第一节 杂交瘤技术的基本原理 一、杂交瘤技术 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 第二节 单克隆抗体的制备 一、单克隆抗体的产生 二、单克隆抗体的纯化 三、单克隆抗体的性质鉴定 四、单克隆抗体的特性 第三节 基因工程抗体制备 一、人源化抗体 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术 第四节 单克隆抗体的应用 一、检验医学诊断试剂 二、蛋白质的提纯 三、小分子抗体的应用 四、抗体融合蛋白的应用 五、双特异抗体的应用 六、抗体库技术的应用和前景 思考题 小结

第一节 杂交瘤技术的基本原理 一、杂交瘤技术 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 第二节 单克隆抗体的制备 一、单克隆抗体的产生 二、单克隆抗体的纯化 三、单克隆抗体的性质鉴定 四、单克隆抗体的特性 第三节 基因工程抗体制备 一、人源化抗体 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术 第四节 单克隆抗体的应用 一、检验医学诊断试剂 二、蛋白质的提纯 三、小分子抗体的应用 四、抗体融合蛋白的应用 五、双特异抗体的应用 六、抗体库技术的应用和前景

第一节 PCR工作原理和方式 第二节 PCR产物的克隆方法 第三节 扩增未知DNA的PCR 第四节 与反转录相关的PCR 第五节 PCR产生DNA指纹 第六节 实时定量PCR

实验一 质粒的制备 实验二 DNA的琼脂糖凝胶电泳 实验三 外源DNA片段在质粒载体中的克隆 实验四 感受态细胞的制备 实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 实验六 PCR技术

实验一质粒的制备 实验二DNA的琼脂糖凝胶电泳 实验三外源DNA片段在质粒载体中的克隆 实验四感受态细胞的制备 实验五质粒的转化及转化子的鉴定 实验六PCR技术

实验一 质粒的制备 实验二 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 实验三 外源 DNA 片段在质粒载体中的克隆 实验四 感受态细胞的制备 实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 实验六 PCR 技术 实验七 植物总 DNA 的快速少量抽提（ CTAB 法） 实验八 总 DNA 质量检测及酶切 实验九 电泳、转膜 实验十 RNA Extraction (mini prep) 实验十一 RT-PCR 实验 附录 试剂配方 一 细菌培养试剂 二 质粒抽提试剂 三 DNA 操作试剂 四 RNA 操作试剂

第一章 生物技术总论 一、 生物技术的含义 二、 生物技术发展简史 三、 生物技术对经济社会发展的影响 第二章 基因工程 一、DNA重组 二、基因克隆载体 三、目的基因 四、重组DNA导入受体细胞 五、重组子的鉴定 六、基因工程的应用 第三章 细胞工程 •了解原生质体的制备、培养及细胞融合的基本原理、方法与技术 • 学习如何进行动植物组织培养原理、方法与技术 • 认识单倍体植物的诱发及人工种子制备的基本要领 • 掌握利用动物体细胞克隆哺乳动物的基本做法及其重要意义 • 领会体细胞研究的原理和光明前景

第一节、实验室规则及安全防护 一、实验室规则 二、实验室安全防护 第二节、分子生物学常用研究技术 一、核酸分离纯化 二、聚合酶链反应技术 三、分子杂交技术 四、分子克隆技术 五、其它新技术 第三节、常用仪器使用 一、离心机 二、分光光度计 三、PCR 仪 第四节、如何撰写实验报告 第五节 核酸分离纯化技术 实验一、基因组 DNA 的提取制备与检测 实验二、总 RNA 的提取制备与检测 实验三、质粒 DNA 的提取制备与检测 第六节 PCR 技术 实验四、常规 PCR 技术 实验五、定量 PCR 技术 第七节 分子克隆技术 实验六、DNA 的限制性酶切与电泳 实验七、凝胶中 DNA 片断的纯化回收 实验八、DNA 连接实验 实验九、感受态细胞的制备 实验十、重组 DNA 转化与篮白斑筛选 第八节 分子杂交技术 实验十一、Southern 印迹杂交 实验十二、Northern 印迹杂交 实验十三、Western 印迹 实验十四、核酸原位杂交 第九节 综合性实验 实验十五、蛋白质双向电泳 实验十六、酵母双杂交实验 实验十七、RNA 干扰实验

生命科学是21世纪的带头学科,在现代生命科学最前沿的研 究领域中,以研究人类基因组结构和功能为主的“蛋白质组计划 已经成为分子生物学的重要课题,并带动了整个生命科学的发展 随着科学不断发展,研究手段日新月异,我们从实践中体会到,在 蛋白质研究的日常工作中,一本关于蛋白质研究方法的工具书会 发挥很大的作用。1990年前后出版的《分子克隆实验指南)使核 酸操作技术实现了标准化,推动了“基因组计划”的发展和实现。 由于蛋白质结构和性质的复杂与多样性,难以归纳出般性的分 析操作规程

第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab