常用技术第二章核酸杂交技术 nucleic acid hybridization 潘銮凤Ifpan@shu.edu.cn
常用技术第二章 核酸杂交技术 nucleic acid hybridization 潘銮凤 lfpan@shmu.edu.cn
/一、实验原理 待检基因w核 杂交探针: 基因组 复性 酸变 CDNA RNA √性 寡核苷酸 杂交:碱基互补,>连续4bp形成双链 连续17bp人基因特异杂交
一、实验原理 核 酸 变 性 待检基因 杂交探针: 基因组 cDNA RNA 寡核苷酸 复性 杂交:碱基互补,>连续4bp形成双链 >连续17bp人基因特异杂交
傅/二、DNA的变性( (denaturation) 在一定条件下,DNA双链间的氢键断裂, 最后双链分开成为无规则线团,而核酸单链分 子中的所有共价键则不受影响,称为DNA变性。 DNA变性的常用方法: 1)热变性 2)酸、碱变性:pH10 3)化学试剂:尿素、甲酰胺、甲醛等
二、DNA的变性 (denaturation) 在一定条件下,DNA双链间的氢键断裂, 最后双链分开成为无规则线团,而核酸单链分 子中的所有共价键则不受影响, 称为DNA变性。 DNA变性的常用方法: 1)热变性 2)酸、碱变性:pH10 3)化学试剂:尿素、甲酰胺、甲醛等
DNA变性后性质变化: 1)粘度降低2)密度增加 3)A260增加:增色效应( hyperchromicity Single stranded helical 260 300 Wavelength (nm)
DNA变性后性质变化: 1) 粘度降低 2) 密度增加 3) A260增加:增色效应(hyperchromicity)
0.65 8包含较少的G0 两种不同 G0含量的 0.60 处的吸光率 包含较多的(+0)DM分子加 温时吸光率 变化的对比 055 050 Im"77C 83° 76 88 7075 8590 温度 DNA解链曲线(A)Tm与(G+C)%的关系(B)