西南大学：《家蚕遗传育种学》实验指导书.doc_大学文库

实验一蚕种生产计划的编制实验目的要求了解蚕种计划生产的重要性和计划生产的安排。掌握蚕种生产计划的编制方二.实验原理蚕种繁育是按生产发展需求,根据“以销定产”的原则来组织生产,计划性很强;又因我国蚕种生产是分级繁育的,生产周期相当长,而蚕种的有效贮藏时间又短,用途单一,超过冷藏期限的蚕种就要报废。蚕种生产多了就易造成浪费, 少了又不能满足生产的需要,因此蚕种生产开始以前,必须从各方面作好周密、细致、充分、准确的准备,以免造成不应有的损失。另外,蚕种繁育系数也是拟定蚕种生产计划的依据之蚕种繁育系数是指一个蛾区或1克蚁量所生产的蚕种数。一般: ◆原原种的繁育系数,是指原原母种收蚁蛾区平均生产的原原种蛾数 ◆原种的繁育系数,是指每克蚁量原原种所生产的28蛾框制原种张数; 普通种的繁育系数,是指每克蚁量原种所生产的散卵或平附种的盒(张) 数实验方法与步骤 1.确定计划生产量: 根据上级部门下达的任务,在此基础上增加3%预备量作为计划生产量。计算原蚕饲育蚁量根据计划生产量和繁育系数,算出原蚕饲育蚁量。 3.计算原种数量: 根据原蚕饲育蚁量,再按每张原种收蚁量的3.5-4g,算出所需原种数量, 再加5-10%的预备量,即是实际的原种数量 4.计算原原蚕蚁量数: 根据原种数,按各品种的原种繁育系数估计出各品种应该饲养的原原蚕蚁量数。 5.计算原原种蛾数: 根据每克原原蚕蚁量所需的原原种催青蛾数(10-12蛾),及可算出原原种需要的蛾数。再加上10%的预备量,就是实际所需的原原种蛾数。 6.计算出饲育的母种蛾数: 按饲育一蛾的繁育蛾数(25-32蛾)可得该蛾数 7.计算出母种的催青蛾数: 按原原种收一蛾的催青蛾数(2一3蛾)可算出繁育一定量的普通种所需的原原母种的催青蛾数。四.作业问要生产苏5蚕种3万张普通种,需要原种、原原种、原原母种各多少?

- 2 - 实验一蚕种生产计划的编制一．实验目的要求了解蚕种计划生产的重要性和计划生产的安排。掌握蚕种生产计划的编制方法。二．实验原理蚕种繁育是按生产发展需求，根据“以销定产”的原则来组织生产，计划性很强；又因我国蚕种生产是分级繁育的，生产周期相当长，而蚕种的有效贮藏时间又短，用途单一，超过冷藏期限的蚕种就要报废。蚕种生产多了就易造成浪费，少了又不能满足生产的需要，因此蚕种生产开始以前，必须从各方面作好周密、细致、充分、准确的准备，以免造成不应有的损失。另外，蚕种繁育系数也是拟定蚕种生产计划的依据之一。蚕种繁育系数是指一个蛾区或 1 克蚁量所生产的蚕种数。一般： ◆原原种的繁育系数，是指原原母种收蚁蛾区平均生产的原原种蛾数； ◆原种的繁育系数，是指每克蚁量原原种所生产的 28 蛾框制原种张数； ◆普通种的繁育系数，是指每克蚁量原种所生产的散卵或平附种的盒（张）数。三．实验方法与步骤 1．确定计划生产量：根据上级部门下达的任务，在此基础上增加 3％预备量作为计划生产量。 2．计算原蚕饲育蚁量：根据计划生产量和繁育系数，算出原蚕饲育蚁量。 3．计算原种数量：根据原蚕饲育蚁量，再按每张原种收蚁量的 3.5－4g，算出所需原种数量，再加 5－10％的预备量，即是实际的原种数量。 4．计算原原蚕蚁量数：根据原种数，按各品种的原种繁育系数估计出各品种应该饲养的原原蚕蚁量数。 5．计算原原种蛾数：根据每克原原蚕蚁量所需的原原种催青蛾数（10－12 蛾），及可算出原原种需要的蛾数。再加上 10％的预备量，就是实际所需的原原种蛾数。 6．计算出饲育的母种蛾数：按饲育一蛾的繁育蛾数（25－32 蛾）可得该蛾数。 7．计算出母种的催青蛾数：按原原种收一蛾的催青蛾数（2－3 蛾）可算出繁育一定量的普通种所需的原原母种的催青蛾数。四．作业问要生产苏 5 蚕种 3 万张普通种，需要原种、原原种、原原母种各多少？

实验二催青期胚胎发育观察实验目的要求通过实验熟练掌握蚕胚胎解剖技术,正确认识催青期各发育时期的胚胎形态,以利蚕种催青期的合理保护和适时地进行技术处理。二.实验原理蚕卵从产下到孵化成蚁蚕,无论是越年卵或非越年卵,随着卵期的进展,从受精开始,经过卵裂,胚胎的分化、形成,胚体的发育及滞育等,发生了一系列的变化。而且胚胎的不同时期,对环境要求也不同,为了达到蚕种在预定日期收蚁,孵化齐一,孵化率高,蚁体强健,化性控制,生产越年卵的目的,在催青期必须对蚕卵进行胚胎发育观察,准确判定胚胎的发育阶段。根据胚胎的发育情况, 采取相应的技术处理。三.实验材料蚕种(平附、散卵) 四.实验器具与药品 1.器具显微镜、解剖镜、烧杯、二重皿、吸管、镊子、载玻片、酒精灯、解剖针、毛笔(4号细画笔)、三角架、石棉网、电子天平或粗天平、玻棒等。 2.药品氢氧化钾(苛性钾)或市售液体烧碱、酒精五.实验方法与步骤 1.溶液配制称取氢氧化钾(苛性钾)20g溶于100ml的水中,即成20%浓度的氢氧化钾(苛性钾)溶液。冷藏浸酸蚕种要配用30%的浓度。市售液体烧碱加三分之一水稀释后即可使用溶液升温解剖时,现将溶液加热煮沸,到沸点后,就降低热源温度或将溶液暂离热源,见溶液停止翻泡时,即是浸渍蚕卵的最适时期 3.浸渍(溶解卵壳) 取蚕卵30~40粒左右(平框种连同蚕连纸,散卵需将蚕卵盛在用铜纱布或纱布制成的小瓢内),投入升温的溶液中。左右摆动,约经10秒钟左右,视蚕卵卵面颜色呈赤豆色(或卵粒脱落)时,立即取出投入盛有清水的二重皿中漂洗数次(至卵上粘附的药液去处干净为止)。 4.解剖(脱壳) 将漂洗干净的蚕卵放在另一盛有清水的二重皿中,用吸管吸水对准蚕卵反复冲击,使胚体与卵壳分离脱出(若不易脱壳时,可用60℃左右的热水冲击)。 5.整理与镜检解出的胚体用吸管随同清水移到载玻片上,在解剖镜下用毛笔轻轻扫动胚体,除去附着在胚体上的脂肪等杂物后镜检。仔细观察胚体形态特征

- 3 - 实验二催青期胚胎发育观察一．实验目的要求通过实验熟练掌握蚕胚胎解剖技术，正确认识催青期各发育时期的胚胎形态，以利蚕种催青期的合理保护和适时地进行技术处理。二．实验原理蚕卵从产下到孵化成蚁蚕，无论是越年卵或非越年卵，随着卵期的进展，从受精开始，经过卵裂，胚胎的分化、形成，胚体的发育及滞育等，发生了一系列的变化。而且胚胎的不同时期，对环境要求也不同，为了达到蚕种在预定日期收蚁，孵化齐一，孵化率高，蚁体强健，化性控制，生产越年卵的目的，在催青期必须对蚕卵进行胚胎发育观察，准确判定胚胎的发育阶段。根据胚胎的发育情况，采取相应的技术处理。三．实验材料蚕种（平附、散卵）四．实验器具与药品 1．器具显微镜、解剖镜、烧杯、二重皿、吸管、镊子、载玻片、酒精灯、解剖针、毛笔（4 号细画笔）、三角架、石棉网、电子天平或粗天平、玻棒等。 2．药品氢氧化钾（苛性钾）或市售液体烧碱、酒精五．实验方法与步骤 1．溶液配制称取氢氧化钾（苛性钾）20g 溶于 100ml 的水中，即成 20％浓度的氢氧化钾（苛性钾）溶液。冷藏浸酸蚕种要配用 30％的浓度。市售液体烧碱加三分之一水稀释后即可使用。 2．溶液升温解剖时，现将溶液加热煮沸，到沸点后，就降低热源温度或将溶液暂离热源，见溶液停止翻泡时，即是浸渍蚕卵的最适时期。 3．浸渍（溶解卵壳）取蚕卵 30～40 粒左右（平框种连同蚕连纸，散卵需将蚕卵盛在用铜纱布或纱布制成的小瓢内），投入升温的溶液中。左右摆动，约经 10 秒钟左右，视蚕卵卵面颜色呈赤豆色（或卵粒脱落）时，立即取出投入盛有清水的二重皿中漂洗数次（至卵上粘附的药液去处干净为止）。 4．解剖（脱壳）将漂洗干净的蚕卵放在另一盛有清水的二重皿中，用吸管吸水对准蚕卵反复冲击，使胚体与卵壳分离脱出（若不易脱壳时，可用 60℃左右的热水冲击）。 5．整理与镜检解出的胚体用吸管随同清水移到载玻片上，在解剖镜下用毛笔轻轻扫动胚体，除去附着在胚体上的脂肪等杂物后镜检。仔细观察胚体形态特征

实验三漂白粉有效氯含量测定及桑叶叶面消毒实验目的要求通过本实验,进一步了解漂白粉的性质、原理、作用掌握漂白粉有效氯测定方法 3.掌握消毒液的配制方法 4.掌握漂白粉液有效氯的测定方法 5.掌握桑叶叶面消毒的漂白粉液浓度的配制和使用方法。漂白粉的性状漂白粉又称含氯石灰,学名次氯酸钙。是将氯气通入石灰水中制成的一种具有氯刺激性气味的白色粉状物,主要成分是次氯酸钙,还有氢氧化钙和氯化钙等是一种高效、广谱的常用消毒剂,一般含有效氯25-30%。它的优点是,价格低廉且具有极强而迅速的杀菌作用。其杀菌机理,最主要的是次氯酸和氧化作用,因它溶解于水中而形成次氯酸根离子。由于次氯酸根不稳定,可以进一步分解而释放出初生态氧及氯气。初生态氧具有强烈氧化作用, 使病原微生物的蛋白质变性、凝固而失去致病力。氯气本身具有杀菌作用。因此, 含氯制剂的质量和消毒效果取决于次氯酸根的含量,次氯酸浓度愈高,杀菌力愈强。在酸性环境中杀菌作用増强,在碱性环境中杀菌作用减弱。它的缺点是,漂白粉中的次氯酸钙极不稳定,如把漂白粉暴露在空气中,会吸收水气而潮解,并很快分解产生次氯酸而散逸:同时也容易与空气中二氧化碳化合生成无杀菌作用的氯化钙而降低其消毒效果。在高温、阳光下分解更迅速。所以必须贮藏在密闭容器中,保持阴凉干燥,不可与易燃物品放在一起,对金属器皿及衣服有腐蚀及褪色作用,盛装时用陶器或木器。贮放时间不宜过长,一般保存条件下,每月损失有效氯1-3%,储存时间一般三至六个月,夏季空气湿度大保存期相对缩短。因此,在使用时,不能以出厂时标明的氯含量来计算漂白粉用量,必须预先测定其有效氯含量,否则达不到预期的消毒效果。测定漂白粉有效氯含量有多种方法【硫代硫酸钠滴定法、酒石酸锑钾滴定法、碘化钾滴定法、简易滴定法(碘化钾测定法、吐酒石测定法、蓝黑墨水滴定法。)】。这里介绍两种测定方法: 硫代硫酸钠滴定法和蓝黑墨水滴定法。前者较后者复杂,但较后者精确。附:漂白粉精是从漂白粉中提取的较纯的次氯酸钙,含有效氯56%左右。在生产上,配成1%有效氯浓度的漂白粉液,可以消毒蚕室、蚕具、蔟室、蔟具、桑室及周围场地。方法以喷洒消毒效果好。配成0.3%有效氯漂白粉澄清液消毒蚕种,可杀死卵面病原物;也可作桑叶叶面消毒,但喷洒后务必使氯气挥发一下再喂蚕。实验材料漂白粉四.实验器材与药品 1.器材酸式滴定管1支、150n烧杯2只、玻璃棒2支、5nl,10m,25n吸量

- 5 - 实验三漂白粉有效氯含量测定及桑叶叶面消毒一．实验目的要求 1．通过本实验，进一步了解漂白粉的性质、原理、作用。 2．掌握漂白粉有效氯测定方法。 3．掌握消毒液的配制方法。 4．掌握漂白粉液有效氯的测定方法。 5．掌握桑叶叶面消毒的漂白粉液浓度的配制和使用方法。二．漂白粉的性状漂白粉又称含氯石灰，学名次氯酸钙。是将氯气通入石灰水中制成的一种具有氯刺激性气味的白色粉状物，主要成分是次氯酸钙，还有氢氧化钙和氯化钙等, 是一种高效、广谱的常用消毒剂，一般含有效氯 25－30％。它的优点是，价格低廉且具有极强而迅速的杀菌作用。其杀菌机理，最主要的是次氯酸和氧化作用，因它溶解于水中而形成次氯酸根离子。由于次氯酸根不稳定，可以进一步分解而释放出初生态氧及氯气。初生态氧具有强烈氧化作用，使病原微生物的蛋白质变性、凝固而失去致病力。氯气本身具有杀菌作用。因此，含氯制剂的质量和消毒效果取决于次氯酸根的含量，次氯酸浓度愈高，杀菌力愈强。在酸性环境中杀菌作用增强，在碱性环境中杀菌作用减弱。它的缺点是，漂白粉中的次氯酸钙极不稳定，如把漂白粉暴露在空气中，会吸收水气而潮解，并很快分解产生次氯酸而散逸；同时也容易与空气中二氧化碳化合生成无杀菌作用的氯化钙而降低其消毒效果。在高温、阳光下分解更迅速。所以必须贮藏在密闭容器中，保持阴凉干燥，不可与易燃物品放在一起，对金属器皿及衣服有腐蚀及褪色作用，盛装时用陶器或木器。贮放时间不宜过长，一般保存条件下，每月损失有效氯 1-3％，储存时间一般三至六个月，夏季空气湿度大保存期相对缩短。因此，在使用时，不能以出厂时标明的氯含量来计算漂白粉用量，必须预先测定其有效氯含量，否则达不到预期的消毒效果。测定漂白粉有效氯含量有多种方法【硫代硫酸钠滴定法、酒石酸锑钾滴定法、碘化钾滴定法、简易滴定法（碘化钾测定法、吐酒石测定法、蓝黑墨水滴定法。）】。这里介绍两种测定方法：硫代硫酸钠滴定法和蓝黑墨水滴定法。前者较后者复杂，但较后者精确。附：漂白粉精是从漂白粉中提取的较纯的次氯酸钙，含有效氯 56％左右。在生产上，配成 l％有效氯浓度的漂白粉液，可以消毒蚕室、蚕具、蔟室、蔟具、桑室及周围场地。方法以喷洒消毒效果好。配成 0.3％有效氯漂白粉澄清液消毒蚕种，可杀死卵面病原物；也可作桑叶叶面消毒，但喷洒后务必使氯气挥发一下再喂蚕。三．实验材料漂白粉四．实验器材与药品 1．器材酸式滴定管 1 支、150ml 烧杯 2 只、玻璃棒 2 支、5ml，10ml，25ml 吸量

- 6 - 管各一支（微量加样器）、电子天平、50ml，100ml 量筒各一只、容量瓶、三角瓶、试剂瓶、胶头吸管、滴定架、凡士林。 2．药品蒸馏水、硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）、碘化钾、冰醋酸、淀粉、蓝黑墨水。五．试剂及配制 1．蒸馏水 2．0.282N 的硫代硫酸钠标液：称硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）69.99g 于容量瓶内，加少许蒸馏水溶解，再定容至 1000ml。 3．碘化钾：市售碘化钾直接使用。 4．冰醋酸：市售冰醋酸直接使用。 5．1%的淀粉指示剂：称可溶性淀粉 1 克，先加少量水调成湖状，再加入蒸馏水至 100 毫升。 6．蓝黑墨水：一般常用的国产蓝黑墨水，只要未渗过水和没有产生沉淀的都可。六．测定方法、步骤（一）硫代硫酸钠滴定法 1．原理漂白粉在酸性溶液中能氧化碘化钾析出碘，用已知浓度的硫代硫酸钠标准液来滴定。根据用去硫代硫酸钠标准液的毫升数，计算漂白粉中“有效氯”含量， 1 毫升 0.1N 硫代硫酸钠相当于 0.00354 克氯。为了计算方便，把硫代硫酸钠配成 0.282N（0.141mol/L），则 1 毫升 0.282N 硫代硫酸钠标准液相当于 0.01 克氯。化学反应如下： Cl Ca + 2HCl CaCl2 + Cl2 + H2O OCl Cl2 + 2KI 2KCl + I2 I2 + 2Na2S2O3 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 2．漂白粉有效氯测定的操作步骤： ① 称取需作有效氯含量测定的漂白粉 1g，倒入三角瓶内。 ② 用少许蒸馏水将漂白粉拌和并研碎，再稀释至 100ml，充分搅均。 ③ 在上液加入 3g 碘化钾搅均，液呈褐色。 ④ 在上液加入 2-3 毫升冰醋酸，液呈澄清的棕红色。 ⑤ 用配好的硫代硫酸钠滴定，至淡黄色时，加 1-2 毫升 1%的淀粉指示剂，液呈蓝色。 ⑥ 继续一滴一滴地滴硫代硫酸钠，至液无色为止。 ⑦ 关好滴定管活塞，过 1-2 分钟后，观测记录硫代硫酸钠的用量，用去的毫升数即为该漂白粉的有效氯含量。 ⑧ 根据测定的漂白粉有效氯含量，就可按下式配制成所需有效氯含量的漂白粉液

3.漂白粉母液的配制用已测定有效氯含量的漂白粉配制漂白粉母液。例如用已知漂白粉有效氯含量为25%的漂白粉,配制含有效氯1%的漂白粉母液时,可根据如下公式来配加水倍数(或加灰倍数)=(原浓度目的浓度)/目的浓度则1斤漂白粉加水24斤,即成含有效氯1%的漂白粉液了。配制时先用少量水调成湖状,然后加入总水量,充分搅拌,加盖静置1-2小时,取澄清液消毒配制漂白粉防僵粉也可应用上述公式要特别注意,在配制消毒液时,实际上不可能将漂白粉里面的有效氯全部浸岀来,也就是说即使知道了漂白粉的浓度,也不能配制成我们所需准确浓度的消毒液。因此,按上面配制好的漂白粉液的浓度还必须再次测定,再根据所测得的实际含量,来配制所需的目的浓度的消毒液。 4.漂白粉液中有效氯含量测定: ①取已配好的漂白粉液25毫升,放入烧杯中。 ②加入碘化钾2-3克和冰醋酸1-2毫升。 ③用0.282N硫代硫酸钠标液滴定,方法与漂白粉中有效氯测定相同。 ④漂白粉液中有效氯含量可按下列公式计算。用去0282N硫代硫酸钠液毫升数×0.01 溶液中有效氯含量(%)= ×100 取样毫升数 (二)蓝黑墨水滴定法此法所测的结果,与上述测定法虽有差异(在1%以内),但方法简单,试剂及器材来源广泛,很适宜于野外工作使用。 1.原理: 蓝黑墨水能为有效氯漂白,故可根据消耗蓝黑墨水的体积计算漂白粉中有效氯含量。 2.操作步骤: ①称取需作有效氯含量测定的漂白粉1go ②用水(冷开水、洁净水或蒸馏水均可)将漂白粉拌和并硏碎,稀释至 20m,充分搅拌后静置。 ③待溶液澄清后。用洁净的胶头吸管吸取一定量的上清液,一滴一滴地滴于小烧杯内,共滴38滴(不能多滴或少滴)。 ④将上面所用过的胶头吸管洗净,吸取少量蓝黑墨水在管壁内转动后弃掉 (这是避免管壁可能存留着少量水分,使墨水浓度变稀),然后再吸取定量的蓝黑墨水向杯中的漂白粉上清液进行滴定,边滴边用玻璃棒搅拌或晃动均匀,溶液颜色由棕色变为黄色,最后出现稳定的蓝绿色时,即为滴定终点,记下所用蓝墨水的滴数 ⑤所用的蓝墨水的滴数即为漂白粉有效氯的百分数(如:用蓝墨水25滴, 那么漂白粉的有效氯即为25%) (三)注意事项 1.滴漂白粉上清液及滴蓝墨水时要用同一吸管,管头不破不缺,滴管垂直向下,用力均匀一致,这样滴出的每一滴较为均匀

- 7 - 3．漂白粉母液的配制用已测定有效氯含量的漂白粉配制漂白粉母液。例如用已知漂白粉有效氯含量为 25％的漂白粉，配制含有效氯 1％的漂白粉母液时，可根据如下公式来配制：加水倍数（或加灰倍数）=（原浓度-目的浓度）/目的浓度则 1 斤漂白粉加水 24 斤，即成含有效氯 1%的漂白粉液了。配制时先用少量水调成湖状，然后加入总水量，充分搅拌，加盖静置 1-2 小时，取澄清液消毒。配制漂白粉防僵粉也可应用上述公式。要特别注意，在配制消毒液时，实际上不可能将漂白粉里面的有效氯全部浸出来，也就是说即使知道了漂白粉的浓度，也不能配制成我们所需准确浓度的消毒液。因此，按上面配制好的漂白粉液的浓度还必须再次测定，再根据所测得的实际含量，来配制所需的目的浓度的消毒液。 4．漂白粉液中有效氯含量测定： ① 取已配好的漂白粉液 25 毫升，放入烧杯中。 ② 加入碘化钾 2-3 克和冰醋酸 1-2 毫升。 ③ 用 0.282N 硫代硫酸钠标液滴定，方法与漂白粉中有效氯测定相同。 ④ 漂白粉液中有效氯含量可按下列公式计算。用去 0.282N 硫代硫酸钠液毫升数×0.01 溶液中有效氯含量（%）= ×100 取样毫升数（二）蓝黑墨水滴定法此法所测的结果，与上述测定法虽有差异（在 1％以内），但方法简单，试剂及器材来源广泛，很适宜于野外工作使用。 1．原理：蓝黑墨水能为有效氯漂白，故可根据消耗蓝黑墨水的体积计算漂白粉中有效氯含量。 2．操作步骤： ① 称取需作有效氯含量测定的漂白粉 1g。 ② 用水（冷开水、洁净水或蒸馏水均可）将漂白粉拌和并研碎，稀释至 20ml，充分搅拌后静置。 ③ 待溶液澄清后。用洁净的胶头吸管吸取一定量的上清液，一滴一滴地滴于小烧杯内，共滴 38 滴（不能多滴或少滴）。 ④ 将上面所用过的胶头吸管洗净，吸取少量蓝黑墨水在管壁内转动后弃掉（这是避免管壁可能存留着少量水分，使墨水浓度变稀），然后再吸取定量的蓝黑墨水向杯中的漂白粉上清液进行滴定，边滴边用玻璃棒搅拌或晃动均匀，溶液颜色由棕色变为黄色，最后出现稳定的蓝绿色时，即为滴定终点，记下所用蓝墨水的滴数。 ⑤ 所用的蓝墨水的滴数即为漂白粉有效氯的百分数（如：用蓝墨水 25 滴，那么漂白粉的有效氯即为 25%）。（三）注意事项 1．滴漂白粉上清液及滴蓝墨水时要用同一吸管，管头不破不缺，滴管垂直向下，用力均匀一致，这样滴出的每一滴较为均匀