第五章原生质体培养
第五章 原生质体培养
教学内容 1.掌握原生质体的概念，了解原生质体培养的 发展史 2.掌握原生质体的分离途径和纯化方法；掌握 原生质体活力测定方法； 3.掌握原生质体培养的方法、原生质体融合方 法、杂种细胞筛选及杂种植株鉴定方法
教学内容 1.掌握原生质体的概念，了解原生质体培养的 发展史 2.掌握原生质体的分离途径和纯化方法；掌握 原生质体活力测定方法； 3.掌握原生质体培养的方法、原生质体融合方 法、杂种细胞筛选及杂种植株鉴定方法
第一节原生质体(Protoplast)概述 原生质体：采用物理或化学的方法人为去 掉细胞壁，由质膜（细胞膜）包裹的具有 生活力的裸露细胞。 细胞壁 田胞膜 细胞质 原生质体 液泡 细胞核 植物细胞的立体结构
第一节原生质体（Protoplast）概述 原生质体：采用物理或化学的方法人为去 掉细胞壁，由质膜（细胞膜）包裹的具有 生活力的裸露细胞
原生质体培养发展简史 。l880年，Hanstein首次起用原生质体(protoplast)一词。 。l892年，Klereker首次采用机械法进行原生质体的分 离，但分离的完整的原生质体较少。 。1960年，Cocking首次应用酶法制备番茄根原生质体 获得成功。 。1971年，Takebe et al.首次得到烟草叶肉原生质体培 养的再生植株。 ·1985年，Fujimura et al.第一例禾谷类作物一水稻原 生质体培养再生植株。 ·1986年，Spangenberg et al.原生质体融合再生植株在 甘蓝型油菜上获得成功
1880年，Hanstein首次起用原生质体(protoplast)一词。 1892年，Klereker首次采用机械法进行原生质体的分 离，但分离的完整的原生质体较少。 1960年，Cocking首次应用酶法制备番茄根原生质体 获得成功。 1971年，Takebe et al.首次得到烟草叶肉原生质体培 养的再生植株。 1985年，Fujimura et al.第一例禾谷类作物－水稻原 生质体培养再生植株。 1986年，Spangenberg et al.原生质体融合再生植株在 甘蓝型油菜上获得成功。 原生质体培养发展简史
据统计，截止到2014年，全世界已有49个科， 160个属的367种植物经原生质体培养得到了再生 植株。其中成功报道最多的是茄科，其次是豆科、 禾本科、菊科、十字花科、伞形科等。 我国的发展概况： 原生质体培养的再生植株：烟草、胡萝卜、矮牵牛 原生质体融合：小麦×蚕豆、小麦×玉米、水稻 X豌豆
据统计，截止到2014年，全世界已有49个科， 160个属的367种植物经原生质体培养得到了再生 植株。其中成功报道最多的是茄科，其次是豆科、 禾本科、菊科、十字花科、伞形科等。 我国的发展概况： 原生质体培养的再生植株:烟草、胡萝卜、矮牵牛 原生质体融合：小麦×蚕豆、小麦×玉米、水稻 ×豌豆
原生质体分离及纯化 1.原生质体分离途径 22653pm 外植体 愈伤组织
原生质体分离及纯化 1. 原生质体分离途径 外植体 愈伤组织
1.1材料来源 材料选择原则：生长旺盛、 生命力强的组织和细胞是获 得高活性原生质体的关键 ● 多数植物分离原生质体的经典材料一叶片（叶 肉细胞) 温室生长的植物，叶片干净幼嫩，是较好的材 料来源。 无菌苗的叶片、上胚轴和子叶 ● 禾本科植物： 愈伤组织或悬浮细胞
多数植物分离原生质体的经典材料－叶片（叶 肉细胞） 温室生长的植物，叶片干净幼嫩，是较好的材 料来源。 无菌苗的叶片、上胚轴和子叶 1.1 材料来源 禾本科植物： 愈伤组织或悬浮细胞。 材料选择原则：生长旺盛、 生命力强的组织和细胞是获 得高活性原生质体的关键
材料预处理 用黑暗处理、低温处理和不同光质照射、添加化 学试剂等方法，可提高某些材料原生质体的产 量和活力。 ☆龙胆试管苗的叶片用4℃处理较好，提高原 生质体的活力
材料预处理 用黑暗处理、低温处理和不同光质照射、添加化 学试剂等方法，可提高某些材料原生质体的产 量和活力。 ☆ 龙胆试管苗的叶片用4 oC处理较好，提高原 生质体的活力
材料预处理 ☆甘蔗植株必须先在黑暗下培养12h后分离 的原生质体才能分裂
材料预处理 ☆ 甘蔗植株必须先在黑暗下培养12h后分离 的原生质体才能分裂
材料预处理 ☆马铃薯试管苗叶片需在黑暗下处理48h后 分离原生质体，才能获得高产量。 ☆青天葵叶片需在13%的甘露醇溶液中预处 理1，原生质体的产量可明显提高
材料预处理 ☆ 马铃薯试管苗叶片需在黑暗下处理48h后 分离原生质体，才能获得高产量。 ☆ 青天葵叶片需在13%的甘露醇溶液中预处 理1h，原生质体的产量可明显提高