装入 30ml。 2）培养瓶上贴标签：取白纸一张，按下列写标签（用铅笔或炭素墨水笔），并用胶水 贴于三角瓶中央处。 标签格式： 微藻分离（或培养） 学号： 日期： 3）写一份详细的实验报告。 注意： 1. 母液保存：营养母液可用 2～3 年（除维生素 B1、B12 外）。 2. 在实际生产上只配制 N、P 和 Fe 三种营养母液，其比例为 NaNO3∶KH2PO4∶ FeCl3=50～100∶5～10∶1。 （三）微藻的分离与培养 1、目的 1）学习微藻的分离和培养方法； 2）掌握拉毛细管和血球计数板的使用方法； 3）观察微藻种群生长情况。 2、器材 酒精喷灯、∮5mm 的玻璃管、50ml 和 500ml 三角瓶、滴管、蒸馏水、25ml 烧杯 3、步骤 1）微藻种的分离 （1）微吸管的制作：选∮5mm 的玻璃管一根（约 15cm 长），在酒精喷灯上中部加热 （起先慢慢转动），待熔后，快速拉成口径极细的微管。待冷却后，切掉前段细管直至有 通孔。 （2）将仿 f/2 培养液装入 50ml 和 500ml 的三角瓶中（装 3/5）。 （3）分离培养：A. 从自然海区（潮间带小水洼）取回水样，在显微镜下观察，若有 所要分离的藻种且数量多，可马上分离；若数量少，经为原 1/2 培养液浓度进行预培养后 再分离；B. 取在实验室中已被混杂（2—3 种）的微藻混合种。 *微藻的分离方法有： ①微吸管法：将要分离的藻液适度稀释，滴一滴置浅凹载玻片上，镜检，用微吸管挑 选要分离的藻细胞，认真仔细地吸出放入另一浅凹载玻片上，镜检这一滴水中是否达到纯 分离目的，如不成，反复几次直至达到分离目的为止，然后用滴管吸取少许培养液将这滴 分离到的藻细胞冲入装有培养液的三角烧瓶中进行培养。 ②水滴分离法：用微吸管取稀释适度的藻液，滴到消毒过的载玻片上，水滴尽可能小 些，要求在低倍镜下能看到水滴的全部轮廓，一片载玻片滴一滴（如操作熟练可滴 2—4
滴，作直线间隔排列），在显微镜下详细检查，若这一小滴内只有一种要分离的藻种，无其他生物混杂，即用吸管取少许培养液将这滴分离到的藻细胞冲入装有培养液的50ml三角瓶中去，若不成功，反复重做。*要点：A.取微藻混合液1~2ml，用培养液稀释，使之每小滴仅1一2个C。B.用微细吸管垂直滴成小滴，即在低倍镜下全部看到整滴。C.要清楚辩认所要分离藻种，且观察过程需快速。一般每个50ml三角烧瓶（装1/2培养液）冲入5一10个细胞，经两周的培养就可看到藻色。2）微藻类的培养（1）血球计数板的计数方法：血球计数板的中部有一部分比两边低0.1mm，两边有沟，盖上盖玻片后其中间空间的厚距为0.1mm。在中部划线内具大小方格，其中大方格的面积是1mm2，每个大方格分为25个中方格，每一中方格再分为16个小方格，即每个大方格共16×25=400个小方格（也有一种计数板是16中格×25小格的，总数也是400个小方格）。*大方格的容积=1mm2×0.1mm（厚）=0.1mm2（ul）=10ml把血球计数板及盖玻片用蒸馏水洗清，擦干，平放桌上，并盖好盖玻片。然后将藻液摇荡后倒少许于一个25ml小烧杯内（若会运动种类，需滴加数滴碘液或甲醛杀死），用一支干净的吸管吸取藻液，迅速把吸管口放到计数板旁的盖玻片边缘处，轻压橡皮头使藻液流入盖玻片内。注意控制藻液流入量，过多则流入沟内。过少则有气泡，过多过少的情况都得重做。稍停1分钟，待微藻细胞沉降到玻片表面，在低倍镜下计数5个方格（中央1格和四角4格）的细胞总数，如藻细胞数量少就计数整个大方格，藻细胞数量中等就计数5个中方格，藻细胞数量多就计数5个小方格。每个样品重复再计数一次，取平均值。按下式计算每ml藻液内所含的微藻细胞数。1ml水体微藻细胞数=X+2×25(或400×10000，其中X1、X代表计数两次 5个方2×5格的细胞总数。在计数时常有细胞占在格线上，可自行规定为左与下线上的细胞不计数，在上与右线上的细胞要计数。如果计数前有稀释的，最后计算要乘上稀释倍数。例：取1ml小球藻液，加9ml过滤海水稀释，在血球计数板上计算一大方格的细胞平均数为31个细胞，求1ml藻液中的小球藻数：31×10000×10=3100000个细胞/ml（2）微藻的培养①取出已消毒、贴好标签纸、注入煮沸冷却的仿f/2培养液300ml的500ml锥形瓶；②在酒精灯旁（无菌室（箱）里）加进要培养种类的藻液（50～100ml）至淡色为度。③计数：接种后摇匀，倒少许至小烧杯内，在血球计数板上计数其细胞密度，日后每3天计数一次，跟踪计数至藻类死亡期的出现。④培养：在光照下培养一周后，计算藻细胞生长几倍。4、作业1）以2人为一组，每位同学各分离5个藻细胞：2）以2人为一组培养一瓶微藻，但每位同学各自计数；3）写一份详细的实验报告。8
8 滴，作直线间隔排列），在显微镜下详细检查，若这一小滴内只有一种要分离的藻种，无 其他生物混杂，即用吸管取少许培养液将这滴分离到的藻细胞冲入装有培养液的 50ml 三 角瓶中去，若不成功，反复重做。 *要点：A. 取微藻混合液 1～2ml，用培养液稀释，使之每小滴仅 1—2 个 C。 B. 用微细吸管垂直滴成小滴，即在低倍镜下全部看到整滴。 C. 要清楚辩认所要分离藻种，且观察过程需快速。 一般每个 50ml 三角烧瓶（装 1/2 培养液）冲入 5—10 个细胞，经两周的培养就可看到 藻色。 2）微藻类的培养 （1）血球计数板的计数方法：血球计数板的中部有一部分比两边低 0.1mm，两边有 沟，盖上盖玻片后其中间空间的厚距为 0.1mm。在中部划线内具大小方格，其中大方格的 面积是 1mm2 ，每个大方格分为 25 个中方格，每一中方格再分为 16 个小方格，即每个大 方格共 16×25=400 个小方格（也有一种计数板是 16 中格×25 小格的，总数也是 400 个小 方格）。 *大方格的容积 = 1mm2 ×0.1mm（厚）=0.1mm3 （ul）=10-4 ml 把血球计数板及盖玻片用蒸馏水洗清，擦干，平放桌上，并盖好盖玻片。然后将藻液 摇荡后倒少许于一个 25ml 小烧杯内（若会运动种类，需滴加数滴碘液或甲醛杀死），用一 支干净的吸管吸取藻液，迅速把吸管口放到计数板旁的盖玻片边缘处，轻压橡皮头使藻液 流入盖玻片内。注意控制藻液流入量，过多则流入沟内。过少则有气泡，过多过少的情况 都得重做。稍停 1 分钟，待微藻细胞沉降到玻片表面，在低倍镜下计数 5 个方格（中央 1 格和四角 4 格）的细胞总数，如藻细胞数量少就计数整个大方格，藻细胞数量中等就计数 5 个中方格，藻细胞数量多就计数 5 个小方格。每个样品重复再计数一次，取平均值。按 下式计算每 ml 藻液内所含的微藻细胞数。 25 400 10000 2 5 X X 1ml 1 2 × × × + 水体微藻细胞数 = （或 ） ，其中 X1、X2 代表计数两次 5 个方 格的细胞总数。 在计数时常有细胞占在格线上，可自行规定为左与下线上的细胞不计数，在上与右线 上的细胞要计数。如果计数前有稀释的，最后计算要乘上稀释倍数。 例：取 1ml 小球藻液，加 9ml 过滤海水稀释，在血球计数板上计算一大方格的细胞平 均数为 31 个细胞，求 1ml 藻液中的小球藻数： 31×10000×10=3100000 个细胞/ ml （2）微藻的培养 ①取出已消毒、贴好标签纸、注入煮沸冷却的仿 f/2 培养液 300ml 的 500ml 锥形瓶； ②在酒精灯旁（无菌室（箱）里）加进要培养种类的藻液（50～100ml）至淡色为度。 ③计数：接种后摇匀，倒少许至小烧杯内，在血球计数板上计数其细胞密度，日后每 3 天计数一次，跟踪计数至藻类死亡期的出现。 ④培养：在光照下培养一周后，计算藻细胞生长几倍。 4、作业 1）以 2 人为一组，每位同学各分离 5 个藻细胞； 2）以 2 人为一组培养一瓶微藻，但每位同学各自计数； 3）写一份详细的实验报告