上海中医药大学：《医用分子生物学》课程教学资源（PPT课件）第八章 基因工程

第八章基因工程

1 第八章 基因工程

重组DNA技术 BamHI BamHI BamHI (1) BamHI AIkaline (4)DNA ligase phosphatase DNA ligase No self-ligation

2 重组DNA技术

Plasmid with foreign gene Agrobacterium multiplication Transformation 2 Infection Tobacco Rooting plant Shooting Tobacco plant 3 Test for foreign gene expression

3

大肠杆菌 人类细胞 破 ①分离DWA的 来源于两处： 质粒 限制性内 切酶位点 ②用同样的限 制性内切酶 切害割两种DA 包含目的基因 的人类DHA 粘性 末端 ③混合DHA,它 们遵循碱基 互补的原则 ④力加DA连接酶 包含目击基 因的人类DHA ⑤将质粒导入 到细菌细胞中 ©筛选含有重组质 粒的细菌细胞

4

PH PH ↑ BamHI BamHI Transfer vector PH Ligase PH Co-transfection Recombination PH Recombinant Original viral DNA viral DNA ↓ Infected cells Cannot infect ↓ Protein product 5

5

+ 6

6

基因工程的应用 细菌 ①分离质粒 含有目的基因的细胞 9 ②DWA纯化 ③基因插入 细菌染色体 质粒 到质粒中 基因重组 目的基因 ④质粒导入 细菌细胞 重组的田菌细胞 ⑤®细胞克陛 克陛蛋白 克壁基因分离 质的分离 e88 抗性基因插 人类的生 入植物中 长激素可 用于治疗 个头矮小 基因用于使细菌 蛋白质在心脏台疗中 清理有毒垃圾 用于清理血液凝块

7 基因工程的应用

第一节、工具酶 、 限制酶 (restriction enzyme):限制性内切酶 1、分类 根据酶结构、作用及DNA结合和裂解的特性 1类：限制和修饰作用 *2类：识别DNA内部位点、切割双链 3类：同类. 2、命名 首字母：大写：细菌属名 2-3字母：小写：细菌种名如 EcoR 1 4 大写：菌株 1, 2.… 分离到的次序 8

8 首字母： 大写：细菌属名 2-3字母： 小写：细菌种名 如 EcoR 1 4 : 大写: 菌株 1，2…: 分离到的次序 第一节、工具酶 一、限制酶（restriction enzyme）：限制性内切酶 1 类：限制和修饰作用 * 2 类：识别DNA内部位点、切割双链 3 类：同类． 1、分类 根据酶结构、作用及DNA结合和裂解的特性 2、命名

Clal Hpal Hindlll trpO,P SD Amp ptrpLl Ori Clal Clal, Gene Y Hindlll Gene X Ligation Ligation Gene X product Gene Y product

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3.酶的识别和切割位点 通常4-6bp,具有回文结构(pal indrom) (1)产生粘性末端(sticking end) 5'-末端：EcoR1:5'-GVAATTC-3 3'-CTTAA个G-5 3'-末端：Pst1:5'-CTGCAG-3 3'-G↑ACGTC-5 (2)产生平末端(blunt end) Sma1: 5'-CCCVGGG-3 3'-GGG个CCC-5 10

10 （2）产生平末端(blunt end): 3.酶的识别和切割位点: 通常4-6bp,具有回文结构(palindrom) （1）产生粘性末端(sticking end) 5＇-末端: EcoR 1: 5＇-GAATTC-3＇ 3＇-CTTAAG-5’ 3＇-末端:Pst1 : 5＇-CTGCAG-3＇ 3＇-GACGTC-5＇ Sma1: 5＇-CCCGGG-3＇ 3＇-GGGCCC-5＇