蛋白沉淀法与饮食文化 1)、豆腐的由来:“来其”、“黎其”,汉朝淮 南王刘安 2) 人得道,鸡犬升天
蛋白沉淀法与饮食文化 1）、豆腐的由来：“来其”、“黎其”，汉朝淮 南王刘安 2）、一人得道，鸡犬升天
可题 可题 A、1941-12-7.7:59am 珍珠港事件一烧伤-蛋白流失,感染 B、急性肾炎-蛋白流失 人血清白蛋白
问题 问题： A、1941-12-7, 7:59am 珍珠港事件 --- 烧伤 --- 蛋白流失，感染 B、急性肾炎 ----- 蛋白流失 人血清白蛋白
第十章蛋白质沉淀法 1、概述 2、蛋白质溶解 3、蛋白质溶液的稳定因素 4、蛋白质沉淀方法分类 5、盐析法 6、lpH水- pl value调节法 7、有机溶剂沉淀法 8、亲水聚合物沉淀法 9、沉淀动力学 10、 applications
第十章 蛋白质沉淀法 1、概述 2、蛋白质溶解 3、蛋白质溶液的稳定因素 4、蛋白质沉淀方法分类 5、盐析法 6、|pH水 – pI| Value调节法 7、有机溶剂沉淀法 8、亲水聚合物沉淀法 9、沉淀动力学 10、Applications
1概述 定义 常用加入试剂的方法,改变溶剂和溶质的能量平 衡来降低其溶解度,使产物离开溶液生成不溶性 颗粒,沉降析出。沉淀具有浓缩与分离的双重作 用 与结晶联系 在本质上都是新相析出的过程,主要是物理变化, 当然也存在化学反应的沉淀或结晶 区别 结晶为同类分子或离子以有规则排列形式析出 沉淀为同类分子或离子以无规排列形式析出
1 概述 定义 常用加入试剂的方法，改变溶剂和溶质的能量平 衡来降低其溶解度，使产物离开溶液生成不溶性 颗粒，沉降析出。沉淀具有浓缩与分离的双重作 用。 与结晶联系 在本质上都是新相析出的过程，主要是物理变化， 当然也存在化学反应的沉淀或结晶。 区别 结晶为同类分子或离子以有规则排列形式析出， 沉淀为同类分子或离子以无规排列形式析出
1概述 优点 A、设备简单、成本低、放大容易,产物浓度越高沉淀越有 利,收率越高; B、原料液体积很快地减小10~50倍,从而简化生产工艺 降低生产费用; C、使中间产物保持在一个中性温和的环境; D、及早地将目标pro.从其pro.水解酶分离出来,避免pro隆 解,提高产物稳定性; E、用沉淀法作为po色谱分离前处理,可使使用色谱分离的 限制因素降低到最少 缺点: A、沉淀物可聚集有多种物质,如大量盐类和溶剂,所以沉 淀法所产品纯度通常都比结晶法低 B、过滤较困难
1 概述 优点 A、设备简单、成本低、放大容易，产物浓度越高沉淀越有 利，收率越高； B、原料液体积很快地减小10~50倍，从而简化生产工艺、 降低生产费用； C、使中间产物保持在一个中性温和的环境； D、及早地将目标pro.从其pro.水解酶分离出来，避免pro降 解，提高产物稳定性； E、用沉淀法作为pro色谱分离前处理，可使使用色谱分离的 限制因素降低到最少。 缺点： A、沉淀物可聚集有多种物质，如大量盐类和溶剂，所以沉 淀法所产品纯度通常都比结晶法低； B、过滤较困难
2蛋白质溶解 蛋白质溶解:相似者相溶 aa的亲水性和疏水性: 疏水性 亲水性 芳香族非极性脂眆族杂环类极性脂肪族离子化 有利因素:亲水性,包括氢键、极 出6 性基团、离子化侧链、亲水a所 占的%等。如白蛋白 不利因素:疏水性,包括暴露的疏∝水分Q 水基团、疏水aa所占的%等。如 ④阳离子曲荷负电区域 e阴离子荷正电区城 纤维蛋白原。 蛋白质表面特征
2 蛋白质溶解 蛋白质溶解：相似者相溶 aa的亲水性和疏水性： 有利因素：亲水性，包括氢键、极 性基团、离子化侧链、亲水aa所 占的%等。如白蛋白 不利因素：疏水性，包括暴露的疏 水基团、疏水aa所占的%等。如 纤维蛋白原
3蛋白质溶液的稳定因素 )、水化层 hydration shel) Tight hydration shell tight hydration shell(0. 35g water/I gpro) Protein core loose hydration shell(2g water/1g pro) Loose hydration shel 2)、静电排斥→ξZeta电势 Nernst potential--胶核表面电位(不可测) Stern potentia-(不可测) Potential-滑面电位(可测, mobility 双电层 ξ电位 排:… Nernst电位 ionic strength 3)、|pH水- pl value pH水-plⅤalue↑eta电势↑ Nernst电位 水化层个静电排斥↑
3 蛋白质溶液的稳定因素 1)、水化层(hydration shell) tight hydration shell(0.35gwater/1g pro) loose hydration shell(2gwater /1g pro) 2)、静电排斥 zeta电势 Nernst Potential—胶核表面电位(不可测) Stern Potential—(不可测) Potential—滑面电位(可测,mobility) 电位 Nernst电位 ionic strength 3)、|pH水 – pI| Value |pH水 – pI| Value zeta电势 水化层 静电排斥 Tight hydration shell Protein core Loose hydration shell
双电层 质点 剪切面 sten层扩散层 电位 est电位 Ste电位 电位 距高 双电层的 Stern模型和对应的电位
4蛋白质沉淀方法分类 )、盐析法 2)、有机溶剂沉淀法 3)、lpH水- pI value调节法 4)、亲水聚合物沉淀法 5)、聚电解质絮凝法 6)、高价金属离子沉淀法 7)、亲和沉淀法
4 蛋白质沉淀方法分类 1）、盐析法 2）、有机溶剂沉淀法 3）、 |pH水 – pI| Value调节法 4）、亲水聚合物沉淀法 5）、聚电解质絮凝法 6）、高价金属离子沉淀法 7）、亲和沉淀法
5盐析法 机理:A、 zeta potential;B、 hydration shell H OH ②+ OH H pHp带负电荷 又有水膜,是稳定的 蛋白,水膜未脱, 又有水膜是稳定的 亲水胶体 是不稳定的亲水胶体 亲水胶体 中性盐 中性盐 破坏水膜 中性盐 破坏水膜 破坏水膜 ←+中性盐中和其电荷 +团+ 中性盐中和其电荷 等 NH矿攻Na·等 蛋白质沉淀
5 盐析法 机理：A、zeta potential；B、hydration shell