Dept. Biochem Mol Biol 蛋白质的吸光分析测定 上医生化
蛋白质的吸光分析测定
Dept. Biochem Mol Biol 本次实验目的 掌握蛋白质浓度测定的三种方法的原理、实验步骤 了解改良lowy法、 Coomassie亮蓝法、紫外分光光度法测 定蛋白浓度的区别、优缺点以及适用范围 上医生化
• 掌握蛋白质浓度测定的三种方法的原理、实验步骤 • 了解改良lowry法、Coomassie亮蓝法、紫外分光光度法测 定蛋白浓度的区别、优缺点以及适用范围。 本次实验目的
Dept. Biochem Mol Biol 蛋白质是生物体的重要组成成分,也是生命活 动的主要物质基础。 蛋白质含量测定是各基础和临床学科的基本实 验手段。 ≯根据蛋白质的物理、化学或者生物学特性可以 测定其含量。 目前常用的是比色法和紫外分光光度法。 上医生化
蛋白质是生物体的重要组成成分，也是生命活 动的主要物质基础。 蛋白质含量测定是各基础和临床学科的基本实 验手段。 根据蛋白质的物理、化学或者生物学特性可以 测定其含量。 目前常用的是比色法和紫外分光光度法
Dept. Biochem Mol Biol 本次实验内容 利用分光光度计进行蛋白质定量测定 1.改良 Lowry比色法( Hartree法) 2.考马斯( Coomassie)亮蓝结合法 3.紫外分光光度法 上医生化
利用分光光度计进行蛋白质定量测定 1.改良Lowry比色法（Hartree法） 2.考马斯（Coomassie）亮蓝结合法 3.紫外分光光度法 本次实验内容
Dept. Biochem Mol Biol 原理和仪器 吸光分析法的原理 1.有色物质对可见光有选择性吸收作用;一些无 色溶液对可见光无吸收作用,但其所含物质可 以吸收特定波长的紫外线或红外线 2.不同物质由于分子结构不同,对不同波长光的 吸收能力也不同。因此每种物质都具有其特征 性的吸收光谱。 3.在一定条件下,物质对光的吸收程度与该物质 的浓度成正比。 上医生化
1.有色物质对可见光有选择性吸收作用；一些无 色溶液对可见光无吸收作用，但其所含物质可 以吸收特定波长的紫外线或红外线。 2.不同物质由于分子结构不同，对不同波长光的 吸收能力也不同。因此每种物质都具有其特征 性的吸收光谱。 3.在一定条件下，物质对光的吸收程度与该物质 的浓度成正比。 吸光分析法的原理 原理和仪器
Dept. Biochem Mol Biol 如何定性? 利用吸收光谱鉴定化合物 利用分光光度计绘制吸收光谱曲线 用各种不同的单色光分别通过某一溶液,测定此溶液 对每一种单色光的吸收度,以波长为横坐标,以吸光度为 纵坐标绘制吸光度-波长曲线,即吸收光谱曲线。 每种物质有其特征性的吸收光谱 上医生化
— 利用吸收光谱鉴定化合物 利用分光光度计绘制吸收光谱曲线 用各种不同的单色光分别通过某一溶液，测定此溶液 对每一种单色光的吸收度，以波长为横坐标，以吸光度为 纵坐标绘制吸光度-波长曲线，即吸收光谱曲线。 如何定性？ 每种物质有其特征性的吸收光谱
Dept. Biochem Mol Biol 3o5 670 0.01 400 500 600 Wavelength 胡萝卜素蛋白复合物室温吸收光谱 上医生化
胡萝卜素蛋白复合物室温吸收光谱
Dept. Biochem Mol Biol 如何定量? 一 Lambert-Beer定律 1.朗伯( Lambert)定律 束单色光通过一光吸收介质时,其光强度随吸收光 介质的厚度增加呈指数减少。 LgIo/I=KL 入射光强度;I:透射光强度;L:介质厚度 K:吸光系数 上医生化
1. 朗伯（Lambert）定律 一束单色光通过一光吸收介质时，其光强度随吸收光 介质的厚度增加呈指数减少。 LgI0/I=KL I0 :入射光强度； I :透射光强度；L ：介质厚度 K：吸光系数 — Lambert - Beer定律 如何定量？
Dept. Biochem Mol Biol 2.比尔(Beer)定律 束单色光通过一光吸收介质时,其光强度随吸收光 介质的浓度的增加呈指数减少。 LgIo/I=KC 入射光强度;I:透射光强度;C:介质浓度 K:吸光系数 上医生化
2．比尔（Beer）定律 一束单色光通过一光吸收介质时，其光强度随吸收光 介质的浓度的增加呈指数减少。 LgI0/I=KC I0 :入射光强度； I :透射光强度；C ：介质浓度 K：吸光系数
Dept. Biochem Mol Biol 3. Lambert-beer'slaw的合并 束单色光通过某溶液时,光波被溶液吸收一部分,吸 收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比 A=-Igt=-Igl/I=KcL A:吸光度;C:溶液浓度;L:液层厚度;T:透光度 K:即吸光系数,是指当溶液浓度为1mol/L,光程(溶液厚 度)为1cm时的吸光度。 上医生化
3.Lambert-beer’s law的合并 一束单色光通过某溶液时，光波被溶液吸收一部分，吸 收多少与溶液中溶质的浓度和溶液厚度成正比。 A= -lgT= -lg I/ I 0 =KCL A：吸光度； C：溶液浓度； L：液层厚度；T：透光度 K：即吸光系数，是指当溶液浓度为1mol/L,光程(溶液厚 度)为1cm时的吸光度