第一篇 基因工程制药综合实验. 7 实验一 基因的 PCR 扩增反应. 8 实验二 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA. 11 实验三 DNA 的重组连接. 14 实验四 重组质粒的转化 . 18 实验五 转化子 DNA 的快速提取. 22 实验六 重组转化子的 PCR 鉴定. 24 第二篇 细胞工程制药综合实验. 26 实验一 细胞培养. 26 实验二 PEI 转染动物细胞 . 28 实验三 动物细胞蛋白的提取方法 . 31 实验四 蛋白浓度测定方法. 32 实验五 SDS-PAGE 电泳. 33 实验六 WESTERN BLOT 检测 . 35 第三篇 酶工程制药综合实验. 41 高产淀粉酶菌株的筛选 . 41 第四篇 沙棘粗多糖的提取、纯化及鉴定. 45 第五篇 免疫组织化学检测. 48 第六篇 发酵罐说明及使用. 51 实验一 气升式生化反应器的应用 . 51 实验二 中试发酵设备的使用方法 . 53 附录 发酵罐的简介. 56

第一章 生物化学部分.1 实验一、双缩脲法测定血清蛋白质含量. 1 实验二、纸层析法观察转氨基作用. 2 实验三、血清醋酸纤维薄膜电泳. 4 实验四、血清丙氨酸氨基转移酶活性测定. 7 实验五、胰酶对蛋白质的消化和影响酶作用的因素. 10 实验六、酶的竞争性抑制作用. 13 实验七、血糖浓度的测定. 16 实验八、血清γ球蛋白的分离纯化与鉴定. 18 第二章 分子生物学部分.25 实验一、质粒 DNA 的提取制备与检测. 25 实验二、PCR 技术. 28 实验三、DNA 的限制性酶切与电泳. 31 实验四、DNA 连接实验. 38 实验五、重组 DNA 转化与篮白斑筛选. 41 实验六、SDS-PAGE 测定蛋白质的相对分子量. 44

实验室一些常用知识介绍 3 实验一：离子交换法分离氨基酸 7 实验二：垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 9 实验三：马铃薯多酚氧化酶制备及性质实验13 实验四：碱性蛋白酶活力的测定 16 实验五: 植物组织中 DNA 和 RNA 的提取和鉴定 19 实验六：糖酵解中间产物的鉴定22 实验七：综合设计实验—蛋白质的制备及其含量测定24 实验八：还原糖和总糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法） 35 实验九：发酵过程中无机磷的利用37 实验十：氨基酸的分离鉴定—纸层析法39 实验十一：细菌血栓溶解酶活性测定41 实验十二：可溶性糖的硅胶 G 薄层层析43 实验十三：植物材料中总黄酮的提纯与鉴定44 实验十四 ： IEF/SDS-PAGE双向电泳分离鉴定蛋白质

生化大实验是一门综合性的实验课程，教学的目的在于通过对生命物质的分离制备，纯化，分析等综合性实验，在已掌握的基础生物化学理论知识和生化实验常用方法的基本原理、基本操作技术（如滴定、比色、层析、电泳等）的基础上，训练学生的综合实践动手能力，掌握蛋白质、酶、核酸等重要物质的分离、纯化等的测定技术。实验一蛋白质含量的测定实验二离子交换法血清纯化IgG实验三离子交换层析法分离血清白蛋白实验四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量实验五等电聚焦法测定样品的等电点实验六质粒的分离与纯化实验七PCR扩增目的基因片段实验八酶联免疫吸附实验

上海交通大学：《脑与日常行为》通识课程教学资源_抑郁自评量表测试（SDS）

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复旦大学：《分子生物学理论与实验》课程教学课件（讲稿）实验六 蛋白质的SDS-PAGE分离及转膜

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第一章概论-生命大分子物质的制备 第二章沉淀法 第三章吸附层析 第四章疏水层析 第五章离子交换层析 第五章凝胶过滤 第六章亲和层析 第七章SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 第八章等电聚焦电泳 第九章鉴定方法

最广泛使用的不连续缓冲系统最早是由 Ornstein(1964) 和 Davis(1964) 设计的, 样品和 浓缩胶 中含 Tris-HCl(pH 6.8), 上下槽缓冲 液含 Tris- 甘氨酸(pH 8.3), 分离胶中含 Tris-HCl(pH 8.8)。系统中所有组分都含有 0.1% 的 SDS(Laemmli, 1970)。样品和浓缩胶中的 氯离子形成移动界面的先导边界而甘氨酸分子则组成尾随边界，在移动界面的两边界之间是 一电导较低而电位滴度较陡的区域, 它推动样品中的蛋白质前移并在分离胶前沿积聚