山东理工大学材料科学与工程学院 高效液相色谱法 第四章 4.1概述 高效液相 4.2液相色谱的基本原理 色谱法 4.3高效液相色谱仪
山东理工大学材料科学与工程学院 高效液相色谱法 第四章 高效液相 色谱法 4.1 概述 4.2 液相色谱的基本原理 4.3 高效液相色谱仪
4.1概述 ●经典液相色谱，气相色谱，高效液相色谱 ●高效液相色谱法(HPLC)是继气相色谱之后，70年代 初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。 ●高效液相色谱法（HPLC)在经典液相色谱基础上，引 入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定 相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度 高、操作自动化的特点
4.1 概述 ⚫经典液相色谱, 气相色谱, 高效液相色谱 ⚫高效液相色谱法（HPLC）是继气相色谱之后，70年代 初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。 ⚫高效液相色谱法（HPLC）在经典液相色谱基础上，引 入了气相色谱的理论，在技术上采用了高压泵、高效固定 相和高灵敏度检测器，因而具备速度快、效率高、灵敏度 高、操作自动化的特点
经典液体色谱和高效液体色谱的比较 高效液相色谱法 经典液相色谱法 色谱柱：柱长mm 100~250 10~200 柱内径mm 2~10 10~50 固定相粒度：粒径 5~50 75~600 小m 色谱柱入口压力 220 0.001~0.1 /MPa 色谱柱柱效！（理论 塔板数m) 2X103~5×104 2~50 进样量g 10-6~102 1~10 分析时间/h 0.05≈1.0 1~20
经典液体色谱和高效液体色谱的比较 高效液相色谱法 经典液相色谱法 色谱柱：柱长/mm 100～250 10～200 柱内径/mm 2～10 10～50 固定相粒度：粒径 /μm 5～50 75～600 色谱柱入口压力 /MPa 2～20 0.001～0.1 色谱柱柱效/（理论 塔板数/m） 2×103～5×104 2～50 进样量/g 10-6～10-2 1～10 分析时间/h 0.05～1.0 1～20
高效液相色谱法与气相色谱法 方法 高效液相色谱法 气相色谱法 进样方式 样品制成溶液 样品需加热气化或裂解 1、液体流动相选择多 1、气体流动相为惰性气 样，可为离子型、极 体，不与被分析的样品 性、弱极性、非极性 发生相互作用 溶液，可与被分析样 流动相 品产生相互作用，并 能改善分离的选择性 2、气体流动相动力粘度 为10Pas,输送流动相 2、液体流动相动力粘 压力为0.1~0.5MPa 度为10-Pas,输送流 动相压力为2~20MPa
高效液相色谱法与气相色谱法 方法 高效液相色谱法 气相色谱法 进样方式 样品制成溶液 样品需加热气化或裂解 流动相 1、液体流动相选择多 样，可为离子型、极 性、弱极性、非极性 溶液，可与被分析样 品产生相互作用，并 能改善分离的选择性 2、液体流动相动力粘 度为10-3Pa·s，输送流 动相压力为2～20MPa 1、气体流动相为惰性气 体，不与被分析的样品 发生相互作用 2、气体流动相动力粘度 为10-5Pa·s，输送流动相 压力为0.1～0.5MPa
高效液相色谱法与气相色谱法 方法 高效液相色谱法 气相色谱法 1、分离机理：可依据吸附 1、分离机理：依据吸附，分 、分配、筛析、离子交换、 配两种原理进行样品分离， 亲和等多种原理进行样品分 可供选用的固定相种类较多 离，可供选用的固定相种类 繁多 固定相 2、色谱柱：固定相粒度大 2、色谱柱：固定相粒度为30.1~0.5mm;填充柱内径为1 ~10um,柱效为103~104： ~4mm,柱长1~4m,柱效 柱温为常温 为102~103；柱温为常温~ 300℃
高效液相色谱法与气相色谱法 方法 高效液相色谱法 气相色谱法 固定相 1、分离机理：可依据吸附 、分配、筛析、离子交换、 亲和等多种原理进行样品分 离，可供选用的固定相种类 繁多 2、色谱柱：固定相粒度为3 ～10μm，柱效为103～104； 柱温为常温 1、分离机理：依据吸附，分 配两种原理进行样品分离， 可供选用的固定相种类较多 2、色谱柱：固定相粒度大 0.1～0.5mm；填充柱内径为1 ～4mm，柱长1～4m，柱效 为102～103；柱温为常温～ 300℃
高效液相色谱法与气相色谱法 方法 高效液相色谱法 气相色谱法 选择性检测器：UV, 通用型检测器：TCD, 检测器 DAD,FD,ECD FID 通用性检测器：ELSD 选择性检测器：ECD, RI FPD,NPD 可分析低分子量低沸点 可分析低分子量、低沸点 样品；高沸点、中分子 有机化合物；永久性气体 应用范围 、高分子有机化合物； ；配合程序升温可分析高 热不稳定，具有生物活 沸点有机化合物：配合裂 性的生物分子 解技术可分析高聚物
方法 高效液相色谱法 气相色谱法 检测器 选择性检测器：UV， DAD，FD，ECD 通用性检测器：ELSD ，RI 通用型检测器：TCD， FID 选择性检测器：ECD， FPD，NPD 应用范围 可分析低分子量低沸点 样品；高沸点、中分子 、高分子有机化合物； 热不稳定，具有生物活 性的生物分子 可分析低分子量、低沸点 有机化合物；永久性气体 ；配合程序升温可分析高 沸点有机化合物；配合裂 解技术可分析高聚物 高效液相色谱法与气相色谱法
HPLC ·日本岛津：日本岛津制作所(shimadzu),第一代创始 人岛津源藏（1839-1894) ·安捷伦：美国安捷伦科技有限公司，总部所在地美国加 利福尼亚州Santa Clara,创始人戴维·帕卡德 (Dave Packard)和威廉休利挂（比尔休利特Bill Hewlett) ·沃特世：Waters,总部设在马萨诸塞州的米尔福德市 ·大连依利特：依托于中科院大连化物所，国内色谱行业 的先行者
HPLC • 日本岛津：日本岛津制作所（shimadzu），第一代创始 人岛津源藏（1839-1894） • 安捷伦：美国安捷伦科技有限公司，总部所在地美国加 利 福 尼 亚 州 Santa Clara,创 始 人 戴 维 ·帕卡德 (Dave Packard)和威廉·休利特（比尔·休利特 Bill Hewlett) • 沃特世：Waters，总部设在马萨诸塞州的米尔福德市 • 大连依利特：依托于中科院大连化物所，国内色谱行业 的先行者
4.2液相色谱分离原理及分类 首先高压泵将贮液器中流 动相溶剂经过进样器送入 色谱柱，然后从控制器的 出口流出。 INJECTOR 当注入欲分离的样品时， 流经进样器的流动相将样 品同时带入色谱柱进行分 离，然后依先后顺序进入 检测器。 COLUM ATE 记录仪将检测器送出的信 RECORDE 号记录下来，由此得到液 相色谱图
首先高压泵将贮液器中流 动相溶剂经过进样器送入 色谱柱，然后从控制器的 出口流出。 当注入欲分离的样品时， 流经进样器的流动相将样 品同时带入色谱柱进行分 离，然后依先后顺序进入 检测器。 记录仪将检测器送出的信 号记录下来，由此得到液 相色谱图。 4.2 液相色谱分离原理及分类
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