实验10简易法提取植物总DNA 一、实验目的 掌握植物总DNA的抽提方法和原理 二、实验原理 植物各个部位都可用作总DA抽提的材料，常用的材料一般为植物幼叶。其基本原理是： 先用机械的方法使组织和细胞破碎，然后加入十二烷基磺酸钠(SS)等离子型表面活性剂，溶 解细胞膜和核膜蛋白，使细胞膜和核膜玻裂。再加入酚和氯仿等表面活性剂，使蛋白变性。最后 加入无水乙醇沉淀DNA:沉淀的DNA,即为植物总DN,溶于TE溶液中保存备用，· 三、实验材料、器具及试剂 水稻幼叶 高速台式离心机，振荡器，水浴箱，1.51离心管架，玻璃滴管，移液器，研钵，1.51离 心管，21离心管，枪头，烧杯，最筒等。 无水乙醇，氯仿，异戊醇，TE缓冲液(p8.0),抽提液(200 mMTris-HCL,PH7.5:250 mMNaC1: 25mM EDTA:0.5%SDS) 四、实验步骤 )取幼叶5g左右放于研钵中，加入少许石英砂，再加入400l抽提液，磨成绿色浆状。 (②)倒入2■1离心管。约用4001抽提液洗涤研钵，也倒入离心管，将两次抽提液混匀. (3)置于56℃水浴中5分钟。 (④加入适量氯仿，振荡，充分混匀· (⑤14000rp@离心5分钟。取上清液于1.5ml离心管. (⑥加入等体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，静置直到D析出 ()14000rp@离心2分钟，去上清液。 (8)加入70%乙醇漂洗。适当风干，溶于10-2001TE溶液中待用 五、注意事项： ①)幼叶不宜太多：氯仿的量尽可能多些：与氯仿混合时充分摇匀，否则蛋白变性不完全。 (②)研磨幼叶后匀浆较重要，这直接影响DN的产量。 (3)处理：若第5步上清液较为混浊，则需要重复第4和第5步
实验 10 简易法提取植物总 DNA 一、实验目的 掌握植物总 DNA 的抽提方法和原理 二、实验原理 植物各个部位都可用作总 DNA 抽提的材料，常用的材料一般为植物幼叶。其基本原理是： 先用机械的方法使组织和细胞破碎，然后加入十二烷基磺酸钠（SDS）等离子型表面活性剂，溶 解细胞膜和核膜蛋白，使细胞膜和核膜破裂。再加入酚和氯仿等表面活性剂，使蛋白变性。最后 加入无水乙醇沉淀 DNA；沉淀的 DNA，即为植物总 DNA，溶于 TE 溶液中保存备用，。 三、实验材料、器具及试剂 水稻幼叶 高速台式离心机，振荡器，水浴箱，1.5ml 离心管架，玻璃滴管，移液器，研钵，1.5ml 离 心管，2ml 离心管，枪头，烧杯，量筒等。 无水乙醇，氯仿，异戊醇，TE 缓冲液（pH8.0）,抽提液（200mM Tris-HCl, PH7.5; 250mM NaCl; 25mM EDTA; 0.5%SDS） 四、实验步骤 ⑴ 取幼叶 5g 左右放于研钵中,加入少许石英砂，再加入 400μl抽提液，磨成绿色浆状。 ⑵ 倒入 2 ml 离心管。约用 400μl抽提液洗涤研钵，也倒入离心管，将两次抽提液混匀。 ⑶ 置于 56℃水浴中 5 分钟。 ⑷ 加入适量氯仿，振荡，充分混匀。 ⑸ 14000rpm 离心 5 分钟。取上清液于 1.5ml 离心管。 ⑹ 加入等体积预冷的无水乙醇，轻轻混匀，静置直到 DNA 析出。 ⑺ 14000rpm 离心 2 分钟，去上清液。 ⑻ 加入 70%乙醇漂洗。适当风干，溶于 100-200μl TE 溶液中待用。 五、注意事项： ⑴ 幼叶不宜太多；氯仿的量尽可能多些；与氯仿混合时充分摇匀，否则蛋白变性不完全。 ⑵ 研磨幼叶后匀浆较重要，这直接影响 DNA 的产量。 ⑶ 处理：若第 5 步上清液较为混浊，则需要重复第 4 和第 5 步