第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备
第四章 单克隆抗体与基因工程抗体的制备
第一节杂交瘤技术的基本原理 杂交瘤技术 阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 第二节单克隆抗体的制备 单克隆抗体的产生 单克隆抗体的纯化 三、 单克隆抗体的性质鉴定 四、 单克隆抗体的特性
第一节 杂交瘤技术的基本原理 一、杂交瘤技术 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 第二节 单克隆抗体的制备 一、单克隆抗体的产生 二、单克隆抗体的纯化 三、单克隆抗体的性质鉴定 四、单克隆抗体的特性
第三节基因工程抗体制备 人源化抗体 小分子抗体 三、 抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术 第四节单克隆抗体的应用 检验医学诊断试剂 蛋白质的提纯 小分子抗体的应用 四、抗体融合蛋白的应用 五、双特异抗体的应用 六、抗体库技术的应用和前景 思考题 小结
第三节 基因工程抗体制备 一、人源化抗体 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术 第四节 单克隆抗体的应用 一、检验医学诊断试剂 二、蛋白质的提纯 三、小分子抗体的应用 四、抗体融合蛋白的应用 五、双特异抗体的应用 六、抗体库技术的应用和前景 思考题 小结
第一节杂交瘤技术的基本原理 杂交瘤技术原理： 聚乙二醇(PEG):细胞融合剂，使免疫的小鼠脾 细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 HAT培养基的选择培养：反复的免疫学检测筛选克隆 化增殖的杂交瘤细胞系 单克隆抗体生成：接种杂交瘤细胞于小鼠腹腔，腹水 中即可得到高效价的单克隆抗体
第一节 杂交瘤技术的基本原理 杂交瘤技术原理： 聚乙二醇（PEG）：细胞融合剂，使免疫的小鼠脾 细 胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 HAT培养基的选择培养：反复的免疫学检测筛选克隆 化增殖的杂交瘤 细胞系 单克隆抗体生成：接种杂交瘤 细胞于小鼠腹腔，腹水 中即可得到高效价的单克隆抗体
抗体种类： 第一代抗体多克隆抗体(polyclonal antibody) 第二代抗体单克隆抗体(monoclonal antibody) 第三代抗体基因工程抗体(genetic engineering antibody)
抗体种类： 第一代抗体 多克隆抗体（polyclonal antibody) 第二代抗体 单克隆抗体（monoclonal antibody) 第三代抗体 基因工程抗体（genetic engineering antibody)
B淋巴细胞：寿命短，分泌 特异系性抗体 骨髓瘤细胞：寿命长 light light chain chain 杂交瘤细胞：寿命长， 单克隆抗体 heavy heavy chain chain
B淋巴细胞:寿命短,分泌 特异系性抗体 骨髓瘤细胞：寿命长 杂交瘤细胞：寿命长， 单克隆抗体
杂交瘤技术 抗原酒 囊 细融合 脚细胞 (IIAT抵抗的) 胞HAT数感的) HT中培养 三客客三2 骨髓密细胞被HA打 杀死，脾细胞逐 死亡，只有融合细 JLUL刀 抱存活 检测揄体阳性孔 京降抗休产牛细胞
流 程 一、杂交瘤技术
(一)小鼠骨髓瘤细胞 不产生1g的重链和轻链 HGPRT-:TK- 与提供淋巴细胞的动物品系相同
不产生Ig的重链和轻链 HGPRT-;TK- 与提供淋巴细胞的动物品系相同 （一）小鼠骨髓瘤细胞
(二)免疫脾细胞 动物： BALB/c小鼠 7~12周龄 20g~25g体重
动 物： BALB/c小鼠 7～12周龄 20g～25g体重 （二）免疫脾细胞
免疫小鼠 细胞性抗原： (1~2)×10/只，不加佐剂，2~3周重复一次 可溶性抗原： 首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周 100~200微克抗原，融合前3天，加强免疫
细胞性抗原： （1~2）×107/只，不加佐剂，2~3周重复一次 可溶性抗原： 首次，完全福氏佐剂+100微克抗原，3~6周 100~200微克抗原，融合前3天，加强免疫 免疫小鼠