遗传育种学实验教案
遗传育种学实验教案
实验一鱼类肾细胞的染色体制作技术一、教学目的：1.掌握鱼类肾细胞染色体制作的原理和技术二、教学重点：1.掌握鱼类肾细胞染色体制作的原理和技术三、教学难点：鱼类肾细胞染色体制作的原理和技术四、教学方法：1、实验演示与指导2、学生操作五、教学用具：实验材料：鲫鱼（或罗非鱼，或鬼）成鱼。实验器材：甲醇、冰醋酸、注射器、针头、剪刀、镊子、尼龙筛绢（260目）、离心机、离心管、吸管、显微镜。实验试剂：PHA溶液、鱼类生理盐水、秋水仙素溶液、0.075M的氯化钾低渗溶液、卡诺氏固定液和Giemsa染色液六、教学过程：1．讲解实验目的，实验原理，实验材料、器材与试剂，实验步骤以及实验操作中的注意事项。2.演示注射、解剖、剥取头肾和细胞悬液制备等步骤。3.安排学生按照讲义进行实验。4.在固定过程中，安排同学观察染色体示范片。5.完成固定步骤进行滴片和染色演示，同时说明影响结果的因素与注意事项。6.组织学生观察染色体制片，根据同学制片的效果和上课实验操作表现给出现场操作成绩。七、课程小结：注意培养同学动手能力、观察能力、结果分析能力。八、作业：撰写实验报告
实验一 鱼类肾细胞的染色体制作技术 一、 教学目的： 1. 掌握鱼类肾细胞染色体制作的原理和技术 二、 教学重点： 1. 掌握鱼类肾细胞染色体制作的原理和技术 三、 教学难点： 鱼类肾细胞染色体制作的原理和技术 四、 教学方法： 1、实验演示与指导 2、学生操作 五、 教学用具： 实验材料 ：鲫鱼（或罗非鱼，或鬼鮋）成鱼。 实验器材：甲醇、冰醋酸、注射器、针头、剪刀、镊子、尼龙筛绢（260 目）、离心 机、离心管、吸管、显微镜。 实验试剂：PHA 溶液、鱼类生理盐水、秋水仙素溶液、0.075M 的氯化钾低渗溶液、 卡诺氏固定液和 Giemsa 染色液 六、 教学过程： 1． 讲解实验目的，实验原理，实验材料、器材与试剂，实验步骤以及实验操作中的 注意事项。 2． 演示注射、解剖、剥取头肾和细胞悬液制备等步骤。 3． 安排学生按照讲义进行实验。 4． 在固定过程中，安排同学观察染色体示范片。 5． 完成固定步骤进行滴片和染色演示，同时说明影响结果的因素与注意事项。 6． 组织学生观察染色体制片，根据同学制片的效果和上课实验操作表现给出现场操 作成绩。 七、 课程小结： 注意培养同学动手能力、观察能力、结果分析能力。 八、 作业： 撰写实验报告
实验二染色体核型分析方法一、教学目的：1.掌握染色体组型分析的方法二、教学重点：1.掌握染色体组型分析的方法三、教学难点：掌握染色体组型分析的方法四、教学方法：1、实验演示与指导2、学生操作五、教学用具：实验材料：杂色鲍染色体图实验器材：圆规、直尺或三角板、剪刀。六、教学过程：1．讲解实验目的，实验原理，实验材料、器材与试剂，实验步骤以及实验操作中的注意事项。2.安排学生按照讲义进行实验。七、课程小结：注意培养同学动手能力、观察能力、结果分析能力。八、作业：撰写实验报告
实验二 染色体核型分析方法 一、 教学目的： 1. 掌握染色体组型分析的方法 二、 教学重点： 1. 掌握染色体组型分析的方法 三、 教学难点： 掌握染色体组型分析的方法 四、 教学方法： 1、实验演示与指导 2、学生操作 五、 教学用具： 实验材料：杂色鲍染色体图 实验器材：圆规、直尺或三角板、剪刀。 六、 教学过程： 1． 讲解实验目的，实验原理，实验材料、器材与试剂，实验步骤以及实验操作中的注 意事项。 2． 安排学生按照讲义进行实验。 七、 课程小结： 注意培养同学动手能力、观察能力、结果分析能力。 八、 作业： 撰写实验报告
实验三：鱼类肝脏酯酶同工酶电泳分析教学方法：教师先用约30分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处需要给学生做演示。然后学生自已动手实验，教师实时指导。教学学时：8学时一、目的：了解原理、掌握技术、加深对同功酶概念的认识和了解二、原理：什么是同功酶？同工酶→聚丙烯酰胺凝胶电泳→不同酶蛋白带被分开→染色显出谱带丙烯酰胺（Acr）+甲叉双丙烯酰胺（Bis，交联剂）→（APS，TEMED）聚丙烯酰胺醋酸酯（酯酶水解）→水解产物（十坚牢蓝）→显色三、材料：鲫鱼（肝脏）四、器材：注意移液枪的量程和用法、离心机的用法五、实验试剂：边讲述便请同学自己检查台面上的试验试剂六、步骤：安装电泳槽（教师演示）→制胶→样品制备→上样前的准备→上样→电泳（黑板图示）→剥胶（演示）→染色→保存→观察记录（黑板图示）→收拾台面七、注意事项：样品尽量保持低温；离心要平衡；丙烯酰胺有毒；灌胶动作要迅速以防聚合；八、作业：完成实验报告，画图说明试验结果。迁移常数：R=酶带中心与原点的距离/溴酚兰与原点的距离两种生物的相同值=两种生物相同酶带数/（不同酶带数+相同酶带数）
实验三：鱼类肝脏酯酶同工酶电泳分析 教学方法：教师先用约 30 分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、 试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处 需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导。 教学学时：8 学时 一、目的：了解原理、掌握技术、加深对同功酶概念的认识和了解 二、原理： 什么是同功酶？ 同工酶 → 聚丙烯酰胺凝胶电泳 → 不同酶蛋白带被分开 →染色显出谱带 丙烯酰胺（Acr）＋甲叉双丙烯酰胺（Bis，交联剂）→ （APS, TEMED）聚 丙烯酰胺 醋酸萘酯（酯酶水解） →水解产物（＋坚牢蓝）→显色 三、材料：鲫鱼（肝脏） 四、器材：注意移液枪的量程和用法、离心机的用法 五、实验试剂：边讲述便请同学自己检查台面上的试验试剂 六、步骤： 安装电泳槽（教师演示） → 制胶 → 样品制备 →上样前的准备→ 上样→ 电泳（黑板图示）→ 剥胶（演示） → 染色→ 保存 → 观察记录（黑板图 示） → 收拾台面 七、注意事项：样品尽量保持低温；离心要平衡；丙烯酰胺有毒；灌胶动作要迅 速以防聚合； 八、作业：完成实验报告，画图说明试验结果。 迁移常数：R=酶带中心与原点的距离/溴酚兰与原点的距离 两种生物的相同值=两种生物相同酶带数/（不同酶带数+相同酶带数）
试验四：鱼类DNA简易提取法教学方法：教师先用约30分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导。教学学时：4学时一、目的：了解原理、掌握提取方法二、原理：缓冲液裂解细胞→蛋白酶K消化去蛋白→酚、氯仿抽提去蛋白→离心分层→乙醇沉淀DNA一→TE溶解DNA三、材料：大黄鱼（肝脏）四、器材：五、试剂：六、步骤：研磨样品（匀浆）→酚/氯仿抽提蛋白（750ul）→离心分层→重复抽提→氯仿/异戊醇抽提→离心→上清用95%乙醇沉淀→75%乙醇洗涤一→TE或ddH,0溶解（50-200ul）→收拾台面七、注意事项：样品要磨成匀浆：动作要轻柔：离心时要平衡：DNA干燥要适当八、完成试验报告，描述DNA提取过程中观察到的现象实验五DNA浓度测定与纯度鉴定教学方法：教师先用约30分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导
试验四：鱼类 DNA 简易提取法 教学方法：教师先用约 30 分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、 试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处 需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导。 教学学时：4 学时 一、目的：了解原理、掌握提取方法 二、原理： 缓冲液裂解细胞 → 蛋白酶 K 消化去蛋白 → 酚、氯仿抽提去蛋白→ 离心 分层→ 乙醇沉淀 DNA → TE 溶解 DNA 三、材料：大黄鱼（肝脏） 四、器材： 五、试剂： 六、步骤： 研磨样品（匀浆）→ 酚/氯仿抽提蛋白（750ul）→ 离心分层 →重复抽提→ 氯仿/异戊醇抽提 →离心→ 上清用 95％乙醇沉淀→ 75％乙醇洗涤 → TE 或 ddH2O 溶解（50－200ul）→收拾台面 七、注意事项： 样品要磨成匀浆；动作要轻柔；离心时要平衡；DNA 干燥要适当 八、 完成试验报告，描述 DNA 提取过程中观察到的现象 实验五 DNA 浓度测定与纯度鉴定 教学方法：教师先用约 30 分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、 试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处 需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导
教学学时：2学时一、目的：了解原理、掌握DNA浓度测定和纯度鉴定的方法二、原理：1．二苯胺显色法：2.紫外光谱分析法：浓度：DNA和RNA在260nm和280nm（蛋白质）处有吸收峰，吸收强度与DNA或RNA浓度成正比。1OD260~50μg/ml双链DNA。纯度：DNA的OD260/OD280~1.6-1.8，RNA的OD260/OD280~1.8—2.0。当DNA样品溶液的OD260/OD280>1.8，表明DNA中混有RNA，<1.6表明DNA中混有蛋白质。3.溴化乙锭荧光检测法：<250ng/ml、污染严重，1一5ng三、材料：实验四提取的DNA四、器材：五、步骤：稀释样品（98ulTE+2ulDNA）→空白调零→测定稀释样品OD260和OD280的值→DNA浓度与纯度[DNA]（ug/ml）=OD260×50(ug/ml)×稀释倍数六、作业：比较DNA测定的几种方法，完成实验报告。实验六PCR扩增教学方法：教师先用约30分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处需要给学生做演示。然后学生自已动手实验，教师实时指导。教学学时：2学时
教学学时：2 学时 一、目的：了解原理、掌握 DNA 浓度测定和纯度鉴定的方法 二、原理： 1. 二苯胺显色法： 2. 紫外光谱分析法： 浓度：DNA 和 RNA 在 260 nm 和 280 nm（蛋白质）处有吸收峰，吸收强度与 DNA 或 RNA 浓度成正比。1 OD260≈50μg/ml 双链 DNA。 纯度：DNA 的 OD260 /OD280≈1.6－1.8，RNA 的 OD260 /OD280≈1.8－2.0。当 DNA 样品溶液的 OD260 /OD280 >1.8，表明 DNA 中混有 RNA，<1.6 表明 DNA 中混 有蛋白质。 3. 溴化乙锭荧光检测法：<250ng/ml、污染严重，1－5ng 三、材料：实验四提取的 DNA 四、器材： 五、步骤： 稀释样品（98ulTE＋2ulDNA） → 空白调零 →测定稀释样品 OD 260 和 OD280 的值 → DNA 浓度与纯度 [DNA]（ug/ml）=OD260×50(ug/ml)×稀释倍数 六、作业： 比较 DNA 测定的几种方法，完成实验报告。 实验六 PCR 扩增 教学方法：教师先用约 30 分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、 试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处 需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导。 教学学时：2 学时
一、目的：了解并掌握PCR技术的原理及基本操作过程二、原理：（黑板画图说明）三、材料：实验四提取的大黄鱼肝脏的DNA四、器材：五、试剂（PCR体系）：10×PCR缓冲液两端引物dNTPsTaq酶模板DNAddH,0六、步骤：ddHO→缓冲液→引物→dNTPs→Taq→混勺→分装→加模板DNA（注意设对照）→PCR仪上扩增→电泳检测结果七、注意事项：防污染。八、作业：完成实验报告（图片及结果分析）实验七琼脂糖凝胶电泳教学方法：教师先用约30分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处需要给学生做演示。然后学生自已动手实验，教师实时指导。教学学时：4学时一、目的：了解原理；掌握分离方法；估测片段大小及DNA含量的方法二、原理：讲述三、材料：DNA样品、PCR产物、DL-2000分子量标准品四、器材：
一、目的：了解并掌握 PCR 技术的原理及基本操作过程 二、原理：（黑板画图说明） 三、材料：实验四提取的大黄鱼肝脏的 DNA 四、器材： 五、试剂（PCR 体系）： 10×PCR 缓冲液 两端引物 dNTPs Taq 酶 模板 DNA ddH2O 六、步骤：ddH2O → 缓冲液→ 引物→ dNTPs → Taq→ 混匀→ 分装 → 加模板 DNA（注意设对照）→ PCR 仪上扩增→ 电泳检测结果 七、注意事项：防污染。 八、作业：完成实验报告（图片及结果分析） 实验七 琼脂糖凝胶电泳 教学方法：教师先用约 30 分钟的时间讲述实验的目的、原理、实验材料、器材、 试剂、实验步骤、注意事项以及实验报告的要求等，重点或难点之处 需要给学生做演示。然后学生自己动手实验，教师实时指导。 教学学时：4 学时 一、目的：了解原理；掌握分离方法；估测片段大小及 DNA 含量的方法 二、原理：讲述 三、材料：DNA 样品、PCR 产物、DL-2000 分子量标准品 四、器材：
五、试剂六、步骤：制胶：1.0%；琼脂糖要融化完全（透明）；加EB时注意防污染；倒胶时勿留气泡；胶要凝固完全后方可加样加样：标准品（2.5u1）电泳：电源勿接反（图示）观察：七、注意EB污染八、作业：完成实验报告估测DNA片段大小和含量
五、试剂 六、步骤： 制胶：1.0％；琼脂糖要融化完全（透明）；加 EB 时注意防污染；倒胶时勿 留气泡；胶要凝固完全后方可加样 加样：标准品（2.5ul） 电泳：电源勿接反（图示） 观察： 七、注意 EB 污染 八、作业： 完成实验报告 估测 DNA 片段大小和含量