应用篇第二章基因诊断 Gene Diagnosis 潘銮凤 54237329, lipan(ashmu.edu.cn
应用篇第二章 基因诊断 Gene Diagnosis 潘銮凤 54237329，lfpan@shmu.edu.cn
基本原理 基因诊断:通过检查基因的存在、缺陷或 表达异常,对人体状态和疾病 作出诊断的方法和过程。 基本原理:检测DNA或RNA的结构变化与 否,量的多少及表达功能是否 正常,以确定被检查者是否存 在基因水平的异常变化,以此 作为疾病确诊的依据
基因诊断：通过检查基因的存在、缺陷或 表达异常，对人体状态和疾病 作出诊断的方法和过程。 基本原理：检测DNA或RNA的结构变化与 否，量的多少及表达功能是否 正常，以确定被检查者是否存 在基因水平的异常变化，以此 作为疾病确诊的依据。 一、基本原理
基因诊断中常用的分子生物学技术 *核酸分子杂交 *聚合酶链式反应(PCR) *单链构象多态性(SSCP)检测 *变性高效液相色谱分析( DHPLC) *限制酶酶谱分析 *DNA芯片技术 *DNA测序 *DNA多态性连锁分析
二、基因诊断中常用的分子生物学技术 核酸分子杂交 聚合酶链式反应 （PCR） 单链构象多态性（SSCP）检测 变性高效液相色谱分析（DHPLC） 限制酶酶谱分析 DNA芯片技术 DNA测序 DNA多态性连锁分析
、基因诊断的特点 品高度特异性 高灵敏度和精确性 早期快速 诊断范围广,适应性强 4可用于非活体标本 DNA水平具有体细胞稳定性
三、基因诊断的特点 高度特异性 高灵敏度和精确性 早期快速 诊断范围广，适应性强 可用于非活体标本 DNA水平具有体细胞稳定性
四、基因诊断的应用领域 1.诊断疾病 2.ILA的基因分型 3.个体遗传基因的鉴定 4.性别鉴定 5.生物分类 6.法医学
四、基因诊断的应用领域 1. 诊断疾病 2. HLA的基因分型 3. 个体遗传基因的鉴定 4. 性别鉴定 5. 生物分类 6. 法医学
五、基因诊断的病因范围 1.基因结构的改变 点突变、插入、缺失 重排、易位、基因扩增 基因结构多态性变异 前病毒插入等 2.基因表达状况的改变 3.病原体的侵入 4病易感性基因检测
1. 基因结构的改变 点突变、插入、缺失 重排、易位、基因扩增 基因结构多态性变异 前病毒插入等 2. 基因表达状况的改变 3. 病原体的侵入 4.疾病易感性基因检测 五、基因诊断的病因范围
六、基因诊断的基本方法 (-)基因突变的分子诊断 (二)多态性分析 (三)基因表达异常的诊断 (四)外源DNA检测
六、基因诊断的基本方法 (一) 基因突变的分子诊断 (二) 多态性分析 (三) 基因表达异常的诊断 (四) 外源DNA检测
点突变、少数核苷酸缺失或插入的诊断 (1)诊断已知的点突变: PCR/ASO探针法 ASO: allele specific oligonucleotide, 等位基因特异性寡核苷酸 SSO: sequence-specific oligonucleotide 序列特异性寡核苷酸
(1) 诊断已知的点突变: PCR/ASO探针法 ASO: allele specific oligonucleotide, 等位基因特异性寡核苷酸 SSO: sequence-specific oligonucleotide 序列特异性寡核苷酸 1. 点突变、少数核苷酸缺失或插入的诊断
引物1 突变位点引物2 CATTGCCGTCATGCTGCGA正常序列 CATTGCCGTTATGCTGCGA异常序列 GTAACGGCAGTACGACGCT正常探针 GTAACGGCAATACGACGCT异常探针 正常探针异常探针基因型 斑点杂交 正常 杂合子 纯合子
突变位点 引物1 引物2 CATTGCCGTCATGCTGCGA 正常序列 CATTGCCGTTATGCTGCGA 异常序列 GTAACGGCAGTACGACGCT 正常探针 GTAACGGCAATACGACGCT 异常探针 正常探针 异常探针 + - + + - + 正常 杂合子 纯合子 基因型 斑 点 杂 交
/(2)诊断未知的突变: PCR/SSCP测序 SSCP: single strand conformation polymorphism 单链构象多态性 基因型: AA BB AB CC AC DD CAB PCR 32P-dCTP 链D ABCC 变性 链A 链B非变性 链A链B 链A 链B电泳 链A’链B
(2) 诊断未知的突变: PCR/SSCP/ 测序 SSCP: single strand conformation polymorphism 单链构象多态性 PCR 32P-dCTP 变 性 链A 链A’ 链B 链B’ 链A 链A’ 链B 链B’ 非变性 电泳 基因型： AA BB AB CC AC DD 链 C A B D，D’ A’ B’ C’ C’