抗体相关技术 王穗海 检验与生物技术学院抗休工程研宪所 wangsuihai1219@163.com
抗体相关技术 王穗海 检验与生物技术学院抗体工程研究所 wangsuihai1219@163.com
蛋白质的两性电离 COOH H" C00 C00 Pr PK NH OH NH pHpl 蛋白质的等电点(isoelectric point,pI) √当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离 子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时 溶液的pH称为蛋白质的等电点
Pr COOH NH3 + Pr COONH3 + Pr COONH2 OHH+ OHH+ pHpI 蛋白质的两性电离 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) ✓ 当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离 子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时 溶液的pH称为蛋白质的等电点
蛋白质有胶体性质 蛋白分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围, 在溶液中能形成稳定的胶体。 表面形成水化层 原因 表面同种电荷的示力 除去这两个因素,蛋白就会发生沉淀
蛋白分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围, 在溶液中能形成稳定的胶体。 原因 蛋白质有胶体性质 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 除去这两个因素,蛋白就会发生沉淀。 + + + + + + + - - - - - -- -
水化层 酸 碱 白质胶体溶液 酸 带正电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 带负电荷的蛋白质 脱水作用 脱水作用 脱水作用 沉淀作用示意 酸 带正电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 带负电荷的蛋白质 蛋白质的聚沉
+ + + + + + + 带正电荷的蛋白质 - - - - - - - - 在等电点的蛋白质 带负电荷的蛋白质 水化层 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 - - - - - - - - 不稳定的蛋白质颗粒 带负电荷的蛋白质 碱 酸 酸 碱 碱 酸 脱水作用 脱水作用 脱水作用 蛋白质的聚沉 蛋 白 质 胶 体 溶 液 沉 淀 作 用 示 意 图
沉淀方法类别 高浓度中性盐(盐析) 。有机溶剂沉淀 。重金属盐类沉淀 。生物碱试剂和某些酸类沉淀
沉淀方法类别 高浓度中性盐(盐析) 有机溶剂沉淀 重金属盐类沉淀 生物碱试剂和某些酸类沉淀
盐析法 蛋白质在纯水和不同 盐浓度溶液中的相对 AeSa.li形e-Reee 溶解度不同,在一定 Amm onium 溶解度 sulfate 的温度下随着盐浓度 的增加蛋白质在溶液 中的溶解度下降,当 Sodium 盐浓度增加到某个程 sulfate 度时,蛋白质就从溶 lonic strength 液中析出,这种现象 称为盐析
盐析法 蛋白质在纯水和不同 盐浓度溶液中的相对 溶解度不同,在一定 的温度下随着盐浓度 的增加蛋白质在溶液 中的溶解度下降,当 盐浓度增加到某个程 度时,蛋白质就从溶 液中析出,这种现象 称为盐析