综合实验二 人乙醛脱氢酶2(ALDH2)多态性分析 PCR-APLP以及PCR 产物电泳鉴定及结果分析
综合实验二 人乙醛脱氢酶2 (ALDH2)多态性分析 ---PCR-APLP以及PCR 产物电泳鉴定及结果分析
综合实验 (二) 基因组抽提 PCR-APLP PCR产物电泳鉴 定及结果分析 已经完成
（一） 基因组抽提 （二） PCR-APLP （三） PCR产物电泳鉴 定及结果分析 综合实验 已经完成
PCR反应液配置 ①2÷ Master mix 10p ②引物(ALl+AL3)or(AL2+AI3)2p ③H2O 5pl ④模板-即抽提的基因组DNA 3 ul 20 Hl 每个样品分2管进行扩增 注意:PCR试管做好记号
PCR反应液配置 ① 2* Master Mix 10 μl ②引物 ( AL1+AL3) or (AL2+AL3) 2 μl ③ H2O 5 μl ④模板--即抽提的基因组DNA 3 μl 每个样品分2管进行扩增 注意：PCR试管做好记号 20 μl
PCR反应条件 (DNA扩增仪设定反应条件) 预变性: 94c 10 min 模板DNA的变性 94℃C30sec 39 模板DNA与引物的退火:58℃30se个 循 引物延伸 72℃30sec」环 末次循环后延伸 72℃10min 保温: 10℃Hold
PCR反应条件 （DNA扩增仪设定反应条件） 预变性： 94℃ 10 min 模板DNA的变性： 94℃ 30 sec 模板DNA与引物的退火： 58℃ 30 sec 引物延伸： 72℃ 30 sec 末次循环后延伸： 72℃ 10 min 保温： 10℃ Hold 39 个 循 环
多聚酶链式反应( polymerase chain reaction ,PCR)类似于DNA的天然复制过程:经过 变性、退火、延伸多次循环,DNA扩增倍 数可达2n倍 PCR是一项DNA体外合成放大技术,能快 速特异地在体外扩增任何目的DNA
多聚酶链式反应（polymerase chain reaction , PCR）类似于DNA 的天然复制过程：经过 变性、退火、延伸多次循环, DNA 扩增倍 数可达2 n 倍。 PCR是一项DNA体外合成放大技术，能快 速特异地在体外扩增任何目的DNA
PCR技术简史 >1985年,美国 PE-Cetus公司 的Mus等人发明PCR >基本原理是在试管中模拟细 胞内的DNA复制 >1993年, Mullis等因此项技 术获诺贝尔化学奖
PCR技术简史 1985年，美国PE-Cetus公司 的Mullis等人发明PCR 基本原理是在试管中模拟细 胞内的DNA复制 1993年，Mullis等因此项技 术获诺贝尔化学奖
Muis的构思 引物DNA聚合酶 DNA聚合酶引物 ■■■■■■■■■■■■■■■■■ ■■■■■■■■■■■■■■■口■ 特定DNA片段
引物 引物 Mullis的构思 DNA聚合酶 DNA聚合酶 特定DNA片段
Taq dna聚合酶 100 酶 80 活 性60 40 20 温度(℃) 405060708090100
Taq DNA聚合酶 酶 活 性(%) 温度(℃) 40 50 60 70 80 90 100 100 80 60 40 20
PCR的基本原理 高温变性低温退火适温延伸 重复1-3步 温94 25~30轮 度 (C) 目的DNA片段 72 形成条单 子链延伸 扩增100万倍以上 DNA加倍 链DNA单链 22 与引物复性 DNA双螺旋 时间(min)
22 55 72 94 时间（min） 温 度 （℃） PCR的基本原理 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 DNA 变 性 形 成 2 条 单 链 子链延伸 DNA加倍
94℃C 模板DNA T「「「「「「「「「
PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 1 2 3 4 5 22 55 72 94 时间（min） 温 度 （℃） 适温延伸 3 高温变性 1 低温退火 2 重复1~3步 25~30轮 目的DNA片段 扩增100万倍以上 DNA双螺旋 DNA单链 与引物复性 子链延伸 DNA加倍 DNA 变 性 形 成 2 条 单 链 模板DNA 94℃