实验十 Western blot(二) 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 潘銮凤 021-54237329;Ifpan@shmu.edu.cn
实验十 Western Blot（二） 复旦大学基础医学院医学实验教学中心 潘銮凤 021-54237329; lfpan@shmu.edu.cn
Western B lot 总蛋白质制备 细胞裂解—蛋白质溶液 SDS-PAGE分离蛋白质 SDS蛋白质复合物→蛋白分离形成条带 转膜 蛋白质 凝胶 PVDF膜 1.封闭 2. 抗结 在PVDF膜上鉴定蛋白质 3.酶标二抗结合 4.显色
•2 Western Blot 总蛋白质制备 细胞裂解 蛋白质溶液 SDS-PAGE分离蛋白质 SDS-蛋白质复合物 蛋白分离形成条带 蛋白质 转膜 凝胶 PVDF膜 在PVDF膜上鉴定蛋白质 1. 封闭 2. 一抗结合 3. 酶标二抗结合 4. 显色
在PVDF膜上鉴定蛋白质 B Chemiluminescence Substrate Product
在PVDF膜上鉴定蛋白质 •3
≤ SDS-PAGE> Westem Blot M1212 一一←特异蛋白 考马斯亮蓝染色总蛋白 Westernblot检测特异蛋白d
考马斯亮蓝染色总蛋白 WesternBlot检测特异蛋白 特异蛋白
士周实验内容
1.制备SDS聚丙烯酰胺凝胶 电泳芯和制胶器 浓缩胶 压紧滑块 本体 分离胶 制胶器
•6 分离胶 浓缩胶 本体 制胶器 1. 制备SDS聚丙烯酰胺凝胶
2.制备细胞总蛋白 HL60细胞 细胞总可溶性蛋白 RIPA
2. 制备细胞总蛋白 HL60细胞 RIPA 细胞总可溶性蛋白
2.上样电泳(用加样枪) 凵」凵」LJ!凵」LL」 12 34 Sample 考染 转膜 Direction UUUUU migration 电泳结束后凝胶分成两个部分
•8 2. 上样电泳（用加样枪） 电泳结束后凝胶分成两个部分 1 2 3 4 考染 转膜
3.凝胶的考马斯亮蓝染色(第一部分凝胶)
3. 凝胶的考马斯亮蓝染色（第一部分凝胶）
4.将蛋白质转移到PVDF膜 (第二部分凝胶) △
•10 4. 将蛋白质转移到PVDF膜 （第二部分凝胶）