第四章愈伤组织培养 主要内容 材料的制备 愈伤诱导与分化 形态发生 愈伤的培养
第四章 愈伤组织培养 • 主要内容: • 材料的制备 • 愈伤诱导与分化 • 形态发生 • 愈伤的培养
第一若揎物材料(外植体)的制舒 1.一般植物组织都能诱发愈伤组织 诱导愈伤组织的成败关键主要不是实验材料,而 是培养条件,其中激素的成分和浓度是最重要的 因素。 双子叶植物为最多,单子叶植物(19905),此外 裸子植物、蕨类和藓类植物也有诱发成功的例子
第一节 植物材料（外植体）的制备 1.一般植物组织都能诱发愈伤组织。 诱导愈伤组织的成败关键主要不是实验材料，而 是培养条件，其中激素的成分和浓度是最重要的 因素。 双子叶植物为最多，单子叶植物(1990’s)，此外， 裸子植物、蕨类和藓类植物也有诱发成功的例子。 :
2材料必须完全无菌 微生物一旦与培养基接触,就迅速繁殖,抑制 愈伤组织的生长。 用抗菌素来抑制徼生物的生长,在短时间有效, 而且抗菌素只能对一定谱系中的细菌才产生作 用,该谱系以外的微生物仍然可以大量繁殖。 抗菌素还可能抑制植物组织的生长
2.材料必须完全无菌 微生物一旦与培养基接触，就迅速繁殖，抑制 愈伤组织的生长。 用抗菌素来抑制微生物的生长，在短时间有效， 而且抗菌素只能对一定谱系中的细菌才产生作 用，该谱系以外的微生物仍然可以大量繁殖。 抗菌素还可能抑制植物组织的生长
得到无菌材料,植物组织必须先进行消毒。 有好几种化学试剂都能起到表面消毒的作 用,试剂的选择及处理时间的长短要根据 材料对试剂的敏感性来决定
得到无菌材料，植物组织必须先进行消毒。 有好几种化学试剂都能起到表面消毒的作 用，试剂的选择及处理时间的长短要根据 材料对试剂的敏感性来决定
般都采用在消毒后能很容易去除的药剂。 因为消毒剂对植物细胞也有杀伤作用,若 不去除就会妨碍愈伤组织的发生。 例如用无菌水反复冲洗后可以把大部分药 剂都洗掉,或者能自动分解变成低毒性物 质
一般都采用在消毒后能很容易去除的药剂。 因为消毒剂对植物细胞也有杀伤作用，若 不去除就会妨碍愈伤组织的发生。 例如用无菌水反复冲洗后可以把大部分药 剂都洗掉，或者能自动分解变成低毒性物 质
本氯酸钠能分解成为具有杀菌效能的氯气,然 后就散失到空气中。 低浓度的氯化汞是一种令人满意的消毒剂,只 是难以去除,故在消毒后必须用大量清水冲洗 材料。 在材料放入消毒剂之前,先在乙醇中漂洗一下, 可以使材料表面弄湿,从而使消毒剂易于渗入 并杀死微生物
本氯酸钠能分解成为具有杀菌效能的氯气，然 后就散失到空气中。 低浓度的氯化汞是一种令人满意的消毒剂，只 是难以去除，故在消毒后必须用大量清水冲洗 材料。 在材料放入消毒剂之前，先在乙醇中漂洗一下， 可以使材料表面弄湿，从而使消毒剂易于渗入 并杀死微生物
3外植体的大小和形态 消毒后的植物材料,即可进行培养。 从外表均一的外植体长出的愈伤组织,在开始阶 段是相当一致的,而从茎、根等器官切段上长出 的则是一个混杂的愈伤组织。 有些外植体外表上看来是由同一类细胞组成,例 如烟草的髓、胡萝卜的次生韧皮部、菊芋的块茎 等,这些细胞中DNA的含量有很大差别。这种差 别可能是由于细胞核中染色体数目的差别,即倍 性不同所造成的
3.外植体的大小和形态 消毒后的植物材料，即可进行培养。 从外表均一的外植体长出的愈伤组织，在开始阶 段是相当一致的，而从茎、根等器官切段上长出 的则是一个混杂的愈伤组织。 有些外植体外表上看来是由同一类细胞组成，例 如烟草的髓、胡萝卜的次生韧皮部、菊芋的块茎 等，这些细胞中DNA的含量有很大差别。这种差 别可能是由于细胞核中染色体数目的差别，即倍 性不同所造成的
接种的外植体的大小和形状并不需要严格限制 不能太小,小于肉眼能见的限度时,细胞分裂可 能难以发生。故一般要求切块的大小要适当。 外植体的细胞数目多,获得愈伤组织的机会也多
接种的外植体的大小和形状并不需要严格限制 不能太小，小于肉眼能见的限度时，细胞分裂可 能难以发生。故一般要求切块的大小要适当。 外植体的细胞数目多，获得愈伤组织的机会也多
如果目的仅在于得到愈伤组织,那末将茎的切 段、叶、根、花、果实或种子,或其中的某种 组织切成一片片或一块块放到培养基上就可以 了
如果目的仅在于得到愈伤组织，那末将茎的切 段、叶、根、花、果实或种子，或其中的某种 组织切成一片片或一块块放到培养基上就可以 了
如果要定量地研究愈伤组织的发生,那末外植体 的大小必须一致,形状和组成也要基本相同。进 行这类研究常选用组织块较大的材料,例如胡萝 卜的贮藏根、马铃薯的块茎、菊芋、荷兰防风草 等。这样才能得到足够数量的、无菌的、一致的 适合于培养的外植体
如果要定量地研究愈伤组织的发生，那末外植体 的大小必须一致，形状和组成也要基本相同。进 行这类研究常选用组织块较大的材料，例如胡萝 卜的贮藏根、马铃薯的块茎、菊芋、荷兰防风草 等。这样才能得到足够数量的、无菌的、一致的、 适合于培养的外植体