《分子生物学理论与实验》 实验课程部分 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330;smwang2@fudan.edu.cn
《分子生物学理论与实验》 实验课程部分 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 王松梅 021-54237330; smwang2@fudan.edu.cn •1
实验流程图 质粒重组转化鉴定实验一、二 细胞培养一基因组DNA的制备一浓度测定实验三 PCR扩增 Southern印迹杂交 RealTime PCR? (FISH?) 实验四 实验七、八 细胞总蛋白提取一浓度测定_ SDS-PAGE- western Blot 实验五、六A
实验流程图 质粒重组 转化 鉴定 实验一、二 细胞培养 基因组DNA的制备 浓度测定 实验三 PCR扩增 Southern印迹杂交 （RealTime PCR？） （FISH?） 实验四 实验七、八 •2 细胞总蛋白提取 浓度测定 SDS-PAGE Western Blot 实验五、六
实验注意事项 1.实验用品分组(3人一组)标记,放于实验桌上。实验开 始时清点;实验结束,请各组同学将用品归于原位,整理好 本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽 内的盆中(如玻璃耗材、部分离心管等,有疑问请咨询带教 老师) 多验开始彍珍乱翻歌! 每组2个盆,价桶,分列放冰,流涔妧级, 固涔妧级,束时每组自犴猜總
实验注意事项 1. 实验用品分组（3人一组）标记，放于实验桌上。实验开 始时清点；实验结束，请各组同学将用品归于原位，整理好 本组桌面后再离开。需要回收的器皿初步冲洗后浸泡在水槽 内的盆中（如玻璃耗材、部分离心管等，有疑问请咨询带教 老师） •4 实验开始前请勿乱翻动！ 每组2个盆，1个桶，分别放冰，液体垃圾， 固体垃圾，结束时每组自行清理
2.实验试剂: 常规试剂通常3人一组放在桌上,部分试剂一大桌放一管 需要低温放置的试剂在讲台,需到讲台来加样,特别是酶, 加完及时放回原位 有些常规用试剂(如水,加样 buffer),可室温保存,多 次使用
•5 2. 实验试剂： 常规试剂通常3人一组放在桌上，部分试剂一大桌放一管 需要低温放置的试剂在讲台，需到讲台来加样，特别是酶， 加完及时放回原位 有些常规用试剂（如水，加样buffer），可室温保存，多 次使用
3.离心机的正确使用:(注意安全和仪器保护) 平衡——15m连同托架一起平衡, 15ml相同体积,对应位置放置) 离心机盖(包括内盖 最高速度不能超限 离心时,请等到达设定转速并运转正常后再离开 离心结束如是低温离心,请先开机将离心机预冷, 离心间歇阶段关机盖,离心结束,请打开机盖晾干
•6 3. 离心机的正确使用：（注意安全和仪器保护） 平衡—— 15ml连同托架一起平衡， 1.5ml相同体积，对应位置放置） 离心机盖（包括内盖） 最高速度不能超限 离心时，请等到达设定转速并运转正常后再离开 离心结束如是低温离心，请先开机将离心机预冷， 离心间歇阶段关机盖，离心结束，请打开机盖晾干
4.加样枪P的正确使用 刻度调节(注意 当加样枪转到咆的最高体积时,绝对不能再往前 转,香则极易损坏加样枪。 对于最大体积为10μ的加样枪,1表示10叫,0表示1叫0表示0 0 对于100的加样枪则, 1表示100u 表示10叫,0表示1 0 0 对于1000u的加样枪, 表示1000yl 表示100u,0表示10ul 000
4.加样枪Pipet的正确使用 刻度调节（注意不能旋过头） 当加样枪转到它的最高体积时，绝对不能再往前 转，否则极易损坏加样枪。 对于最大体积为 10 l 的加样枪， 表示 10 l， 表示 1 l， 表示 0.1 l 对于 100 l 的加样枪则， 表示 100 l， 表示 10 l， 表示 1 l 对于 1000 l 的加样枪， 表示 1000 l， 表示 100 l， 表示 10 l 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 . .
加样枪的保护: 吸取样品时,加样枪不要碰到管口或瓶壁 吸取酚、氯仿等腐蚀性液体时,要慢吸快放 刻度调试和清洗消毒 >保证吸取样品量的准确并且不造成试剂浪费
•8 加样枪的保护： •吸取样品时，加样枪不要碰到管口或瓶壁 •吸取酚、氯仿等腐蚀性液体时，要慢吸快放 •刻度调试和清洗消毒 保证吸取样品量的准确并且不造成试剂浪费
准确吸取液体体积 B 顶部 1档 正向操作 排气 吸液 放液 排
•9 准确吸取液体体积
关于加样,以下说法正确吗? 取样前,先将装试剂的EP管轻弹几下混匀,然后再进行 短暂离心后才能吸取样品 2.吸取样品的时候,为保证吸取量的准确,需尽可能将枪 头深入液体深部 3.吸取粘稠的样品如DNA时,宜慢慢吸取以保证量的准确, 还可用同批枪头吸取相同体积的水,通过观察液面在枪 头上的位置以判断吸取了足够体积的样品 4.先加体积大的样品,特别是水,然后再加小体积的样 或酶等 5.小体积的样品或酶要加入到液体中,并需轻轻吹打几次 以混匀
•10 1. 取样前，先将装试剂的EP管轻弹几下混匀，然后再进行 短暂离心后才能吸取样品 2. 吸取样品的时候，为保证吸取量的准确，需尽可能将枪 头深入液体深部 3. 吸取粘稠的样品如DNA时，宜慢慢吸取以保证量的准确， 还可用同批枪头吸取相同体积的水，通过观察液面在枪 头上的位置以判断吸取了足够体积的样品 4. 先加体积大的样品，特别是水，然后再加小体积的样品 或酶等 5. 小体积的样品或酶要加入到液体中，并需轻轻吹打几次 以混匀 关于加样，以下说法正确吗？ √ × √ √ √
5.实验中请注意化学试剂对人体的伤害。(带手套) 如酚有腐蚀性;溴化乙啶有致癌之嫌;丙烯酰胺有 神经毒性;某些酸碱,尤其浓酸浓碱的腐蚀性;等 等 6.紫外线会造成眼睛损伤。在紫外检测仪上观察电 泳条带时要盖好有机玻璃板,或戴上防护面罩。 7.值日生将按组轮流,负责整理实验室。 谊日生尭猜理实验室,倒妧级,最后离
5. 实验中请注意化学试剂对人体的伤害。（带手套） 如酚有腐蚀性；溴化乙啶有致癌之嫌；丙烯酰胺有 神经毒性；某些酸碱，尤其浓酸浓碱的腐蚀性；等 等。 6. 紫外线会造成眼睛损伤。在紫外检测仪上观察电 泳条带时要盖好有机玻璃板，或戴上防护面罩。 •11 7. 值日生将按组轮流，负责整理实验室。 值日生负责清理实验室，倒垃圾，最后离开