第十一章 基因工程与基因体外表达
第十一章 基因工程与基因体外表达
重组DNA技术定义 重组DNA技术是按照人们的意愿,在体外对DNA 分子进行重组,再将重组分子导入受体细胞,使其 在细胞中扩增、繁殖以获得DNA分子的大量拷贝。 所谓克隆是指通过无性繁殖过程所产生的与亲 代完全相同的子代群体。由于重组DNA技术实验 是对基因操作,故又称为基因克隆或DNA克隆, 同时由于这类克隆在分子水平上操作,又称为分子 克隆
重组DNA技术定义 重组DNA技术是按照人们的意愿，在体外对DNA 分子进行重组，再将重组分子导入受体细胞，使其 在细胞中扩增、繁殖以获得DNA分子的大量拷贝。 所谓克隆是指通过无性繁殖过程所产生的与亲 代完全相同的子代群体。由于重组DNA技术实验 是对基因操作，故又称为基因克隆或DNA克隆， 同时由于这类克隆在分子水平上操作，又称为分子 克隆
重组DNA技术的重大意义 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾 越的鸿沟 重组DNA技术缩短了进化时间; 重组DNA技术使人能对生物进行定向改
重组DNA技术的重大意义 n 重组DNA技术填平了生物种属间不可逾 越的鸿沟； n 重组DNA技术缩短了进化时间； n 重组DNA技术使人能对生物进行定向改 造
重组DNA技术操作过程可形象归纳为 分离目的基因 分切接转筛 限制酶切目的基因与载体 拼接重组体 转入受体菌 筛选重组体 克隆基因的表达及检测纯化
重组DNA技术操作过程可形象归纳为 分 分离目的基因 切 限制酶切目的基因与载体 接 拼接重组体 转 转入受体菌 筛 筛选重组体 克隆基因的表达及检测纯化
限制性核酸内切酶 是一类能识别和切割DNA分子中特定碱基顺 序的核酸水解酶 命名:以限制性内切酶来源的微生物学名进行命 名。通常第一字母(大、斜)代表该酶的微生 物属名;第二三字母(小、斜)代表微生物的 种名;第四个字母代表寄主菌的株或型;
限制性核酸内切酶 是一类能识别和切割DNA分子中特定碱基顺 序的核酸水解酶 命名:以限制性内切酶来源的微生物学名进行命 名。通常第一字母（大、斜）代表该酶的微生 物属名；第二三字母（小、斜）代表微生物的 种名；第四个字母代表寄主菌的株或型；
限制性核酸内切酶的分类 I类:属于复合功能酶,兼有修饰和切割DNA两 种功能,但识别、切割位点不一致; Ⅲ类:有核酸内切酶和甲基化酶功能,但在DNA 链上特异切割点在识别位点以外; Ⅱ类:能识别切割双链DNA特异序列,产生特异 的DNA片段;
Ⅰ类：属于复合功能酶，兼有修饰和切割DNA两 种功能，但识别、切割位点不一致； Ⅲ类：有核酸内切酶和甲基化酶功能，但在DNA 链上特异切割点在识别位点以外； Ⅱ类：能识别切割双链DNA特异序列，产生特异 的DNA片段； 限制性核酸内切酶的分类
Ⅱ类内切酶切割形成端口类型 1、产生平末端:在识别顺序的对称轴上, 对双链DNA同时切割。 HindⅡ GTCGAC CAGCTG
1、产生平末端：在识别顺序的对称轴上， 对双链DNA同时切割。 Ⅱ类内切酶切割形成端口类型 HindⅡ GTCGAC CAGCTG
2、产生5端突出的粘性末端:在识别顺 序的双侧末端切割DNA双链,于对称轴 的5末端切割。 BamH I GGATCC 3 CCTAGG
2、产生5`端突出的粘性末端：在识别顺 序的双侧末端切割DNA双链，于对称轴 的5`末端切割。 Bam HⅠ GGATCC CCTAGG 5` 3` 3` 5`
3、产生3`端突出的粘性末端 Sac i GAGCTC 3 CTCGAG
3、产生3`端突出的粘性末端 SacⅠ GAGCTC CTCGAG 5` 3` 3` 5`
少数有特殊性质的Ⅱ型酶 同功异源酶 来源不同的限制酶,识别顺序相同,切割位点可以相 同也可以不同,这些酶称同功异源酶。 Bamh I Kpn I GGATCC GGTACC CCTAGG CCATGG Bst i Asp718 I GGATCC GGTACC CCTAGG CCATGG
同功异源酶 来源不同的限制酶，识别顺序相同，切割位点可以相 同也可以不同，这些酶称同功异源酶。 少数有特殊性质的Ⅱ型酶 GGATCC CCTAGG GGTACC CCATGG Bam HⅠ GGATCC CCTAGG GGTACC CCATGG BstⅠ Kpn Ⅰ Asp718Ⅰ