《分子生物学理论与实验》 实验课程部分 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 潘銮凤,东5号楼305室 021-54237329;Ifpan@shmu.edu.cn
《分子生物学理论与实验》 实验课程部分 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 潘銮凤，东5号楼305室 021-54237329; lfpan@shmu.edu.cn •1
实验安排 实验一:DNA重组与转化 实验二:重组DNA提取与鉴定 课程负责人:潘銮凤 实验三:细胞总RNA提取及逆转录教师:王松梅(秘书) 实验四:实时荧光定量PCR 邵红霞 实验五: SDS-PAGE 潘銮凤 实验六: Western blot 实验七八:荧光原位杂交
实验安排 •2 实验一：DNA重组与转化 实验二：重组DNA提取与鉴定 实验三：细胞总RNA提取及逆转录 实验四：实时荧光定量 PCR 实验五：SDS-PAGE 实验六：Western Blot 实验七八：荧光原位杂交 课程负责人：潘銮凤 教师：王松梅（秘书） 邵红霞 潘銮凤
分子生物学实验流程图 质粒重组→转化→鉴定→质粒大量扩增→探针制备→杂交 细胞培养一RNA提取一→反转录一实时定量PCR 涂片-荧光原位杂交←组织切片 细胞培养一蛋白提取一浓度测定→→ PAGE+Western Blot ELISA
•3 分子生物学实验流程图 质粒重组 转化 鉴定 质粒大量扩增 探针制备 杂交 细胞培养 RNA提取 反转录 实时定量PCR 涂片-荧光原位杂交 组织切片 细胞培养 蛋白提取 浓度测定 PAGE Western Blot ELISA
实验注意事项 1.实验用品分组(3人一组)标记,放于实验桌上。实验开 始时清点;实验结束,请各组同学将用品归于原位,整理好 本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽 内的盆中(如玻璃耗材、部分离心管等,有疑问请咨询带教 老师) 多验开始彍珍乱翻歌! 每组2个盆,价桶,分列放冰,流涔妧级, 固体妧级,束时每组自行清理
实验注意事项 1. 实验用品分组（3人一组）标记，放于实验桌上。实验开 始时清点；实验结束，请各组同学将用品归于原位，整理好 本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽 内的盆中（如玻璃耗材、部分离心管等，有疑问请咨询带教 老师） •6 实验开始前请勿乱翻动！ 每组2个盆，1个桶，分别放冰，液体垃圾， 固体垃圾，结束时每组自行清理
2.实验试剂: 常规试剂通常每组一份放在桌上,部分试剂2组一份或 大桌放一管。试剂盒全班一套或两套 需要低温放置的试剂在冰箱下层的冰盆里,需在放在冰盒 中保温,特别是酶,加完要及时放回冰盒 试剂盒一般是全班一套或两套,放在讲台实验桌上,加完 及时返回,同学可相互询问一下试剂的动向 有些常规用试剂(如水,加样 buffer),可室温保存,多 次使用
•7 2. 实验试剂： 常规试剂通常每组一份放在桌上，部分试剂2组一份或一 大桌放一管。试剂盒全班一套或两套 需要低温放置的试剂在冰箱下层的冰盆里，需在放在冰盒 中保温，特别是酶，加完要及时放回冰盒 试剂盒一般是全班一套或两套，放在讲台实验桌上，加完 及时返回，同学可相互询问一下试剂的动向 有些常规用试剂（如水，加样buffer），可室温保存，多 次使用
3.离心机的正确使用:(注意安全和仪器保护) 平衡——15ml:连同离心管套架一起平衡 1.5ml:相同体积,对称位置放置) 离心机盖(包括内盖) 最高速度不能超限 离心时,先调节离心时间,再调节转速。等到 达设定转速并运转正常后再离开。 如需低温离心,请先开机将离心机预冷,离心 间歇阶段关机盖,离心结束,请打开机盖晾千
•8 3. 离心机的正确使用：（注意安全和仪器保护） 平衡—— 15ml：连同离心管套架一起平衡， 1.5ml：相同体积，对称位置放置） 离心机盖（包括内盖） 最高速度不能超限 离心时，先调节离心时间，再调节转速。等到 达设定转速并运转正常后再离开。 如需低温离心，请先开机将离心机预冷，离心 间歇阶段关机盖，离心结束，请打开机盖晾干
4.加样枪 Pipet的正确使用 选用合适量程的加样器 正确进行刻度调节(不能旋过头) 清洁爱护加样器 吸样品和加样品时的手势合理 当加样枪转到它的最高体积时,绝对不能再往前转,不然 这把加样枪就会被损坏,完全不能再用
4. 加样枪Pipet的正确使用 选用合适量程的加样器 正确进行刻度调节（不能旋过头） 清洁爱护加样器 吸样品和加样品时的手势合理 当加样枪转到它的最高体积时，绝对不能再往前转，不然 这把加样枪就会被损坏，完全不能再用
网对于最大体积为10山的加样枪1表示10山0表示1叫 0表示0y 00 0 对于100加样枪则, 表示10u。0表示10,0表示 对于10的加样枪, 表示100Q0表示10u0表示⑩山
对于最大体积为 10 l 的加样枪， 表示 10 l， 表示 1 l， 表示 0.1 l 对于 100 l 的加样枪则， 表示 100 l， 表示 10 l， 表示 1 l 对于 1000 l 的加样枪， 表示 1000 l， 表示 100 l， 表示 10 l 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1
加样枪的保护 1.吸取样品时,加样枪不要碰到管口或瓶壁 2.吸取酚、氯仿等腐蚀性液体时,要慢吸快放 3.刻度调试和清洗消毒
加样枪的保护： 1. 吸取样品时，加样枪不要碰到管口或瓶壁 2. 吸取酚、氯仿等腐蚀性液体时，要慢吸快放 3. 刻度调试和清洗消毒
A 准确吸取液体体积 C 顶部 1档 2档 正向操作 排气 吸液 放液 排空 保证吸取样品量的准确并且不造成试剂浪费
准确吸取液体体积 保证吸取样品量的准确并且不造成试剂浪费