第一节 杂交瘤技术的基本原理 一、杂交瘤技术 二、阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存 第二节 单克隆抗体的制备 一、单克隆抗体的产生 二、单克隆抗体的纯化 三、单克隆抗体的性质鉴定 四、单克隆抗体的特性 第三节 基因工程抗体制备 一、人源化抗体 二、小分子抗体 三、抗体融合蛋白 四、双特异性抗体 五、噬菌体抗体库技术 第四节 单克隆抗体的应用 一、检验医学诊断试剂 二、蛋白质的提纯 三、小分子抗体的应用 四、抗体融合蛋白的应用 五、双特异抗体的应用 六、抗体库技术的应用和前景

第一节 基因工程概述 (Genetic Engineering) 第二节 工具酶 第三节 常用的目的基因制备方法 第四节 载体（Vector)与宿主细胞 第五节 目的基因和载体的体外连接 第六节 将重组DNA分子导入宿主细胞 第七节 目的基因的筛选和鉴定 第八节 克隆基因的表达 第九节 外源蛋白表达产物的鉴定 第十节 基因工程在医学中的应用

第一节 基因工程(Genetic Engineering)概述 第二节 工具酶 第三节 常用的目的基因制备方法 第三节 载体（Vector)和宿主细胞 第四节 目的基因和载体的体外连接 第五节 将重组DNA分子导入宿主细胞 第六节 目的基因的筛选和鉴定 第七节 克隆基因的表达 第八节 外源蛋白表达产物的鉴定 第九节、基因工程在医学中的的应用

第三节 DNA重组技术过程 1、制备目的基因和相关载体 2、将目的基因和有关载体进行连接 3、将重组本DNA导入受体细胞 4、DNA重组体的筛选和鉴定 5、DNA重组体的扩增、表达和其他研究 第五节 利用重组DNA技术可对基因进行改造 第六节 克隆基因在适当宿主细胞内表达

第三节 DNA重组技术过程 1、制备目的基因和相关载体 2、将目的基因和有关载体进行连接 3、将重组本DNA导入受体细胞 4、DNA重组体的筛选和鉴定 5、DNA重组体的扩增、表达和其他研究 第五节 利用重组DNA技术可对基因进行改造 第六节 克隆基因在适当宿主细胞内表达

不同基因通过不同机制导致疾病发生 血红蛋白结构 基因结构和表达与疾病的研究策略 核糖核酸酶切分析 基因表达系列分析 (Serial Analysis of Gene Expression, SAGE) 抑制性差减杂交 (suppressive subtractive hybridization, SSH) 核酶技术确定基因在疾病中的作用 RNAi现象的发现 定位克隆 HGP与疾病相关基因的研究 双向凝胶电泳技术的应用

第一节、实验室规则及安全防护 一、实验室规则 二、实验室安全防护 第二节、分子生物学常用研究技术 一、核酸分离纯化 二、聚合酶链反应技术 三、分子杂交技术 四、分子克隆技术 五、其它新技术 第三节、常用仪器使用 一、离心机 二、分光光度计 三、PCR 仪 第四节、如何撰写实验报告 第五节 核酸分离纯化技术 实验一、基因组 DNA 的提取制备与检测 实验二、总 RNA 的提取制备与检测 实验三、质粒 DNA 的提取制备与检测 第六节 PCR 技术 实验四、常规 PCR 技术 实验五、定量 PCR 技术 第七节 分子克隆技术 实验六、DNA 的限制性酶切与电泳 实验七、凝胶中 DNA 片断的纯化回收 实验八、DNA 连接实验 实验九、感受态细胞的制备 实验十、重组 DNA 转化与篮白斑筛选 第八节 分子杂交技术 实验十一、Southern 印迹杂交 实验十二、Northern 印迹杂交 实验十三、Western 印迹 实验十四、核酸原位杂交 第九节 综合性实验 实验十五、蛋白质双向电泳 实验十六、酵母双杂交实验 实验十七、RNA 干扰实验

第一章生物化学实验基本知识与操作 第一节生物化学实验基本知识 第二节 第二章分光光度技术 实验一双缩脲法测定蛋白质浓度 实验二 Folin-酚试剂法(Lowry 法)测定蛋白质浓度 实验三紫外分光光度法测定蛋白质浓度 实验四考马斯(Comessie)亮兰结合法测定蛋白质浓度 实验五BCA 法测定蛋白质浓度 实验六激素对血糖浓度的影响及血糖的测定 第三章生物大分子的提取、沉淀和离心分离技术 第一节生物材料的选取与预处理 第二节生物大分子的沉淀分离技术 第三节生物大分子离心分离技术 实验七鸡血SOD的提取、分离及活力测定 实验八碱性磷酸酶的制备及活力测定 实验九酪蛋白的制备 实验十动物肝脏中提取DNA 实验十一猪心肌细胞线粒体可溶性ATP合酶的提 第四章电泳技术 实验十二DNA 琼脂糖凝胶电泳 实验十三血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 实验十四聚丙烯酰胺凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶 实验十五蛋白质分子量的测定——SDS-聚丙烯凝胶电泳 实验十六聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 第五章层析技术 第一节 层析技术概述 吸附层析 第三节 分配层析 第四节 离子交换层析 第五节 凝胶层析 第六节亲和层析 第七节 高效液相层析 实验十七氨基酸的纸上层析与氨基酸的转氨基作用 实验十八血清-球蛋白的分离纯化与鉴定 实验十九 亲和层析纯化胰蛋白酶 实验十二离子交换层析分离氨基酸 实验二十一蛋白质分子量测定——凝胶过滤层析法 第六章 分子生物学基本技术 核酸分子杂交 聚合酶链反应 第三节分子克隆 实验二十二Southern杂交分析 实验二十三 Northern 杂交分析 实验二十四 PCR 基因扩增 验二十五质粒DNA的提取及酶切 实验二十六 DNA重组实验 实验二十七大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 附录一常用缓冲液的配制方法 附录二易变质及需要特殊方法保存的试剂 附录三一般化学试剂的分级 附录四 English words in the lab

生命科学是21世纪的带头学科,在现代生命科学最前沿的研 究领域中,以研究人类基因组结构和功能为主的“蛋白质组计划 已经成为分子生物学的重要课题,并带动了整个生命科学的发展 随着科学不断发展,研究手段日新月异,我们从实践中体会到,在 蛋白质研究的日常工作中,一本关于蛋白质研究方法的工具书会 发挥很大的作用。1990年前后出版的《分子克隆实验指南)使核 酸操作技术实现了标准化,推动了“基因组计划”的发展和实现。 由于蛋白质结构和性质的复杂与多样性,难以归纳出般性的分 析操作规程

一、编写说明 1、课程简介:本门课程是农学、植保和园艺专业的专业基础课,是生物科学方面的基础理 论知识。它是农、林、园艺、园林等专业必选课程。在分子水平探索生命本质给予生命 科学无可限量的活力和发展前景,而生物化学所研究的正是生命过程的分子基础。过去的 半个世纪生物学飞速发展的历史雄辩地证明,生物化学不仅是生命科学的带头学科之一, 而且在医学、工农业生产、生物工程等领域得到广泛应用。权威人士预言,二十一世纪将 是生命科学的时代。因此,当今世界各发达国家和许多发展中国家都十分重视生命科学的 研究与教育,早把生物化学列为各有关专业必修的重要基础课。我国高等农业院校农学 类专业自八十年代初普遍开设了“基础生物化学”,对于改善学生的知识构成、提高适应 能力、增强发展后劲、缩小与国内外先进水平的差距起到了积极的作用。 2、地位和任务:本课程的任务是使学生掌握生物化学的基础理论、基本知识和基本的生化 实验方法与技术,为有关后续课程的学习和继续深造奠定基础,本着既考虑生物化学自身 的系统性和完整性,又顾及体现农学类专业的特点和教学工作实际的原则,本大纲共分十 一章:第一章为绪论;第二至第四章为静态生化部分,重点介绍生物大分子;第五至第十 章为动态生化部分,重点介绍糖类、脂类、氨基酸和核苷酸的基本代谢以及能量代谢;第 十一章重点介绍信息代谢。鉴于DNA重组和基因克隆技术对生命科学的发展具有划时代的 意义,日益成为重要的常规实验手段