天然药物化学实验 一、前言 天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。其主要目的是 1.通过试验,检验在课堂上所学的理论知识。使学生对理性知识的理解更加深 入,掌握得更加牢固 2.通过试验,训练学生的基本操作技能,培养学生分析问题和解决问题的能力, 使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。 在实验中,重点是要加强对学生基本操作技能的训练。天然药物化学实验要 求学生掌握以下技能 (一)提取分离方面 1.要求掌握常用的经典方法的原理及操作。其中包括液-固提取法(浸渍、 渗漉、回流提取等)、液-液萃取法(简单萃取法、梯度萃取法、反流分 布法)、重结晶法等 掌握纸色谱、柱色谱(包括吸附柱、离子交换柱等)的原理和基本操作, (二)鉴定方面 化学方法 ①掌握一般定性反应在鉴定中的用 ②掌握重要衍生物(乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等)的制备方法及其在 结构鉴定中的应用。 ③了解重要降解反应的原理及应用。 2.光谱方法 了解UV、IR、NMR、MS在天然物结构测定中的应用。目前要求学员能了 解黄酮类化合物的UV、NMR波谱、蒽醌的IR以及麻黄生物碱的NMR谱 特征。 二、天然药物化学实验须知 在天然药物化学实验中,所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、 刺激性、甚至爆炸性药品,试验操作又常在加温加压等情况下进行,需要各种热 源、电器或其他仪器,操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。但只要 加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心,提高警惕,消除隐患,注意实 验规则,事故是可以避免的
天然药物化学实验 一、前言 天然药物化学实验是整个天然药物化学课的重要组成部分。其主要目的是： 1．通过试验，检验在课堂上所学的理论知识。使学生对理性知识的理解更加深 入，掌握得更加牢固。 2．通过试验，训练学生的基本操作技能，培养学生分析问题和解决问题的能力， 使学生获得从事天然药物化学科研工作的基本训练。 在实验中，重点是要加强对学生基本操作技能的训练。天然药物化学实验要 求学生掌握以下技能： （一）提取分离方面 1．要求掌握常用的经典方法的原理及操作。其中包括液-固提取法（浸渍、 渗漉、回流提取等）、液-液萃取法（简单萃取法、梯度萃取法、反流分 布法）、重结晶法等。 2．掌握纸色谱、柱色谱（包括吸附柱、离子交换柱等）的原理和基本操作。 （二）鉴定方面 1．化学方法 ①掌握一般定性反应在鉴定中的用 ②掌握重要衍生物（乙酰化物、甲基化物生物碱盐类等）的制备方法及其在 结构鉴定中的应用。 ③了解重要降解反应的原理及应用。 2．光谱方法 了解 UV、IR、NMR、MS 在天然物结构测定中的应用。目前要求学员能了 解黄酮类化合物的 UV、NMR 波谱、蒽醌的 IR 以及麻黄生物碱的 NMR 谱 特征。 二、天然药物化学实验须知 在天然药物化学实验中，所用的药品多数是挥发性、易燃、有毒、有腐蚀性、 刺激性、甚至爆炸性药品，试验操作又常在加温加压等情况下进行，需要各种热 源、电器或其他仪器，操作不慎易造成火灾、爆炸、中毒、触电等事故。但只要 加强爱护国家财产和保障人民生民安全的责任心，提高警惕，消除隐患，注意实 验规则，事故是可以避免的
实验规则 一)试验前必须预习实验内容,了解原理和操作规程。随时记录试验应记的项 目,以作正式报告 (二)试验前应清点并检査仪器是否完整,装置是否正确,合格后方可进行试验 试验时不准做无关的事情,严禁吸烟,不得擅自离开,并应随时注意反应 情况,仪器有否漏气,破裂等。 (三)药品仪器都是国家财产,须节约爱护使用,公用物品,用完后立即放回原 处。不可调错瓶塞,以免污染,仪器要洗刷干净。 四)操作易燃性有机溶剂,回流、蒸馏、减压蒸馏时,不能明火直接加热,要 放沸石或一端封死的毛细管,若在加热时发现无沸石则应冷却后再加,防 止爆沸冲出。减压系统应装有安全瓶。加液时应停火或远离火源,一般无 漏气开口,冷凝水要通畅。起封易挥发溶剂瓶盖时,脸面要避免开瓶口慢 慢启开,以防气体冲脸上。 (五)有毒具腐蚀药品应妥善保管,操作后要立即洗手。勿粘及五官和创口,以 免中毒。 (六)实验中,有毒气或腐蚀性气体发生适应在通风橱中进行操作。必要时可戴 好防护用具进行工作。 (七)若将玻管插入塞中时,可在塞孔中涂些水和甘油等润滑剂,用布包住波管 使其旋转而入,防止折断割伤。 (八)试验台上不放无用的药品、仪器,在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地 上清洁整齐。 (九)试验结束时,应将门、窗、水、电、煤气关好,室内打扫干净,并清点仪 器后方可离去。 安全防火须知 一)实验室存放易燃性有机溶剂时要远离火源,不得超过500ml 二)在进行易燃性有机溶剂实验时,一定要按着操作规程进行。不可将易挥发、 易燃性有机溶剂倒入水槽或废液缸内 (三)烘箱内不能烘盛有易燃性溶剂的器皿, (四)消防器材,沙箱、石棉布、灭火器等应放在方便固定的地点,不能随意移 动,均应处于备用状态。 (五)万一不慎着火,要沉着冷静积极抢救,应立即切断室内电源和火源,用石 棉布将着火部位盖严,使其断绝空气而熄灭。或是火势情况选用适当灭火 器材进行灭火。在实验室使用二氧化碳灭火器较好,它具有不腐蚀不导电 之优点
实 验 规 则 （一）试验前必须预习实验内容，了解原理和操作规程。随时记录试验应记的项 目，以作正式报告。 （二）试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格后方可进行试验。 试验时不准做无关的事情，严禁吸烟，不得擅自离开，并应随时注意反应 情况，仪器有否漏气，破裂等。 （三）药品仪器都是国家财产，须节约爱护使用，公用物品，用完后立即放回原 处。不可调错瓶塞，以免污染，仪器要洗刷干净。 （四）操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要 放沸石或一端封死的毛细管，若在加热时发现无沸石则应冷却后再加，防 止爆沸冲出。减压系统应装有安全瓶。加液时应停火或远离火源，一般无 漏气开口，冷凝水要通畅。起封易挥发溶剂瓶盖时，脸面要避免开瓶口慢 慢启开，以防气体冲脸上。 （五）有毒具腐蚀药品应妥善保管，操作后要立即洗手。勿粘及五官和创口，以 免中毒。 （六）实验中，有毒气或腐蚀性气体发生适应在通风橱中进行操作。必要时可戴 好防护用具进行工作。 （七）若将玻管插入塞中时，可在塞孔中涂些水和甘油等润滑剂，用布包住波管 使其旋转而入，防止折断割伤。 （八）试验台上不放无用的药品、仪器，在实验时要做到水槽、仪器、桌面、地 上清洁整齐。 （九）试验结束时，应将门、窗、水、电、煤气关好，室内打扫干净，并清点仪 器后方可离去。 安全防火须知 （一）实验室存放易燃性有机溶剂时要远离火源，不得超过 500ml。 （二）在进行易燃性有机溶剂实验时，一定要按着操作规程进行。不可将易挥发、 易燃性有机溶剂倒入水槽或废液缸内。 （三）烘箱内不能烘盛有易燃性溶剂的器皿。 （四）消防器材，沙箱、石棉布、灭火器等应放在方便固定的地点，不能随意移 动，均应处于备用状态。 （五）万一不慎着火，要沉着冷静积极抢救，应立即切断室内电源和火源，用石 棉布将着火部位盖严，使其断绝空气而熄灭。或是火势情况选用适当灭火 器材进行灭火。在实验室使用二氧化碳灭火器较好，它具有不腐蚀不导电 之优点
在实验室中常发生的事故如下,应予以特别注意 一)蒸馏或回流加热时,发现未放沸石,未等溶液冷却就补加沸石,结果溶液 冲出瓶外于是引起火灾。 (二)蒸馏易燃物时,忘记通冷凝水,大量蒸汽逸出亦易引起火灾。 (三)蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾 (四)用三角烧瓶作减压装置的受器结果炸裂。 (五)加压操作结束后,放气太快,使压力记冲破。 (六)使用真空干燥器时,用完就直接开干燥器的放气阀,结果使泵内的机油被 吸到干燥器中,样品被污染, (七)实验室水槽易发生用抹布和碎拖布条堵塞而造成水灾 三、试验方法(选编) 黄酮类化合物紫外光谱鉴定法 (一)测定黄酮类化合物UV光谱用的诊断试剂及其配制方法 (二)黄酮类化合物光谱测定程序 (三)黄酮类化合物UⅤ光谱特征与结构解析方法 (四)结构解析示例 薄层色谱法 (一)氧化 (二)还原 (三)脱水 (四)水解 (五)卤代 (六)酶的催化作用 (七)酯化 (八)硝化 (九)衍生物的制备 (十)混合反应 柱色谱法 (一)吸附柱色谱法 1.吸附力 2.吸附等温线
在实验室中常发生的事故如下，应予以特别注意。 （一）蒸馏或回流加热时，发现未放沸石，未等溶液冷却就补加沸石，结果溶液 冲出瓶外于是引起火灾。 （二）蒸馏易燃物时，忘记通冷凝水，大量蒸汽逸出亦易引起火灾。 （三）蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。 （四）用三角烧瓶作减压装置的受器结果炸裂。 （五）加压操作结束后，放气太快，使压力记冲破。 （六）使用真空干燥器时，用完就直接开干燥器的放气阀，结果使泵内的机油被 吸到干燥器中，样品被污染。 （七）实验室水槽易发生用抹布和碎拖布条堵塞而造成水灾。 三、试验方法（选编） 黄酮类化合物紫外光谱鉴定法 （一）测定黄酮类化合物 UV 光谱用的诊断试剂及其配制方法 （二）黄酮类化合物光谱测定程序 （三）黄酮类化合物 UV 光谱特征与结构解析方法 （四）结构解析示例 薄层色谱法 （一）氧化 （二）还原 （三）脱水 （四）水解 （五）卤代 （六）酶的催化作用 （七）酯化 （八）硝化 （九）衍生物的制备 （十）混合反应 柱色谱法 （一）吸附柱色谱法 1．吸附力 2．吸附等温线
3.线性容量 4.常用吸附剂 5.吸附剂的规律 6.洗脱剂的规律 7.溶剂的吸附亲和性 (二)柱色谱的操作 装柱 上样 洗脱 鉴定 四、实验部分 实验安排 实验 学时 离子交换树脂法提取一叶秋碱 4 吸碱树脂的碱化及石油醚回流 4 叶秋碱的mpTC等鉴别 4 四芦丁的提取与鉴别 4 五芦丁的酸水解和糖的纸色谱 六芦丁的十乙酸化合物制备及芦丁|4 大黄蒽醌类化合物的提取与分离 八|缓冲纸色谱法 九PH梯度法分离蒽醌类化合物
3．线性容量 4．常用吸附剂 5．吸附剂的规律 6．洗脱剂的规律 7．溶剂的吸附亲和性 （二）柱色谱的操作 四、实验部分 实 验 安 排 实验 题 目 学时 一 离子交换树脂法提取一叶秋碱 4 二 吸碱树脂的碱化及石油醚回流 4 三 一叶秋碱的 m.p. TLC 等鉴别 4 四 芦丁的提取与鉴别 4 五 芦丁的酸水解和糖的纸色谱 4 六 芦丁的十乙酸化合物制备及芦丁 4 七 大黄蒽醌类化合物的提取与分离 4 八 缓冲纸色谱法 4 九 PH 梯度法分离蒽醌类化合物 4 总计 36 装柱 上样 洗脱 鉴定
实验 叶秋碱的分离和鉴定 (一)概述 大戟科植物一叶秋( Securinega suffruticosa(Pal)Rehd)也称叶底珠,别名 狗杏条,我国资源十分丰富。其根、叶和嫩枝中均含有多种生物碱,结构已经清 楚的有十几种。其中一叶秋碱含量最高,并已用于临床。一叶秋碱和它的衍生物 能兴奋中枢ⅹ神经,增强心肌收缩,升髙血压,临床用硝酸一叶秋碱治疗面神 经麻痹,小儿麻痹骶神经炎和股外侧神经炎感染引起的多发性神经炎,成为神经 科疾患的常见药物。 叶秋碱味淡黄色棱形晶体,难溶于水,易溶于醇、氯仿、较难溶于石油醚, 其结构如下 H H (二)实验目的、要求 目的 通过一叶秋碱的提取分离掌握用离子交换树脂法提取分离生物碱的原 理和方法。 2.要求 分离得到纯的一叶秋碱,并制备其衍生物,加以鉴定 (三)试验方法 1.提取分离方法(见下图) 2.生物碱的定性实验 ①取渗漉液lml,加硅钨酸试剂数滴,产生淡黄色沉淀。 ②取渗漉液lml,加碘化钾试剂数滴,产生淡棕褐色沉淀。 ③取渗漉液1ml,加碘化铋钾试剂数滴,产生棕红色沉淀 3.一叶秋碱衍生物的制备 ①硝酸一叶秋碱的制备 称取一叶秋碱200mg,加6ml乙醚及σml无水乙醇,使生物碱全部溶解 滴加10%硝酸无水乙醇液14ml,滴加乙醚至浑浊、放置,白色结晶析出后,过 滤,结晶用无水乙醇-乙醚(1:1)洗涤数次、干燥,即得硝酸一叶秋碱。 硝酸一叶秋碱、无嗅、味苦,溶于水,难溶于醇。mp.222℃ ②一叶秋碱的甲基化物的制备
实验一 一叶秋碱的分离和鉴定 （一）概述 大戟科植物一叶秋（Securinega suffruticosa (Pall) Rehd）也称叶底珠，别名 狗杏条，我国资源十分丰富。其根、叶和嫩枝中均含有多种生物碱，结构已经清 楚的有十几种。其中一叶秋碱含量最高，并已用于临床。一叶秋碱和它的衍生物 能兴奋中枢 X 神经，增强心肌收缩，升高血压，临床用硝酸一叶秋碱治疗面神 经麻痹，小儿麻痹骶神经炎和股外侧神经炎感染引起的多发性神经炎，成为神经 科疾患的常见药物。 一叶秋碱味淡黄色棱形晶体，难溶于水，易溶于醇、氯仿、较难溶于石油醚， 其结构如下： N O O H H （二）实验目的、要求 1． 目的 通过一叶秋碱的提取分离掌握用离子交换树脂法提取分离生物碱的原 理和方法。 2． 要求 分离得到纯的一叶秋碱，并制备其衍生物，加以鉴定。 （三）试验方法 1．提取分离方法（见下图） 2．生物碱的定性实验 ① 取渗漉液 1ml，加硅钨酸试剂数滴，产生淡黄色沉淀。 ② 取渗漉液 1ml，加碘化钾试剂数滴，产生淡棕褐色沉淀。 ③ 取渗漉液 1ml，加碘化铋钾试剂数滴，产生棕红色沉淀。 3．一叶秋碱衍生物的制备 ① 硝酸一叶秋碱的制备 称取一叶秋碱 200mg，加 6ml 乙醚及 9ml 无水乙醇，使生物碱全部溶解， 滴加 10%硝酸无水乙醇液 14ml，滴加乙醚至浑浊、放置，白色结晶析出后，过 滤，结晶用无水乙醇-乙醚（1：1）洗涤数次、干燥，即得硝酸一叶秋碱。 硝酸一叶秋碱、无嗅、味苦，溶于水，难溶于醇。mp.222℃。 ② 一叶秋碱的甲基化物的制备
称取样品100mg,碘甲烷(MeI)0.4ml及丙酮10m水浴回流Ihr,放冷 结晶析出后,过滤,结晶用乙醚洗涤,用 Neoh-etoh重结晶,获得黄色针状结 晶,mp.232℃。 反应式: 干燥一叶秋碱(150g) 置珐琅缸中,用PH-2的H2SO4水250m充分湿润,放置 3min后装入渗漉桶,然后再用PH1-2的H2SO4水以 4~5ml/min的滴速进行渗漉,收集滤液约1500ml 酸水液(取出5ml用NH4OH碱化至PH=9,用CHCl35ml萃取,萃 取CHCl层保留,待一叶秋碱结晶析出后与对照品共薄层检查) 通过阳离子交换柱,以4~5ml/min的流速进行交换, 待酸水液全部交换完毕后将树脂倾入烧杯中,再用水 洗至澄明、抽干放至培养皿中,室温风干。 风干后树脂 用NH4OH碱化,闷置20min后挥散多余NH3。将树脂装入 沙氏提取器中用石油醚(30~60°)回流洗脱3hr以上 树脂 石油醚 回收至体积约20~30ml,转移到小锥形 瓶中加盖放置12hr,结晶析出后过滤 石油醚母液 结晶 叶秋碱提取与分离流程图 4.鉴定 ①TLC 吸附剂:Ah2O3(碱性Ⅱ~Ⅲ,粒度>200目) 展开剂: a CHCI3:Ben.:EtOH(25252) b CHCI c Et2o
称取样品 100mg，碘甲烷（MeI）0.4ml 及丙酮 10ml 水浴回流 1hr，放冷 结晶析出后，过滤，结晶用乙醚洗涤，用 NeOH-EtOH 重结晶，获得黄色针状结 晶，mp.232℃。 反应式： N O O H H MeI Me2CO N O O H H CH3 I 4．鉴定 ① TLC 吸附剂：Al2O3（碱性Ⅱ~Ⅲ，粒度＞200 目） 展开剂：a. CHCl3 : Ben. : EtOH (25:25:2) b. CHCl3 c. Et2O 置珐琅缸中，用 PH1-2 的 H2SO4 水 250ml 充分湿润，放置 30min 后装入渗漉桶，然后再用 PH1-2 的 H2SO4 水以 4~5ml/min 的滴速进行渗漉，收集滤液约 1500ml。 酸水液（取出 5ml 用 NH4OH 碱化至 PH=9，用 CHCl35ml 萃取，萃 取 CHCl3 层保留，待一叶秋碱结晶析出后与对照品共薄层检查） 通过阳离子交换柱，以 4~5ml/min 的流速进行交换， 待酸水液全部交换完毕后将树脂倾入烧杯中，再用水 洗至澄明、抽干放至培养皿中，室温风干。 树脂 石油醚 回收至体积约 20~30ml，转移到小锥形 瓶中加盖放置 12hr，结晶析出后过滤 风干后树脂 用 NH4OH 碱化，闷置 20min 后挥散多余 NH3。将树脂装入 沙氏提取器中用石油醚（30~60°）回流洗脱 3hr 以上。 药渣 石油醚母液 结晶 干燥一叶秋碱（150g） 一叶秋碱提取与分离流程图
vmax1790cm1(不饱和内酯环上的质子) 1730cm1(内酯的羰基) 1620cm1(双键) ③UV λmax2566,311.6nm ④比旋光度的测定 [a}=-1042 (四)实验指导 本实验讲解要点及注意事项 ①详细讲解用离子交换树脂提取生物碱的原理 强调装树脂柱的操作,避免柱中存有气泡 ③指导学生注意交换时的流速及检查流出液的变化,引导学生分析发生变化 的原因。 ④在使用沙氏提取器时,应用试教,讲解安装方法。 ⑤用石油醚回流洗脱时应注意防火 ⑥回流洗脱时间不得小于3小时 2.实验报告要求 ①定性实验结果,反应原理 ②上柱前药液的PH值,半小时后流出液的PH值,两个半小时之后的PH值。 试述发生变化的原因。 ③描图说明鉴定结果。 ④分析UV、IR光谱图 (五)思考题 1.用树脂提取生物碱的原理是什么?为什么提取生物碱时必须考虑交联度? 2.用石油醚从树枝上回流洗脱一叶秋碱的原理是什么?
② IR νmax1790cm-1（不饱和内酯环上的质子） 1730 cm-1（内酯的羰基） 1620 cm-1（双键） ③ UV λmax 256.6, 311.6 nm ④ 比旋光度的测定 [α]=-1042 （四）实验指导 1．本实验讲解要点及注意事项 ① 详细讲解用离子交换树脂提取生物碱的原理。 ② 强调装树脂柱的操作，避免柱中存有气泡。 ③ 指导学生注意交换时的流速及检查流出液的变化，引导学生分析发生变化 的原因。 ④ 在使用沙氏提取器时，应用试教，讲解安装方法。 ⑤ 用石油醚回流洗脱时应注意防火。 ⑥ 回流洗脱时间不得小于 3 小时。 2．实验报告要求 ① 定性实验结果，反应原理。 ② 上柱前药液的 PH 值，半小时后流出液的 PH 值，两个半小时之后的 PH 值。 试述发生变化的原因。 ③ 描图说明鉴定结果。 ④ 分析 UV、IR 光谱图。 （五）思考题 1．用树脂提取生物碱的原理是什么？为什么提取生物碱时必须考虑交联度？ 2．用石油醚从树枝上回流洗脱一叶秋碱的原理是什么？
实验二芦丁的提取及鉴定 (一)概述 芦丁( Rutin)广泛存在于植物界中,现已发现含芦丁的植物至少在70种以 上,如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米(为植物 Sophora japonica 的未开放的花蕾)和荞麦中含量最髙,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛 皮素( Quercetin)3位上的羟基与芸香糖( Rutinose)〔为葡萄糖( Glucose)与鼠 李糖( Rhamnose)组成的双糖)脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶,含有三分子的结晶水,熔点为 174~178℃,无水物188~190℃。溶解度:冷水中为1:10000热水中1:200;冷 乙醇1650:热乙醇160;冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯,不溶于苯、乙 醚、氯仿、石油醚,溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性,主要用 作防治高血压病的辅助治疗剂,亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 (二)实验目的和要求 1.实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识,了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用 2.要求 ①要拿到以下三个化合物:芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮 类化合物的结构测定有一般性的了解。 (三)试验方法 1.芦丁的提取与分离(见下图) 2.芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg,加乙醇5-6ml使其溶解,分成三份作下述试验: A.取上述溶液1~2m,加2滴浓盐酸,在酌加少许镁粉,注意观察颜色变 化情况。 B.取上述溶液1~2m,然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液,注意观察颜色变化 情况,在继续向试管中加入2%啁roC1的甲醇溶液,并详细记录颜色变化情况。 C.取上述溶液1~2ml,然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液,摇匀, 沿管壁滴加浓硫酸,注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中,加入规定的试剂,测定其UⅣ光谱,试解析光谱
实验二 芦丁的提取及鉴定 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在 70 种以 上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物 Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛 皮素（Quercetin）3 位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠 李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为 174~178℃，无水物 188~190℃。溶解度：冷水中为 1:10000；热水中 1:200；冷 乙醇 1:650；热乙醇 1:60；冷吡啶 1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙 醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素 P 样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用 作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 （二）实验目的和要求 1．实验目的 ① 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ② 通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③ 了解 UV 及 NMR 在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 2．要求 ① 要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ② 能够拿根据化学试验及 UV、NMR 数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮 类化合物的结构测定有一般性的了解。 （三）试验方法 1．芦丁的提取与分离（见下图） 2．芦丁的鉴定 ① 芦丁的定性反应 取芦丁 3~4mg，加乙醇 5~6ml 使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液 1~2ml，加 2 滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变 化情况。 B. 取上述溶液 1~2ml，然后滴加 2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化 情况，在继续向试管中加入 2%ZrOCl2 的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液 1~2ml，然后再加入 10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀， 沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ② 芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其 UV 光谱，试解析光谱
并初步判断其结构。 ③芦丁的NMR波谱解析 A.芦丁的三甲基硅醚NMR谱的解析 B.十乙酰化芦丁的NMR光谱解析 ④芦丁水解后糖与苷元的鉴定 A.水解方法:精密称取芦丁1g(±0.0lg),加1%硫酸100ml,加热40min, 放冷静置,过滤。所得沉淀用少许水洗除酸,干燥称重,计算苷元与糖的重量比。 然后用乙醇(95%大约10m)进行重结晶,即得苷元。 B.苷元的鉴定:用纸色谱法与对照品对照 槐花米粗粉(20g) 置500ml烧杯中,加水300ml,在搅拌下加入石 灰乳(1~1.5g),调至PH8~9,加热至微沸 保持30min,趁热抽滤。 残渣 滤液 在60~70℃下用浓盐酸调至 PH4~5,精置Ihr,抽滤。 滤液 沉淀(粗制芦丁) 重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中,加热 煮沸15min,趁热过滤 残渣 滤液 充分静置后过滤,60~70℃下干燥 芦丁(精制品) 芦丁的提取与分离流程图 (四)实验指导 本实验讲解要点及注意事项 ①芦丁提取方法,重点介绍碱酸法的原理及注意事项。 ②定性实验的目的、意义及注意事项 ③UV及NMR光谱在芦丁结构检识中的应用。 2.实验报告要求 ①碱-酸法提取芦丁的原理 ②定性反应的反应机理 ③黄酮类UV和NMR的特点
并初步判断其结构。 ③ 芦丁的 NMR 波谱解析 A. 芦丁的三甲基硅醚 NMR 谱的解析 B. 十乙酰化芦丁的 NMR 光谱解析 ④ 芦丁水解后糖与苷元的鉴定 A. 水解方法：精密称取芦丁 1g（±0.01g），加 1%硫酸 100ml，加热 40min， 放冷静置，过滤。所得沉淀用少许水洗除酸，干燥称重，计算苷元与糖的重量比。 然后用乙醇（95%大约 10ml）进行重结晶，即得苷元。 B. 苷元的鉴定：用纸色谱法与对照品对照。 槐花米粗粉（20g） 置500ml烧杯中，加水300ml，在搅拌下加入石 灰乳（1~1.5g），调至PH8~9，加热至微沸， 保持30min，趁热抽滤。 残渣 滤液 在60~70℃下用浓盐酸调至 PH4~5，精置1hr,抽滤。 滤液 沉淀（粗制芦丁） 重结晶 将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热 煮沸15min，趁热过滤 残渣 滤液 充分静置后过滤，60~70℃下干燥 芦丁（精制品） 芦丁的提取与分离流程图 （四）实验指导 1．本实验讲解要点及注意事项 ① 芦丁提取方法，重点介绍碱-酸法的原理及注意事项。 ② 定性实验的目的、意义及注意事项。 ③ UV 及 NMR 光谱在芦丁结构检识中的应用。 2．实验报告要求 ① 碱-酸法提取芦丁的原理 ② 定性反应的反应机理 ③ 黄酮类 UV 和 NMR 的特点
④详细记录定性反应结果 ⑤绘制色谱结果模拟图,并计算Rf值 3.思考题 ①苷类结构的检识大体程序如何? 苷类水解有几种催化方法 ③怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素3-O-上? ④怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖基一个鼠李糖? ⑤苷元的结构是怎样确定的? ⑥怎样确定苷键的构型? ⑦芦丁的全乙酰化物的制备与苷元乙酰化物(槲皮素)的制备有何不同?为 什么?
④ 详细记录定性反应结果 ⑤ 绘制色谱结果模拟图，并计算 Rf 值 3．思考题 ① 苷类结构的检识大体程序如何？ ② 苷类水解有几种催化方法？ ③ 怎样确定芦丁结构中糖基是连接在槲皮素 3-O-上？ ④ 怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖基一个鼠李糖？ ⑤ 苷元的结构是怎样确定的？ ⑥ 怎样确定苷键的构型？ ⑦ 芦丁的全乙酰化物的制备与苷元乙酰化物（槲皮素）的制备有何不同？为 什么？
