*实验五小鼠睾丸染色体标本的制备（注意：该实验由参加果蝇兴趣小组的同学完成）一、实验目的要求目的：（1)掌握成年雄性小鼠睾丸细胞染色体制备方法。(2)有丝分裂和减数分裂为何最终产物不同。要求：阅读教材中有关动物细胞减数分裂的过程。熟悉减数分裂的特殊性。二、实验材料和用具性成熟的雄性小白鼠，眼科剪刀和镊子、10ml培养皿、碾钵，2%柠檬酸钠、其他用具和试剂同小鼠骨髓法。三、方法和步骤1.注射秋水仙素。取睾丸前3一4小时给小鼠腹腔皮下注射适量秋水仙素(注射量按4ug/g体重计算)。我们根据经验每只成年公鼠注射0.04%秋水仙素0.4ml为宜。2.收获细胞。用脱颈椎法处死小鼠后立即取出睾丸（在腹腔内），投入10ml培养皿（内有2%的柠檬酸钠溶液），漂洗后更换少量2%的柠檬酸钠溶液，用锋利的眼科剪刀剪开白膜，充分剪碎曲精细管，用吸管将它们移入10ml离心管中，用吸管头将内容物充分碾碎，再加入2%的檬酸钠溶液大约5ml制成细胞悬液，经反复吹打，使细胞尽量脱落于溶液中，制成细胞悬液。待自然沉降后，更换一新离心管（注意弃去旧离心管中自然沉降的大块膜状物等）。平衡后，1000转/分离心10分钟，弃去上清，所得沉淀物即是处于减数分裂过程中的各期细胞。3.低渗。将离心所得沉淀物中加入5毫升0.075MKCI，吹打均匀后，置于37℃C恒温水浴锅中低渗22分钟（一定严格掌握温度和时间，很关键！）。从水浴锅中取出立即加入5一10滴新配制的甲醇一冰醋酸固定液（预固定，防止细胞结团），吹打均匀，平衡，1000转/分离心10分钟，弃去上清，这时得到的是经过低渗的细胞（注意这时细胞已经涨大，以后的步骤一定要轻轻吹打。）。4.第一次固定。加入新配制的固定液5一6ml,用吸管轻轻吹打均匀，静置20一30分钟，1000转/分离心10分钟，弃去上清。5.第二次固定。加入新配制的固定液5—6ml,用吸管轻轻吹打均匀，静置20一30分钟，1000转/分离心10分钟，弃去上清。6.滴片。加入适量（约0.5ml）新配制的固定液制成细胞悬液，滴两滴于冰冻的载玻片上（注意不要重叠）稍稍倾斜玻片，空气干燥。7.染色和镜检。将染色体制片反扣于染色板上，用1：9GiemSa稀释液（Giemsa原液用磷酸pH6.8缓冲液稀释）分别染色。染色30分钟，用自来水冲洗，晾干。将标本置于低倍镜下观察，寻找较好的分裂相，移至视野中央，然后换高倍镜观察，拍照。四、作业：1.认真观察小鼠睾丸细胞染色体分裂相，并且与骨髓细胞的染色体分裂相比较
*实验五 小鼠睾丸染色体标本的制备 （注意：该实验由参加果蝇兴趣小组的同学完成） 一、实验目的要求 目的：⑴掌握成年雄性小鼠睾丸细胞染色体制备方法。 ⑵有丝分裂和减数分裂为何最终产物不同。 要求：阅读教材中有关动物细胞减数分裂的过程。熟悉减数分裂的特殊性。 二、实验材料和用具 性成熟的雄性小白鼠，眼科剪刀和镊子、10ml 培养皿、碾钵，2％柠檬酸钠、其他用具 和试剂同小鼠骨髓法。 三、方法和步骤 1．注射秋水仙素。取睾丸前 3－4 小时给小鼠腹腔皮下注射适量秋水仙素(注射量按 4ug/g 体重计算)。我们根据经验每只成年公鼠注射 0.04％秋水仙素 0.4ml 为宜。 2．收获细胞。用脱颈椎法处死小鼠后立即取出睾丸（在腹腔内），投入 10ml 培养皿（内 有 2％的柠檬酸钠溶液），漂洗后更换少量 2％的柠檬酸钠溶液，用锋利的眼科剪刀剪开白膜， 充分剪碎曲精细管，用吸管将它们移入 10ml 离心管中，用吸管头将内容物充分碾碎，再加 入 2％的檬酸钠溶液大约 5ml 制成细胞悬液，经反复吹打，使细胞尽量脱落于溶液中，制成 细胞悬液。待自然沉降后，更换一新离心管（注意弃去旧离心管中自然沉降的大块膜状物等）。 平衡后，1000 转/分离心 10 分钟，弃去上清，所得沉淀物即是处于减数分裂过程中的各期细 胞。 3．低渗。将离心所得沉淀物中加入 5 毫升 0.075MKCl，吹打均匀后，置于 37 ºC 恒温 水浴锅中低渗 22 分钟（一定严格掌握温度和时间，很关键！）。从水浴锅中取出立即加入 5 －10 滴新配制的甲醇—冰醋酸固定液（预固定，防止细胞结团），吹打均匀，平衡，1000 转/分离心 10 分钟，弃去上清，这时得到的是经过低渗的细胞（注意这时细胞已经涨大，以 后的步骤一定要轻轻吹打。）。 4．第一次固定。加入新配制的固定液 5—6ml,用吸管轻轻吹打均匀，静置 20—30 分钟， 1000 转/分离心 10 分钟，弃去上清。 5．第二次固定。加入新配制的固定液 5—6ml,用吸管轻轻吹打均匀，静置 20—30 分钟， 1000 转/分离心 10 分钟，弃去上清。 6．滴片。加入适量（约 0.5ml）新配制的固定液制成细胞悬液，滴两滴于冰冻的载玻片 上（注意不要重叠）稍稍倾斜玻片，空气干燥。 7．染色和镜检。将染色体制片反扣于染色板上，用 1：9 GiemSa 稀释液（ Giemsa 原 液用磷酸 pH 6.8 缓冲液稀释）分别染色。染色 30 分钟，用自来水冲洗，晾干。 将标本置于低倍镜下观察，寻找较好的分裂相，移至视野中央，然后换高倍镜观察，拍照。 四、作业： 1．认真观察小鼠睾丸细胞染色体分裂相，并且与骨髓细胞的染色体分裂相比较