湖南中医药大学研究生选修课 Principles of Genetic Engineering 基因工程原理 湖南中医药大学鲁耀邦
湖南中医药大学研究生选修课 Principles of Genetic Engineering 基 因 工 程 原 理 湖南中医药大学 鲁耀邦
基因工程原理纲要 基因工程概论 基因工程的主要技术 基因工程的酶学基础 基因克隆的载体与受体 口目的基因的克隆与分离 克隆基因的检测与功能鉴定
基因工程原理纲要 基因工程概论 基因工程的主要技术 基因工程的酶学基础 基因克隆的载体与受体 目的基因的克隆与分离 克隆基因的检测与功能鉴定
第一节基因组DNA片断化 、限制性内切酶法 用限制性内切酶把基因组DNA切成不同大小的 片断。 酶切
第一节 基因组DNA片断化 一、限制性内切酶法 用限制性内切酶把基因组DNA切成不同大小的 片断。 酶切
1.优点 由于带有粘性末端,产物可以直接与载体连 接。 2缺点 目的基因内部也可能有该内切酶的切点。目的 基因也被切成碎片! BamH I BamH I BamH gene
由于带有粘性末端,产物可以直接与载体连 接。 1. 优点 2. 缺点 目的基因内部也可能有该内切酶的切点。目的 基因也被切成碎片! BamH I BamH I BamH I gene
、随机片断化 1.限制性内切酶局部消化法 控制内切酶的用量和消化时间,使基因组中 的酶切位点只有一部分被随机切开。 (1)限制性内切酶的选用原则 ①内切酶识别位点的碱基数 影响所切出的产物的长度和随机程度
二、随机片断化 1. 限制性内切酶局部消化法 控制内切酶的用量和消化时间,使基因组中 的酶切位点只有一部分被随机切开。 ① 内切酶识别位点的碱基数 影响所切出的产物的长度和随机程度。 (1)限制性内切酶的选用原则
1)4bp的内切酶 平均每44(256)bp一个切点。 随机程度高。如HaeⅢ、Au、Sau3A。 2)6bp的内切酶 平均每46(4096)bp一个切点 ②内切酶粘性末端 能与常用克隆位点相连。 (Sau3A--BamH D
1)4bp的内切酶 平均每4 6(4096)bp一个切点。 2)6bp的内切酶 平均每4 4(256)bp一个切点。 随机程度高。如HaeⅢ、AluI、Sau3A。 ② 内切酶粘性末端 能与常用克隆位点相连。 (Sau3A—BamH I)
2.机械切割法 (1)超声波 超声波强烈作用于DNA,可使其断裂成 约300bp的随机片断。 (2)高速搅拌 1500转/分下搅拌30min,可产生约8kb 的随机片断
2. 机械切割法 (1)超声波 超声波强烈作用于DNA,可使其断裂成 约300bp的随机片断。 (2)高速搅拌 1500转/分下搅拌30min,可产生约8kb 的随机片断