第一节 基因工程的酶学基础 第二节 目的基因的制备 第三节 基因工程载体 第四节 重组DNA导入受体细胞 第五节 克隆子的筛选与鉴定 第六节 文库的构建

第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab

生命科学是21世纪的带头学科,在现代生命科学最前沿的研 究领域中,以研究人类基因组结构和功能为主的“蛋白质组计划 已经成为分子生物学的重要课题,并带动了整个生命科学的发展 随着科学不断发展,研究手段日新月异,我们从实践中体会到,在 蛋白质研究的日常工作中,一本关于蛋白质研究方法的工具书会 发挥很大的作用。1990年前后出版的《分子克隆实验指南)使核 酸操作技术实现了标准化,推动了“基因组计划”的发展和实现。 由于蛋白质结构和性质的复杂与多样性,难以归纳出般性的分 析操作规程

第一节 干扰素基因及其编码的蛋白质 第二节 干扰素的诱导合成 第三节 干扰素受体及信号传递途径 第四节 干扰素诱导的抗病毒作用 第五节 病毒抗干扰素作用的对策 第一节 噬菌体的结构组成 第二节 噬菌体基因组的结构 第三节 噬菌体基因组的复制 第四节 噬菌体基因组转录与翻译的调控 第五节 噬菌体溶原性感染 第六节 基因克隆的噬菌体载体 第一节 动物dsDNA病毒 第二节 动物ssDNA病毒 第三节 动物dsRNA病毒 第四节 动物-ssRNA病毒 第五节 动物+ssRNA病毒 第一节 DNA肿瘤病毒 第二节 RNA肿瘤病毒——逆转录病毒 第三节 人类免疫缺陷病毒的分子生物学 第一节 类病毒 第二节 卫星RNA和卫星病毒 第四节 丁型肝炎病毒

一、编写说明 1、课程简介:本门课程是农学、植保和园艺专业的专业基础课,是生物科学方面的基础理 论知识。它是农、林、园艺、园林等专业必选课程。在分子水平探索生命本质给予生命 科学无可限量的活力和发展前景,而生物化学所研究的正是生命过程的分子基础。过去的 半个世纪生物学飞速发展的历史雄辩地证明,生物化学不仅是生命科学的带头学科之一, 而且在医学、工农业生产、生物工程等领域得到广泛应用。权威人士预言,二十一世纪将 是生命科学的时代。因此,当今世界各发达国家和许多发展中国家都十分重视生命科学的 研究与教育,早把生物化学列为各有关专业必修的重要基础课。我国高等农业院校农学 类专业自八十年代初普遍开设了“基础生物化学”,对于改善学生的知识构成、提高适应 能力、增强发展后劲、缩小与国内外先进水平的差距起到了积极的作用。 2、地位和任务:本课程的任务是使学生掌握生物化学的基础理论、基本知识和基本的生化 实验方法与技术,为有关后续课程的学习和继续深造奠定基础,本着既考虑生物化学自身 的系统性和完整性,又顾及体现农学类专业的特点和教学工作实际的原则,本大纲共分十 一章:第一章为绪论;第二至第四章为静态生化部分,重点介绍生物大分子;第五至第十 章为动态生化部分,重点介绍糖类、脂类、氨基酸和核苷酸的基本代谢以及能量代谢;第 十一章重点介绍信息代谢。鉴于DNA重组和基因克隆技术对生命科学的发展具有划时代的 意义,日益成为重要的常规实验手段

基因工程概论 基因工程的主要技术 基因工程的酶学基础 基因克隆的载体与受体 目的基因的克隆与分离 克隆基因的检测与功能鉴定 克隆基因的表达与产物纯化 基因表达的调控

一、掌握 Ghost应用技巧 二、掌握分区魔法师的应用技巧

第一节 基因组DNA片断化 第二节 化学合成目的基因 第三节 目的基因的保存与文库构建 第四节 目的基因的分离和扩增 第五节 DNA片段的体外连接 第六节 重组体导入细菌细胞 第七节 外源基因导入真核细胞 第一节 载体表型选择法 第二节 根据插入基因的表型选择 第三节 DNA电泳检测法 第四节 核酸杂交检测法 第五节 免疫化学检测法 第六节 转译筛选法 第七节 几种常用的真核生物重组基因选择方法

一、基因克隆的目的与意义 二、基因文库技术 三、功能蛋白组技术 四、图位克隆法 五、mRNA差异显示法 六、转座子、T-DNA标签法 七、同源序列法 八、功能互补法 九、基因组扣除杂交法 十、酵母双杂交系统

11.1重组DNA技术是基因工程的核心技术 11.2获得需要的目的基因(外源基因) 11.3构建重组质粒和基因克隆 11.4转化受体细胞和转化子的筛选 11.5转化子的分析 Southern杂交