《分子生物学》课程教学资源（试卷练习）试卷二及答案.doc_大学文库

D原核DNA与真核DNA的连接物 E两个不同的结构基因形成的连接物 20对基因工程载体的描述,下列哪个不正确: A.都可以转入宿主细胞 B都有限制性核酸内切酶的识别位点 C.都可以连接进目的基因 D都是环状双链DNA分子 E都有筛选标志二、简答题(每题5分,共40分) 1.衰减子 2DNA拓扑异构酶基因表达前导肽 5启动子 6.DNA分子克隆技术 7G蛋白 8受体型酪氨酸激酶三、论述题(每题10分,共30分) 1.操纵子中的诱导剂和辅阻遏对基因表达的调控有何不同? 2细胞内第二信使包括哪些物质?它们是怎样产生的,有何作用? 3PCR和细胞内DNA复制两者有哪些主要的相同点和不同点? 本科生分子生物学试卷(二)参考答案、选择题,选择一个最佳答案(每小题1.5分,共30分) 1.D;:2B:3.A:4.A:5.A:6C;7C;8C;9.B:10.E 、填空题(每题1分) 质粒DNA具有三种不同的构型分别是:(SC构型)、(oc构型)、(L构型)。在电泳中最前面的是(SC构型) 2哺乳类RNA聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是 (TFID)、(SP-1)和( CTF/NFI)。 3.与DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用,转录因子与DNA结合的功能域常见有以下几种 (螺旋-转角-螺旋)、(锌指模体)、(碱性-亮氨酸拉链模体) 4.转基因动物常用的方法有:(逆转录病毒感染法)、(DNA显微注射法)、(胚胎干细胞法)。 5.RNA聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡA、TFⅡB、TFI-D、TFⅡE他们的结合顺序是:(D、A B、E)。其中TFI-D的功能是(与TATA盒结合) 、简答题(每题5分,共40分) 1.衰减子答案要点:在色氨酸操纵子中,当mRNA合成起始以后,除非培养基中完全没有色氨酸,否则,转录总是在长162bp的前导区终止,产生一个仅有140个核苷酸的RNA分子,终止tp基因转录,因为转录终止发生在这一区域,并且这种终止是被调节的,这个区域被称为衰减子 2DNA拓扑异构酶答案要点:DNA在细胞内往往以超螺旋状态存在,DNA拓扑酶催化同一DNA分子不同超螺旋状态之间的转变。DNA拓扑异构酶有两类,大肠杆菌的ε蛋白(MW-110000就是一种典型的拓扑异构酶I它的作

D.原核 DNA 与真核 DNA 的连接物 E.两个不同的结构基因形成的连接物 20.对基因工程载体的描述，下列哪个不正确： A.都可以转入宿主细胞 B.都有限制性核酸内切酶的识别位点 C.都可以连接进目的基因 D.都是环状双链 DNA 分子 E.都有筛选标志二、简答题（每题 5 分，共 40 分） 1.衰减子 2.DNA 拓扑异构酶 3.基因表达 4.前导肽 5.启动子 6. DNA 分子克隆技术 7.G 蛋白 8.受体型酪氨酸激酶三、论述题（每题 10 分，共 30 分） 1.操纵子中的诱导剂和辅阻遏对基因表达的调控有何不同？ 2.细胞内第二信使包括哪些物质?它们是怎样产生的,有何作用? 3.PCR 和细胞内 DNA 复制两者有哪些主要的相同点和不同点? 本科生分子生物学试卷（二）参考答案一、选择题，选择一个最佳答案（每小题 1.5 分，共 30 分） 1.D；2.B；3.A；4.A；5.A；6.C；7.C ；8.C ；9.B； 10.E 二、填空题（每题 1 分） 1．质粒 DNA 具有三种不同的构型分别是：（ SC 构型）、（ oc 构型）、（ L 构型）。在电泳中最前面的是（ SC 构型）。 2.哺乳类 RNA 聚合酶Ⅱ启动子中常见的元件 TATA、GC、CAAT 所对应的反式作用蛋白因子分别是（ TFIID ）、（ SP-1 ）和（ CTF/NF1 ）。 3. 与 DNA 结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子与 DNA 结合的功能域常见有以下几种（螺旋-转角-螺旋）、（锌指模体）、（碱性-亮氨酸拉链模体）。 4. 转基因动物常用的方法有：（逆转录病毒感染法）、（DNA 显微注射法）、（胚胎干细胞法）。 5. RNA 聚合酶Ⅱ的基本转录因子有、TFⅡ-A、TFⅡ-B、TFII-D、TFⅡ-E 他们的结合顺序是：（ D、A、 B、E ）。其中 TFII-D 的功能是（与 TATA 盒结合）。三、简答题（每题 5 分，共 40 分） 1.衰减子答案要点：在色氨酸操纵子中，当 mRNA 合成起始以后，除非培养基中完全没有色氨酸，否则，转录总是在长 162bp 的前导区终止，产生一个仅有 140 个核苷酸的 RNA 分子，终止 trp 基因转录，因为转录终止发生在这一区域，并且这种终止是被调节的，这个区域被称为衰减子。 2.DNA 拓扑异构酶答案要点：DNA 在细胞内往往以超螺旋状态存在，DNA 拓扑酶催化同一 DNA 分子不同超螺旋状态之间的转变。DNA 拓扑异构酶有两类，大肠杆菌的ε蛋白(MW-110000)就是一种典型的拓扑异构酶Ⅰ.它的作

用是暂时切断一条DNA链,形成酶-DNA共价中间物而使超螺旋DNA松弛化,然后再将切断的单链DNA 连接起来,而不需要任何辅助因子。而大肠杆菌中的DNA旋转酶( (NAgyrase则的典型的拓扑异构酶Ⅱ 能将负超螺旋引入DNA分子,该酶能暂时性地切断和重新连接双链DNA,同时需要AP水解为ADP以基因表达答案要点:遗传信息从DNA到RNA再到蛋白质的过程 4.前导肽答案要点:分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现,它包括起始密码子AUG和终止密码子UGA:如果翻译起始于AUG,应该产生一个14个氨基酸的多肽,这个假设的多肽被称为前导肽(实际上还没有观察到) 5启动子答案要点:启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位,也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中,转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程 6DNA分子克隆技术答案要点:(也称基因克隆技术)在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接,转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括:制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接,制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体( vectors)在细胞内自我复制,并带动重组的分子片段共同增殖,从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA 片段的大量拷贝,有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆,就可以深入分析基因的结构与功能,随着引入的DNA片段不同,有两种DNA库,一种是基因组文库( genomic library),另一种是cDNA库 7G蛋白答案要点:受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合,使其释放活性因子,再与效应器发生反应。位于受体与效应器之间的则是偶联蛋白。目前所知的偶联蛋白种类较多,都属于结构和功能极为类似的一个家族,由于它们都能结合并水解GTP,所以通常称G蛋白,即鸟苷酸调节蛋白( guanine nucleotide regulatory protel 8受体型酪氨酸激酶答案要点:蛋白酪氨酸激酶( protein tyrosine kinase,PIK)是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶,他们通过从磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上,而使底物蛋白活化.目前,已发现PIK有100多个家族成员,他们通过活化底物蛋白,参与细胞的信号转导,最终,这些信号转导入细胞核内,引起某些基因表达水平的改变,使诸如细胞生长之类的复杂的细胞功能得以调节.因此在调节细胞的分化、生长和激活中起到重要作用根据PTK的结构,可分为受体型和非受体型PIK两大类,前者又称跨膜PIK,后者又称细胞内PK.生长因子受体PIK(受体型酪氨酸激酶或RIK):这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白,其胞外部分为配体结合区,中间有跨膜区,胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域.根据他们的结构不同可分为, 表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、血小板衍生生长因子(PDGF)受体家族和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族四、论述题(每题10分,共30分) 1.DNA与蛋白质相互作用研究方法及其原理? 答案要点:1、凝胶阻滞实验 2、 DNase足迹实验。原理参见朱玉贤高教(二)版《现代分子生物学》教材166~170页。 2.试述真核生物基因表达调控的一般规律答案要点:分为两大类:(一)瞬时调控或称可逆调控,它相当于原核细胞对环境条件作出的反应,包括某种底物或激素水平升降时,或细胞不同阶段中酶活性的调节:(二)发育调控或称不可逆调控,是真核基因调控的精髓部分,它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。根据基因调控在同一事件中发生的先后次序,又可将其分为转录水平、转录后水平调控。后者又进一步分为RNA加工成熟过程调控、翻译水平调控和蛋白质加工水平的调控。 3细胞内第二信使包括哪些物质?有何作用?

用是暂时切断一条 DNA 链，形成酶-DNA 共价中间物而使超螺旋 DNA 松弛化，然后再将切断的单链 DNA 连接起来，而不需要任何辅助因子。而大肠杆菌中的 DNA 旋转酶(DNAgyrase)则的典型的拓扑异构酶Ⅱ，能将负超螺旋引入 DNA 分子，该酶能暂时性地切断和重新连接双链 DNA，同时需要 ATP 水解为 ADP 以供能。 3.基因表达答案要点：遗传信息从 DNA 到 RNA 再到蛋白质的过程。 4.前导肽答案要点：分析色氨酸操纵子前导肽的序列发现，它包括起始密码子 AUG 和终止密码子 UGA；如果翻译起始于 AUG，应该产生一个 14 个氨基酸的多肽，这个假设的多肽被称为前导肽（实际上还没有观察到）。 5.启动子答案要点：启动子是 DNA 分子可以与 RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。 6. DNA 分子克隆技术答案要点：（也称基因克隆技术）在体外将 DNA 分子片段与载体 DNA 片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中 DNA 分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成 DNA 重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的 DNA 分子片段。主要目的是获得某一基因或 NDA 片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引入的 DNA 片段不同，有两种 DNA 库，一种是基因组文库（genomic library）,另一种是 cDNA 库。 7.G 蛋白答案要点：受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白结合，使其释放活性因子，再与效应器发生反应。位于受体与效应器之间的则是偶联蛋白。目前所知的偶联蛋白种类较多，都属于结构和功能极为类似的一个家族，由于它们都能结合并水解 GTP，所以通常称 G 蛋白，即鸟苷酸调节蛋白（guanine nucleotide regulatory protein）。 8.受体型酪氨酸激酶答案要点：蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一组催化酪氨酸残基磷酸化的酶，他们通过从三磷酸腺苷上转移一个磷原子到酪氨酸残基上，而使底物蛋白活化. 目前，已发现 PTK 有 100 多个家族成员，他们通过活化底物蛋白，参与细胞的信号转导，最终，这些信号转导入细胞核内，引起某些基因表达水平的改变，使诸如细胞生长之类的复杂的细胞功能得以调节. 因此在调节细胞的分化、生长和激活中起到重要作用.根据 PTK 的结构，可分为受体型和非受体型 PTK 两大类，前者又称跨膜 PTK，后者又称细胞内 PTK. 生长因子受体 PTK(受体型酪氨酸激酶或 RTK): 这一类蛋白酪氨酸激酶为跨膜蛋白，其胞外部分为配体结合区，中间有跨膜区，胞内部分含有蛋白酪氨酸激酶的催化结构域. 根据他们的结构不同可分为，表皮生长因子受体(EGFR)家族、胰岛素受体家族、血小板衍生生长因子(PDGF)受体家族和成纤维细胞生长因子受体(FGFR)家族. 四、论述题（每题 10 分，共 30 分） 1. DNA 与蛋白质相互作用研究方法及其原理？答案要点：1、凝胶阻滞实验； 2、DNaseI 足迹实验。原理参见朱玉贤高教（二）版《现代分子生物学》教材 166~170 页。 2.试述真核生物基因表达调控的一般规律? 答案要点：分为两大类：（一）瞬时调控或称可逆调控，它相当于原核细胞对环境条件作出的反应，包括某种底物或激素水平升降时，或细胞不同阶段中酶活性的调节；（二）发育调控或称不可逆调控，是真核基因调控的精髓部分，它决定了真核细胞生长、分化、发育的全部进程。根据基因调控在同一事件中发生的先后次序，又可将其分为转录水平、转录后水平调控。后者又进一步分为 RNA 加工成熟过程调控、翻译水平调控和蛋白质加工水平的调控。 3.细胞内第二信使包括哪些物质?有何作用?