色谱现象 纸层析 彐-[ In1903,俄国植物学家 Michael Tsweett.work( see Ber!Deu botan.Ges.,1906;24:384) Chromatography =(chromatus-color, graphein= to write) 流动相 色谱柱 色谱柱 图形包含的意义 酸钙 碳酸钙B、分离机制 、柱效 D、分离度
色谱现象 In 1903，俄国植物学家Michael Tsweett’s Work(see Ber. Deut. Botan. Ges., 1906; 24: 384). Chromatography = (chromatus = color, graphein = to write). A、图形包含的意义 B、分离机制 C、柱效 D、分离度 纸层析
第12章色谱学基础 mAU tetracaine cocaine nalorphine 1、一般过程 2、分类 3、名词术语 4、理论 4.1、塔板理论 42、速率理论 43、分离度 44、定性分析 45、定量分析 46、定量方法 5应用:违禁药 75 125 17.5mi 物分析 Ty pic: l hair sample from a cocaine user positive for cocaine at 3.4 ng/mg
第12章 色谱学基础 1、一般过程 2、分类 3、名词术语 4、理论 4.1、塔板理论 4.2、速率理论 4.3、分离度 4.4、定性分析 4.5、定量分析 4.6、定量方法 5 应用: 违禁药 物分析
1色谱一般过程 组件及过程: 溶剂缓冲液 A色谱柱( column) 样品 B固定相( (stationary phase) C流动相( flow phase): D洗脱液( elution): 泵 E检测器( detector) F部分收集器( portion collector) 柱 计算机/ 柱 控制器 注入的禅品 监测 离入口的距离 废液 八人八丿 馏分收集器 A 色谐装置示意图
1 色谱一般过程 组件及过程： A 色谱柱(column)： B 固定相(stationary phase)： C 流动相(flow phase)： D 洗脱液(elution)： E 检测器(detector)： F 部分收集器(portion collector)
2色谱分类 1)、按应用的目的 A、制备性色谱( preparation Chromatography):工业规模,实验室规模 B、分析性色谱( analytical Chromatography):GC、LC、HPC、TIC等。 2)、按流动相 A、GC 固色谱法(固定相为固体 气液色谱法(将不挥发的液体固定在适当的固体载体上作为固定相) B、LC 液-固色谱(固定相为固体) 液液色谱(液体固定相固定在适当的固体上) 3)、按色谱的展开形式 A、柱色谱法 B、毛细管色谱法 平板色谱法:硅胶板色谱、纸色谱
2 色谱分类 1)、按应用的目的 A、制备性色谱(preparationChromatography)：工业规模，实验室规模 B、分析性色谱(analyticalChromatography)：GC、LC、HPLC、TLC等。 2)、按流动相 A、GC: 气-固色谱法(固定相为固体) 气-液色谱法(将不挥发的液体固定在适当的固体载体上作为固定相) B 、LC 液-固色谱(固定相为固体) 液-液色谱(液体固定相固定在适当的固体上) 3)、按色谱的展开形式 A、柱色谱法 B、毛细管色谱法 C、平板色谱法：硅胶板色谱、纸色谱
2色谱分类 4)、按展开程序 B A)、洗脱法 B)、顶替法 C)、迎头法 LB (b) A+B 5)、按原理分类 方法 主要分离 测定被分离物对两相 名称 过程的性质 亲和力的大小的单位 吸附色谱法吸附 吸附系数 分配色谱法 萃取 分配常数 离子交换色谱法静电作用和扩散 电荷电离常数和有效的离子直径 凝胶色谱法 扩散 有效分子尺寸 生物亲和色谱法与亲和剂的生物特征的相互作用无通用单位
2 色谱分类 4)、按展开程序 A)、洗脱法 B)、顶替法 C)、迎头法 5)、按原理分类
2色谱分类 国际通用色谱法分类及其缩写 按相分 按分离过程分类 为法分类 色谱法 缩写色谱法 缩写 液相色谱法|LC 平板 FBC 纸 PC 薄层 TLC 高效薄层 HP TLC 柱 高压(高效)液相HPIC 液液色谱法 分配 反相 RPC 凝胶渗透 GPC 离子交换 IEC 液固 LSC 吸附 Cc 离子交换 IEC 亲和力 PPGC 硫水性 气相色谱法GcC 柱 Cc 程序升温气相 PTGC 程序升压气相 PPGC 气液色谱法GLc|分配 气固色谱法Gsc 吸附
2 色谱分类 国际通用色谱法分类及其缩写
3色谱的名词术语 分配系数m: m=C/C 式中,c和c分别为组份在固定相 和流动相中的浓度 类型:A、B型曲线是一条典型的 吸附等温线,吸附色谱法属于这 类曲线。C和D型吸附等温线很 少遇到。C曲线为线性分配等温 线 线性色谱:溶质浓度低时,m为常 数时的色谱 意义:容易理解,溶质流过色谱柱 时,m大的组份通过色谱柱所 要的时间长,m小的组份需要的0 时间短;当样品中各组份在两相 的m不同时,就能实现差速迁移 达到分离的目的。 典型的分配等温线cs,Cm分别是坐分 Why? 在固定相和流动相中的浓度
3 色谱的名词术语 分配系数m： 式中，cs和cm分别为组份在固定相 和流动相中的浓度。 m类型：A、B型曲线是一条典型的 吸附等温线，吸附色谱法属于这 类曲线。C和D型吸附等温线很 少遇到。C曲线为线性分配等温 线。 线性色谱：溶质浓度低时，m为常 数时的色谱 意义：容易理解，溶质流过色谱柱 时，m大的组份通过色谱柱所需 要的时间长，m小的组份需要的 时间短；当样品中各组份在两相 的m不同时，就能实现差速迁移， 达到分离的目的。 s m m = c c Why?
3色谱的名词术语 色谱术语: 基线: B、峰高:色谱峰顶与基线间的垂 直距离,以h表示。 C、保留值: L(1+m,) 死时间tn:不被固定相吸附或溶 解的物质进入色谱柱时,从进 EA-20dF 样到出现峰极大值所需的时间 H 因为物质不被固定相吸附,故 进样 其流动速度将与流动相的流动 速度相近: 空气峰 L 保留时间t:试样从进样到柱后出 现峰极大点时所经历的时间。 tM A B 调整保留时间t
3 色谱的名词术语 色谱术语： A、基线： B、峰高：色谱峰顶与基线间的垂 直距离，以h表示。 C、保留值： 死时间tm：不被固定相吸附或溶 解的物质进入色谱柱时，从进 样到出现峰极大值所需的时间。 因为物质不被固定相吸附，故 其流动速度将与流动相的流动 速度相近： 保留时间t r：试样从进样到柱后出 现峰极大点时所经历的时间。 调整保留时间t r ’ ： . ( ) 0 , 1 u L m t i i m + =
3色谱的名词术语 t的表达:时间单位(如s,d,h)距离单位 (如cm),体积(m,)表示 t意义:色谱法定性的基本依据,但同 组份的t常受到流动相流速的影响,因 20\F 此色谱工作者有时用保留体积等参数进 行定性检定。 进样 空气峰 D、死体积Ⅴ:指色谱柱内固定相颗粒间 0 所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头 间的空间以及检测器的空间的总和, 后两项很小而可忽略不计时,V可由 n与流动相体积流速Fml/min)计算: E、保留体积ⅤR:指从进样开始到被测组 份在柱后出现浓度极大点时所通过的流 动相体积。保留体积与t的关系如 t F、调整保留体积VR:某组份V扣除vW= 称该组份的VR,即 R
3 色谱的名词术语 t r的表达：时间单位(如s, d, h), 距离单位 (如cm)，体积(ml, l)表示。 t r意义：色谱法定性的基本依据，但同一 组份的t r常受到流动相流速的影响，因 此色谱工作者有时用保留体积等参数进 行定性检定。 D、死体积VM：指色谱柱内固定相颗粒间 所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头 间的空间以及检测器的空间的总和，当 后两项很小而可忽略不计时， VM可由 tm与流动相体积流速F0 (ml/min)计算： E、保留体积VR：指从进样开始到被测组 份在柱后出现浓度极大点时所通过的流 动相体积。保留体积与t r的关系如下： F、调整保留体积V’ R：某组份VR扣除VM 后，称该组份的V’ R，即
3色谱的名词术语 G、相对保留值yx:某组份2与组份1的调整保留值之比 即: 2,1 由于y21只与柱温及固定相的性质有关,而与柱径 柱长、填充情况及流动相流速无关,因此,它是色 谱法中,如GC、HPLC中,广泛使用的定性数据 注意:Y21绝不是两个组份保留时间或保留体积之比 在定性分析中,通常固定一个色谱峰作为标值(s),然后 再求其它峰()对这个峰的相对保留值。此时γ;可能 大于1,也可能小于1。在多元混合物分析中,通常 选择一对最难分离的物质对,将它们的相对保留值 作为重要参数。在这种特殊情况下,可用符号a表示 2/,1 式中t2为下一峰的调整保留时间,所以这时a总是 大于1
3 色谱的名词术语 G、相对保留值2,1：某组份2与组份1的调整保留值之比， 即： 由于2,1只与柱温及固定相的性质有关，而与柱径、 柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它是色 谱法中，如GC、HPLC中，广泛使用的定性数据。 注意：2,1绝不是两个组份保留时间或保留体积之比 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标值(s), 然后 再求其它峰(i)对这个峰的相对保留值。此时r,i 可能 大于1，也可能小于1。在多元混合物分析中，通常 选择一对最难分离的物质对，将它们的相对保留值 作为重要参数。在这种特殊情况下，可用符号a表示： 式中t ’ r,2为下一峰的调整保留时间，所以这时a总是 大于1