实验一 质粒的制备 实验二 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 实验三 外源 DNA 片段在质粒载体中的克隆 实验四 感受态细胞的制备 实验五 质粒的转化及转化子的鉴定 实验六 PCR 技术 实验七 植物总 DNA 的快速少量抽提（ CTAB 法） 实验八 总 DNA 质量检测及酶切 实验九 电泳、转膜 实验十 RNA Extraction (mini prep) 实验十一 RT-PCR 实验 附录 试剂配方 一 细菌培养试剂 二 质粒抽提试剂 三 DNA 操作试剂 四 RNA 操作试剂

实验一 植物基因组DNA的提取及其定性定量分析. 1 实验二 PCR扩增目的片段和胶回收. 8 实验三 目的片段和载体的连接. 15 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化效率检测. 18 实验五 重组质粒的转化. 20 实验六 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定. 23 实验七 RNA的提取（TRIzol法）. 30 实验八 mRNA的分离与纯化. 36 实验九 RT-PCR技术. 38 实验十 用mRNA差异显示法分离特异表达的基因片段 . 40 实验十一 cDNA文库的构建. 46 实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） . 51 实验十三 Southern印迹杂交法（Southern blot）. 56 实验十四 RNA分子杂交（Northern blot）. 62 实验十五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western blot）. 67 实验十六 RFLP技术. 71 实验十七 RAPD技术. 74 实验十八 细胞分裂中期染色体的荧光原位杂交技术(FISH). 76 附录一 常用缓冲液及其配制. 80 附录二 常用抗生素溶液. 85 附录三 常用贮存液的配制. 85 附录四 常用核酸蛋白换算数据. 93 附录五 染料在凝胶中的迁移速度. 94 附录六 实验中的一些好习惯. 95

实验一 蛋白质浓度的测定(1)—— Folin-酚法 实验二 蛋白质浓度测定(2)-紫外线（UV）吸收法 实验三 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 实验四 维生素 C 的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法 ） 实验五 从动物组织中提取脱氧核糖核酸 实验六 核酸浓度测定——紫外吸收法 实验七 血清谷丙转氨酶的测定（King氏法） 实验八 基于口腔拭子PCR基因组DNA扩增实验 实验一 核酸浓度测定——定磷法 实验二 胍盐-β巯基乙醇法提取RNA 实验三 real-time PCR测端粒酶mRNA表达 实验四 蛋白分子量测定——SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验五 糖酵解中间产物的鉴定 实验六 荧光分光光度法测定维生素B2的含量 实验八 pH值和温度对酶促反应速度的影响

第一节 聚合酶链反应 第二节 连接酶链反应 （Ligase chain reaction，LCR） 第三节 逆转录PCR（RT—PCR） 第四节 RNA的体外扩增

第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization and Blotting Technique 第二节 PCR技术的原理与应用 The Principle and Application of PCR Technology 第三节 基因文库 Gene Library 第四节 生物芯片技术 Biological Chip Technique

核酸的基本操作技术： 1）核酸的简介 2）基因组DNA提取 3）质粒DNA提取 4）真核细胞总RNA提取 5）琼脂糖凝胶电泳 6）核酸分子杂交 7）聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR) 8） RT-PCR

本书介绍组织病理学常用的多种技术。包括常见的技术，即福尔马林固定、石蜡包埋、HE染色技术，同时也介绍了常用的特殊染色技术，免疫组织化学技术，并简明地介绍了分子生物学技术的基本理论以及在组织病理学中的应用。 第一篇 石蜡切片技术 第一章 组织标本的处理 第一节 取材 第二节 组织的固定 第三节 大体标本的处理和固定 第四节 陈列标本的固定 第五节 脱钙 第六节 组织的冲洗 第二章 石蜡包埋技术 第一节 脱水 第二节 透明 第三节 浸蜡 第四节 包埋 第三章 切片技术 第一节 切片刀 第二节 切片机 第三节 石蜡切片的制作 第四节 特殊组织石蜡切片的制作 第五节 石蜡切片的异常及处理 第四章 染色与染色剂 第一节 染色的基本原理 第二节 染色剂染色的化学基础 第三节 染色剂的分类 第四节 常用染色剂及配制 第五节 苏木素—伊红染色法 第六节 封固剂 第五章 特殊染色技术 第一节 结缔组织染色法 第二节 脂类染色法 第三节 糖原及粘液染色法 第四节 色素染色法 第五节 神经组织染色法 第六节 核酸及核蛋白染色法 第七节 肌肉组织染色法 第八节 病原微生物染色法 第九节 特殊染色技术的应用 第二篇 免疫组织化学和亲和免疫组织化学技术 第一章 免疫组织化学技术 第一节 基本原理 第二节 染色步骤 第三节 常用试剂的配制 第二章 亲和免疫组织化学技术 第三篇 分子生物学技术 第一章 核酸原位杂交技术 第一节 核酸原位杂交的基本原理 第二节 核酸原位杂交的主要过程 第三节 核酸原位杂交的基本操作步骤 第四节 常用试剂的配制 第五节 核酸原位杂交的应用 第二章 原位PCR技术 第二节 基本类型 第三节 基本步骤 第四节 原位PCR技术的应用

1.了解某一特定组织或细胞某一特定mRNA转录量的变化,如 RT-PCR、 Northernblot等 2.了解某一特定组织或细胞全部mRNA转录量的变化,如 DD-PCR、基因芯片等。 3.获得某一特定组织或细胞全部mRNA,以便建立cDNA库等

PCR(Polymerase Chain Reaction) Three steps: denaturation, primer annealing, polymerization. Peoples Choice Reaction

一.名词解释 (1)多克隆抗体与单克隆抗体(p13); (2)特异性抗体与连接抗体(p60-61,p74-75); (3)标记抗体与不标记抗体(p52,p74-75 (4)PAP与 APAAP(p77,p86);