实验一 质粒DNA的小量提取 实验二 质粒DNA的酶切和电泳鉴定 实验三 重组DNA分子的构建 实验四 重组子的检测及限制性酶切鉴定 实验五 大肠杆菌感受态细胞的制备 实验六 质粒DNA分子导入原核细胞 实验七 聚合酶链式反应（PCR）扩增DNA片断 实验八 植物基因组DNA的提取 实验十 植物总RNA的提取及其电泳鉴定

第一节 微生物遗传物质基础 一、DNA作为遗传物质 二、RNA作为遗传物质 三、朊病毒的发现与思考 第二节 微生物的基因组结构 第四节 基因突变及修复 第五节 细菌基因的水平转移和重组

第一节 遗传变异的物质基础 第二节 微生物的基因组结构 第三节 质粒和转座因子 第四节 基因突变及修复 第五节 基因重组 第六节 微生物育种 第七节 菌种的衰退、复壮与保藏

1. 免疫基因的重排 2. 癌细胞中DNA的重排 3. 酵母细胞性别的转换 4. 非洲锥虫表面抗原的变化 5. Ti质粒DNA与植物基因组的相互作用 6. 嗜血流感菌鞭毛特性的转变

第一节遗传变异的物质基础 第二节微生物的基因组结构 第三节质粒和转座因子 第四节基因突变及诱变育种 第五节细菌基因转移和重组 第六章真核微生物的遗传学特性 第七章菌种的衰退、复壮与保藏

这一章讨论的是解释DNA序列的方法,这些方法主要依赖于功能模式的检测,而不是与其它单 个序列的比较。这些方法中的绝大部分意在先寻找并遮蔽重复的和低复杂性的序列,再寻找 基因以及与其相关的调控区域。在针对单个序列的集中调查分析,以及为可能的基因、整个 基因组或相应较大区域建立初步清单的快速扫描过程中,这些方法都发挥了主要作用

基本概念 基因突变:DNA分子结构发生的化学变化。 染色体畸变:染色体发生形态结构和数目的改变。 缺失:正常染色体上某区段的丢失。重复:正常染色体上增加了与本身相同的一段。 倒位:染色体上某区段正常排列顺序发生了180度的颠倒。 易位:两个非同源染色体间某区段的转移。 染色体组:也叫基因组,即由同源染色体之一组成的一套 染色体及其所包含的一套基因

生命科学是21世纪的带头学科,在现代生命科学最前沿的研 究领域中,以研究人类基因组结构和功能为主的“蛋白质组计划 已经成为分子生物学的重要课题,并带动了整个生命科学的发展 随着科学不断发展,研究手段日新月异,我们从实践中体会到,在 蛋白质研究的日常工作中,一本关于蛋白质研究方法的工具书会 发挥很大的作用。1990年前后出版的《分子克隆实验指南)使核 酸操作技术实现了标准化,推动了“基因组计划”的发展和实现。 由于蛋白质结构和性质的复杂与多样性,难以归纳出般性的分 析操作规程

实验一 植物基因组DNA的提取及其定性定量分析. 1 实验二 PCR扩增目的片段和胶回收. 8 实验三 目的片段和载体的连接. 15 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化效率检测. 18 实验五 重组质粒的转化. 20 实验六 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定. 23 实验七 RNA的提取（TRIzol法）. 30 实验八 mRNA的分离与纯化. 36 实验九 RT-PCR技术. 38 实验十 用mRNA差异显示法分离特异表达的基因片段 . 40 实验十一 cDNA文库的构建. 46 实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） . 51 实验十三 Southern印迹杂交法（Southern blot）. 56 实验十四 RNA分子杂交（Northern blot）. 62 实验十五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western blot）. 67 实验十六 RFLP技术. 71 实验十七 RAPD技术. 74 实验十八 细胞分裂中期染色体的荧光原位杂交技术(FISH). 76 附录一 常用缓冲液及其配制. 80 附录二 常用抗生素溶液. 85 附录三 常用贮存液的配制. 85 附录四 常用核酸蛋白换算数据. 93 附录五 染料在凝胶中的迁移速度. 94 附录六 实验中的一些好习惯. 95

实验一 细菌感受态的制备和质粒的转化. 2 实验二 碱变性法提取质粒 DNA . 6 实验三 水平式琼脂糖凝胶电泳法检测 DNA . 11 实验四 DNA 的限制性内切酶酶切 . 15 实验五 DNA 的回收与连接 . 18 实验六 基因的 PCR 扩增. 23 实验七 用温度敏感型启动子表达系统表达目的基因. 29 实验八 基因组合生物合成新化合物. 36 实验九 药用甘草片中甘草酸含量的分析及其质量评价. 47 实验十 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备. 48 实验十一 固定化细胞法生产 L-天冬氨酸和 L-丙氨酸. 50 实验十二 重组水蛭素Ⅲ的制备. 57 实验十三 酸醇提取法制备猪胰岛素. 65 实验十四 多肽缩宫素的 Fmoc 固相合成法. 70 实验十五 酵母 RNA 的制备和单核苷酸的离子交换柱层析分析. 76 实验十六 单核苷酸衍生物制备. 82 实验十七 胰弹性蛋白酶的制备及活力测定. 85 实验十八 超氧化物歧化酶的分离纯化. 89 实验十九 重组门冬酰胺酶Ⅱ的纯化与分析. 97