放射免疫分析 Radioimmunoassay
放射免疫分析 Radioimmunoassay
、原理 竞争结合 Ag+ Ab- AgAb+ Ag g AgAb +* Ag *Ag和Ab量恒定
一、原理： Ag + Ab AgAb + Ag + * Ag * AgAb + * Ag * Ag和Ab量恒定 竞争结合
X100=75% ∧^^ 十 X100=50% ●●●● ∧∧∧ 88+L→备xm02 △∧∧△ +L ●●●● 8 X100=12.5% ●●●
++++ 6—8 X100=75% X100=50% X100=25% X100=12.5% 8—4—828—1
结论 ■*AgAb复合物的量取决于Ag的量 ■Ag量越大,*AgAb量越少 ■Ag量越小,*AgAb量越大 ■测量*AgAb量或测量多余*Ag量可推算出 Ag量
结论 ◼ * AgAb复合物的量取决于Ag的量 ◼ Ag量越大， * AgAb量越少 ◼ Ag量越小， * AgAb量越大 ◼ 测量* AgAb量或测量多余* Ag量可推算出 Ag量
测量步骤 ■恒量的*Ag、Ab加入反应管中 加入待测样品、或标准品(已知浓度) 37℃C或4℃C温育 ■加入分离剂分离结合及游离部分 测定以总放射性为分母,测定*AgAb为分 子,计算结合%,以结合率为纵坐标,浓 度为坐标,制作标准曲线 ■待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
二、测量步骤 ◼ 恒量的* Ag、Ab加入反应管中 ◼ 加入待测样品、或标准品（已知浓度） ◼ 37℃或4 ℃温育 ◼ 加入分离剂分离结合及游离部分 ◼ 测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分 子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓 度为坐标，制作标准曲线 ◼ 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
结合8 ggoBsNo 0 16 2 64 128 浓度
0 2 4 8 16 32 64 128 80 70 60 50 40 30 20 10 结 合 % 浓 度
三、放免分析基本条件 ■标准品 ■标记抗原 ■特异抗体 ■分离剂—分离结合与游离部分
三、放免分析基本条件 ◼ 标准品 ◼ 标记抗原 ◼ 特异抗体 ◼ 分离剂——分离结合与游离部分
分离剂要求 ■快速而完全分离 ■操作简便、来源容易、价格便宜 ■不受血清、外界条件及其它试剂的干扰 ■适用于任何容积的反应液 ■非特异结合率小
分离剂要求 ◼ 快速而完全分离 ◼ 操作简便、来源容易、价格便宜 ◼ 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰 ◼ 适用于任何容积的反应液 ◼ 非特异结合率小
常用液相分离技术 ■双抗体法 口特点: 分离完全,非特异结合小,环境影响小,效价 高,但成本高 沉淀法聚乙二醇(W=6000) 口特点: 快速,价廉,来源方便,受环境影响大
常用液相分离技术 ◼ 双抗体法 特点： 分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价 高，但成本高 ◼ 沉淀法 聚乙二醇（w=6000） 特点： 快速，价廉，来源方便，受环境影响大
常用液相分离技术(续) ■吸附法吸附游离部分,适用于分离小分子 游离抗原。活性炭、纤维素粉末 口特点 快速、简便、准确性差 ■盐析法饱和硫酸胺、硫酸钠 固相分离技术,按材料不同,可分为试管 法、颗粒法、小盘法、纸片法
常用液相分离技术（续） ◼ 吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子 游离抗原。活性炭、纤维素粉末 特点 快速、简便、准确性差 ◼ 盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠 ◼ 固相分离技术，按材料不同，可分为试管 法、颗粒法、小盘法、纸片法