第29卷第2期 作物学报 Vol 29,Na 2 2003年3月280284 ACTA A GRONOM ICA SN CA pp280284Mar,2003 马铃薯种间体细胞杂种的育性和遗传改良 司怀军王蒂 (甘肃农业大学农学院，甘肃兰州730070) 摘要对马铃薯双单倍体品系81-l5和南美二倍体栽培种Solanum phureja及二倍体野生种Solamum chacoense原生 质体融合获得的25个株系的花粉育性和雌配子育性进行了测定。结果显示，马铃薯种间体细胞杂种花粉育性与其双亲 相比明显降低。81.15+S.phureja和81.15+S.chacoense的种间体细胞杂种的花粉育性范围分别为70%428% 和&0%一201%，花粉中小花粉所占的比例明显增加，最高的可达360%。对体细胞杂种进行人工辅助自花授粉每 个浆果得到的种子数较少，但用四倍体栽培品种甘农薯3号作父本进行授粉时每个浆果得到较多的种子，最多的可达 每个浆果384粒，说明雌配子育性较好。以甘农薯3号作父本，4个优良的体细胞杂种作母本进行1次杂交和1次回 交，从回交后代中选育出了10个农艺性状优良、块茎性状表现较好、块茎产量高、高淀粉和低还原糖含量的优良株 系。这些结果表明，体细胞融合技术与常规育种技术相结合，是进行马铃薯遗传改良和选育新品系的有效途径。 关键词马铃薯，体细胞杂种；花粉育性，雕配子育性，回交改良 中图分类号：S532 文献标识码A Fertil ity and Genetic m provement of In terspec if ic Somatic Hybr ids of Pota to SIHuai-Jun WANGDi (College of A grona y,Gansu A gricultural University,L anhou,Gansu 730070,China) Abstract The pollen viability and fem ale fertility of 25 som atic hybridsobtained by protop last fusin betw een a dihap b id of Solamo tuberosun strain 81-15 and two dpb id species (a South Am erican dp bid cultivated species Solammn phureja and a dpb id w ild speces Solanum chacoense)were investigated The results indicated that although the fertility of the male gametes of the interspecific somatic hybrid was rather bw,as revealed by bwer percentages of fertile pollens,higher percentages of sall pollens and bwer percentages of seedsetting after self pollination,the fertility of the fem ale gam etesw asm uch better The seedsetting after pollinated w ith a comm ercial variety Gannongshu No 3 ranged from 7538 4/fruit,as compared w ith 012 5/fruit,when the som atic hybrids were self-pollinated Four better lines of the interspecific som atic hybridswere backcrossed sexually w ith Gannongshu No 3 and ten prom ising lines w hose agronom ic traits were better then,at least not inferir to,Gannongshu No.3 were obtained,indicating interspecific som atic hybrid izaton,when com bined w ith traditonalbreedingm ethod,m ight be as a new approach for the genetic iprovem ent and the devebpment of new cultivars in potato breeding Key words Potato;Som atic hybrids Pollen fertility;Fem ale fertility;Backcross mprovem ent 植物体细胞融合技术在马铃薯的品种改良和育 的范围，创造新种质。而且还可以获得既有核基因 种实践中具有重要的意义。应用该技术可以克服有 重组，又有胞质基因重组的高产优质杂种。因而， 性杂交不亲和、性器官败育等问题，从而扩大杂交 是实现基因重组的一条新途径，是有性杂交的有效 基金项目：国家863计划项目(200AA241132)和因家自然科学基金资助项目(39670480) 套尊个热统配程此染装谢虎要从事马管第主物技术有种的所究现为华中农业大学在职博士。在研究过程中赣朝曦教 Received on(收稿日期)：2001-10-22，Accepted on(接受日期：2002-05-27 C 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co..Ltd.All rights reserved
第 29 卷 第 2 期 作 物 学 报 V ol. 29, N o. 2 2003 年 3 月 280～ 284 A CTA A GRONOM ICA S IN ICA pp. 280～ 284 M ar. , 2003 马铃薯种间体细胞杂种的育性和遗传改良α 司怀军 王 蒂 (甘肃农业大学农学院, 甘肃兰州 730070) 摘 要 对马铃薯双单倍体品系 81215 和南美二倍体栽培种 S olanum p hureja 及二倍体野生种 S olanum chacoense 原生 质体融合获得的 25 个株系的花粉育性和雌配子育性进行了测定。结果显示, 马铃薯种间体细胞杂种花粉育性与其双亲 相比明显降低。81- 15+ S. p hureja 和 81- 15+ S. chacoense 的种间体细胞杂种的花粉育性范围分别为 7. 0%～ 42. 8% 和 8. 0%～ 20. 1% , 花粉中小花粉所占的比例明显增加, 最高的可达 36. 0%。对体细胞杂种进行人工辅助自花授粉每 个浆果得到的种子数较少, 但用四倍体栽培品种甘农薯 3 号作父本进行授粉时每个浆果得到较多的种子, 最多的可达 每个浆果 38. 4 粒, 说明雌配子育性较好。以甘农薯 3 号作父本, 4 个优良的体细胞杂种作母本进行 1 次杂交和 1 次回 交, 从回交后代中选育出了 10 个农艺性状优良、块茎性状表现较好、块茎产量高、高淀粉和低还原糖含量的优良株 系。这些结果表明, 体细胞融合技术与常规育种技术相结合, 是进行马铃薯遗传改良和选育新品系的有效途径。 关键词 马铃薯; 体细胞杂种; 花粉育性; 雌配子育性; 回交改良 中图分类号: S532 文献标识码: A Fertil ity and Genetic Improvemen t of In terspec if ic Soma tic Hybr ids of Pota to S I H uai2Jun WAN G D i (College of A g ronom y , Gansu A g ricultural U niversity , L anzhou, Gansu 730070, China) Abstract T he pollen viability and fem ale fertility of 25 som atic hybrids obtained by p rotop last fusion betw een a dihap loid of S olanum tuberosum strain 81215 and two dip loid species (a South Am erican dip loid cultivated species S olanum p hu reja and a dip loid w ild species S olanum chacoense)w ere investigated. T he results indicated that although the fertility of the m ale gam etes of the interspecific som atic hybrid w as rather low , as revealed by low er percentages of fertile pollens, h igher percentages of sm all pollens and low er percentages of seedsetting after self2pollination, the fertility of the fem ale gam etesw asm uch better. T he seedsetting after pollinated w ith a comm ercial variety Gannongshu N o. 3 ranged from 7. 5～ 38. 4öfruit, as compared w ith 0～ 12. 5öfruit, w hen the som atic hybrids w ere self2pollinated. Four better lines of the interspecific som atic hybridsw ere backcrossed sexually w ith Gannongshu N o. 3 and ten p rom ising lines w hose agronom ic traits w ere better then, at least not inferior to, Gannongshu N o. 3 w ere obtained , indicating interspecific som atic hybridization , w hen com binedw ith traditionalbreedingm ethod , m igh t be as a new app roach for the genetic imp rovem ent and the developm ent of new cultivars in potato breeding. Key words Potato; Som atic hybrids; Pollen fertility; Fem ale fertility; Backcross imp rovem ent 植物体细胞融合技术在马铃薯的品种改良和育 种实践中具有重要的意义。应用该技术可以克服有 性杂交不亲和、性器官败育等问题, 从而扩大杂交 的范围, 创造新种质。而且还可以获得既有核基因 重组, 又有胞质基因重组的高产优质杂种。因而, 是实现基因重组的一条新途径, 是有性杂交的有效 α 基金项目: 国家 863 计划项目(2001AA 241132) 和国家自然科学基金资助项目(39670480) 作者简介: 司怀军(19712) , 男, 讲师, 主要从事马铃薯生物技术育种的研究。现为华中农业大学在职博士。在研究过程中戴朝曦教 授给予了热情指导和帮助, 在此深表谢忱。 Received on (收稿日期): 2001210222, A ccep ted on (接受日期): 2002205227 © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved
2期 司怀军等：马铃薯种间体细胞杂种的育性和遗传改良 281 补充。在马铃薯资源中，大多数野生种（约75%）为 个花粉粒，同时统计花粉中直径特别小、无正常花 二倍体，直接与四倍体栽培品种杂交很难成功，限 粉外壳结构的小花粉占整个花粉的比例。用测微尺 制了马铃薯野生种优良基因的利用。通过马铃薯优 随机测量50个花粉粒的直径，计算平均值和标准 良双单倍体与二倍体野生种的体细胞融合，可将与 差。 马铃薯有性杂交难以成功的野生种所具有的优良基 13雌配子育性的测定 因转移到马铃薯栽培种中，从而为利用庞大的马铃 通过自花授粉和测验种杂交授粉的方法，根据 薯家族中野生种所具有的丰富优良基因开辟一条新 所结种子的情况来确定体细胞杂种的雌配子育性。 途径。 在开花期，进行人工辅助自花授粉。同时用具有良 自从1980年Butenko等首次获得第一株马 好天然结实性并能产生大量具有生活力花粉的四倍 铃薯体细胞杂种植株以来，己有不少关于马铃薯原 体栽培品种甘农薯3号作父本，进行异花授粉。统 生质体融合获得杂种植株的报道一”。但直到目前 计授粉花数形成的浆果数和种子总数，计算出每果 为止，大多数研究仍停留在融合技术及杂种鉴定等 的平均种子数。 方面，缺乏对杂种植株及其后代进一步观察和选 14体细胞杂种的回交改良 育，限制了体细胞杂种植株的实际应用。我们用电 试验于1995~2000年在甘肃省天祝县马铃薯 融合法在国内首次获得了马铃薯双单倍体品系 原种场进行。选用综合性状优良、育性较好的81- 81-15和南美二倍体栽培种Solanim phureja和二 15+S.phureja的体细胞杂种株系P-1-4和P-10-6 倍体野生种Solamm chacoense的体细胞杂种植株， 以及81-15+S.chacoense的体细胞杂种株系C-l- 对其形态学和农艺性状己作了详细的观察和田间鉴 16和C-4-2作母本，以马铃薯四倍体栽培品种甘农 定，并进行了细胞学和同工酶等方面的分析与鉴 薯3号作父本。1995年配制了杂交组合，1996年将 定，2。而且从中已选择出了一些植株生长势 获得的杂交种子按组合种植在温室育苗盘中育苗， 强、块茎产量高、高淀粉和低还原糖含量、具有较 然后移栽于大田中，初步选择综合性状较好的株系 强田间抗病虫能力的优良株系，这些优良株系是马 分组合收获块茎。1997年将收获的块茎按组合种 铃薯育种非常有价值的中间材料。但由于其商品薯 植，然后以甘农薯3号作父本进行回交。1998年按 率低、单株块茎数偏多而不能直接应用于马铃薯的 组合先在温室育苗盘中育苗，然后移栽于大田中， 生产实践4。因此，我们在对其育性研究的基础 每组合种植100株，初步选择综合性状较好的株系 上，用优良四倍体栽培品种进行了回交改良。本文 分单株收获块茎。1999年将收获的块茎按单株种 将报道对体细胞杂种进行育性研究和回交改良的结 植，按综合性状继续进行选择，分株系进行收获。 果，为进一步选育新品种提供依据和奠定基础。 2000年将上年收获的块茎按株系采用随机区组法 种植，3次重复，每个株系种2行，每行15株，株 1材料和方法 距30am,行距70am。栽培管理同一般大田生产。 11供试材料 在块茎成熟收获时观察测定薯块皮色、薯形、单株 试验材料为用电融合法获得的马铃薯普通栽培 块茎数、单株块茎重、大中薯率（≥75g)、芽眼深 种Solammn tuberosim双单倍体品系81-15(2n=2x 浅。块茎收获10d后测定淀粉和还原糖含量。用比 =24)和南美二倍体栽培种Solamm phureja(2n= 重法测定淀粉含量，费林试剂法测定还原糖含 2x=24)及二倍体野生种Solamm chacoense(2n=2x 量5。 =24)的体细胞杂种植株。杂种植株的来源见文 献2,2。 2结果与分析 12花粉活力及花粉粒直径的测定 21马铃薯种间体细胞杂种的育性 每一材料随机取至少50朵充分成熟并将要开 马铃薯原生质体融合获得的种间体细胞杂种的 放的花朵，取出花药使花粉散出。将混合后的一部 育性与其双亲相比，明显地低于二倍体亲本（表1）。 分花粉置于载玻片上，加~2滴1%醋酸洋红，混 在两个体细胞杂交组合中，3个亲本81-15 匀，盖上盖玻片，置显微镜下观察统计被染成红色 S.phureja S.chacoense的花粉育性分别为902%、 的花粉占整个花粉的比例。每一材料至少观察300 756%和508%。体细胞杂种的花粉育性明显降 C 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co..Ltd.All rights reserved
补充。在马铃薯资源中, 大多数野生种(约 75% ) 为 二倍体, 直接与四倍体栽培品种杂交很难成功, 限 制了马铃薯野生种优良基因的利用。通过马铃薯优 良双单倍体与二倍体野生种的体细胞融合, 可将与 马铃薯有性杂交难以成功的野生种所具有的优良基 因转移到马铃薯栽培种中, 从而为利用庞大的马铃 薯家族中野生种所具有的丰富优良基因开辟一条新 途径。 自从 1980 年Butenko 等[ 1 ]首次获得第一株马 铃薯体细胞杂种植株以来, 已有不少关于马铃薯原 生质体融合获得杂种植株的报道[ 1～ 11 ]。但直到目前 为止, 大多数研究仍停留在融合技术及杂种鉴定等 方面, 缺乏对杂种植株及其后代进一步观察和选 育, 限制了体细胞杂种植株的实际应用。我们用电 融合法在国内首次获得了马铃薯双单倍体品系 81- 15和南美二倍体栽培种 S olanum p hu reja 和二 倍体野生种 S olanum chacoense 的体细胞杂种植株, 对其形态学和农艺性状已作了详细的观察和田间鉴 定, 并进行了细胞学和同工酶等方面的分析与鉴 定[ 2, 12, 13 ]。而且从中已选择出了一些植株生长势 强、块茎产量高、高淀粉和低还原糖含量、具有较 强田间抗病虫能力的优良株系, 这些优良株系是马 铃薯育种非常有价值的中间材料。但由于其商品薯 率低、单株块茎数偏多而不能直接应用于马铃薯的 生产实践[ 14 ]。因此, 我们在对其育性研究的基础 上, 用优良四倍体栽培品种进行了回交改良。本文 将报道对体细胞杂种进行育性研究和回交改良的结 果, 为进一步选育新品种提供依据和奠定基础。 1 材料和方法 1. 1 供试材料 试验材料为用电融合法获得的马铃薯普通栽培 种S olanum tuberosum 双单倍体品系 81- 15 (2n= 2x = 24) 和南美二倍体栽培种 S olanum p hu reja (2n= 2x= 24) 及二倍体野生种S olanum chacoense (2n= 2x = 24) 的体细胞杂种植株。杂种植株的来源见文 献[ 2, 12 ]。 1. 2 花粉活力及花粉粒直径的测定 每一材料随机取至少 50 朵充分成熟并将要开 放的花朵, 取出花药使花粉散出。将混合后的一部 分花粉置于载玻片上, 加 1～ 2 滴 1% 醋酸洋红, 混 匀, 盖上盖玻片, 置显微镜下观察统计被染成红色 的花粉占整个花粉的比例。每一材料至少观察 300 个花粉粒, 同时统计花粉中直径特别小、无正常花 粉外壳结构的小花粉占整个花粉的比例。用测微尺 随机测量 50 个花粉粒的直径, 计算平均值和标准 差。 1. 3 雌配子育性的测定 通过自花授粉和测验种杂交授粉的方法, 根据 所结种子的情况来确定体细胞杂种的雌配子育性。 在开花期, 进行人工辅助自花授粉。同时用具有良 好天然结实性并能产生大量具有生活力花粉的四倍 体栽培品种甘农薯 3 号作父本, 进行异花授粉。统 计授粉花数形成的浆果数和种子总数, 计算出每果 的平均种子数。 1. 4 体细胞杂种的回交改良 试验于 1995～ 2000 年在甘肃省天祝县马铃薯 原种场进行。选用综合性状优良、育性较好的 81- 15+ S. p hu reja 的体细胞杂种株系 P2124 和 P21026 以及 81- 15+ S. chacoense 的体细胞杂种株系 C212 16 和C2422 作母本, 以马铃薯四倍体栽培品种甘农 薯 3 号作父本。1995 年配制了杂交组合, 1996 年将 获得的杂交种子按组合种植在温室育苗盘中育苗, 然后移栽于大田中, 初步选择综合性状较好的株系 分组合收获块茎。1997 年将收获的块茎按组合种 植, 然后以甘农薯 3 号作父本进行回交。1998 年按 组合先在温室育苗盘中育苗, 然后移栽于大田中, 每组合种植 100 株, 初步选择综合性状较好的株系 分单株收获块茎。1999 年将收获的块茎按单株种 植, 按综合性状继续进行选择, 分株系进行收获。 2000 年将上年收获的块茎按株系采用随机区组法 种植, 3 次重复, 每个株系种 2 行, 每行 15 株, 株 距 30 cm , 行距 70 cm。栽培管理同一般大田生产。 在块茎成熟收获时观察测定薯块皮色、薯形、单株 块茎数、单株块茎重、大中薯率 (≥75g)、芽眼深 浅。块茎收获 10d 后测定淀粉和还原糖含量。用比 重法测定淀粉含量, 费林试剂法测定还原糖含 量[ 15 ]。 2 结果与分析 2. 1 马铃薯种间体细胞杂种的育性 马铃薯原生质体融合获得的种间体细胞杂种的 育性与其双亲相比, 明显地低于二倍体亲本(表 1)。 在两个体细胞杂交组合中, 3 个亲本 81 - 15、 S. p hu reja、S. chacoense 的花粉育性分别为90. 2%、 75. 6% 和 50. 8%。体细胞杂种的花粉育性明显降 2 期 司怀军等: 马铃薯种间体细胞杂种的育性和遗传改良 182 © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved
282 作 物 学 报 29卷 低，所观察的15个81-15+S.phureja体细胞杂种 看出，所有体细胞杂种的花粉中花粉特别小、无正 株系花粉育性的范围为70%~428%，其中有5 常花粉外壳结构的小花粉所占的比例明显较高，最 个株系在整个生育期中由于未形成正常花蕾而没有 高的可达360%，最低的也占108%，而亲本最高 开花。所观察的10个81-15+S.chacoense体细胞 的也只有&9%。体细胞杂种花粉的直径一般大于 杂种株系花粉育性最高的只有201%，最低的为 二倍体亲本，并且从花粉粒直径的标准差还可以看 &0%,其中也有2个株系没有开花。由表1还可以 出，体细胞杂种的花粉粒整齐度差。 表1 马铃薯种间体细胞杂种的育性 Table 1 Fertility of interspecf somati hybrids of potato 花粉育性Pollen fertility 雌配子育性Female fertility 可育花粉 小花粉 花粉直径 自花授粉 甘农薯3号花粉授粉 Self pollinaton 材料 百分数 百分数 Pollen Pollinated w ith M aterial Percentage Percentage diameter Gannongshu No 3 of fertile of sall (m) 授粉花数象 种子数/果 授粉花数/棠 种子数/倮 pollen pollen 果数/种子数 S斥2 果数/种子数 $作2 (%) (%) P作) P作 亲本Parents 81-15 902 21 2005±204 15/13/1017 782 S.phureja 756 65 2212±320 28/15/840 560 S.chacoense 508 89 1956±248 22/13/610 469 81-15+S.phureja体细胞杂种 p-1-2 155 153 2522±482 35/12/64 53 40/12/304 253 P-1-4 389 108 1930±825 40/20/164 82 4820/768 384 P-2-5 256 225 2634±346 1/hh3 19 24/8210 263 P-2-12 114 306 2392±538 12/5/15 30 30/h/215 307 p-8-6 70 256 2836±547 15/10 0 35/8/147 184 p-8-14 223 340 1880±430 30/7/38 54 18/6/132 220 p-10-6 428 143 2625±640 22/10/125 125 26/12/422 352 p-10-12 362 172 2203±762 18/6/55 92 22/8/60 7.5 p-14-2 196 248 2414±502 25/419 48 30/4/36 90 p-14-6 250 282 2058±803 30/12/44 37 38/10/276 27.6 81-15+S.chacoense体细胞杂种 C-1-1 165 243 2135±483 30/8/48 60 26/8/90 113 C-1-6 201 158 2260±406 12/4/九3 33 34/九10/227 227 C-1-16 152 302 2581±672 15/3/14 47 25/8/280 350 C-1-23 98 360 2843±746 15/2/0 0 18/6/75 125 C-1-28 116 227 2085±549 24/5/13 26 12/3/25 83 C-4-2 167 142 2005±320 32/8/14 18 40/15/267 178 C-4-3 80 285 2390士622 28/57 54 38/8/194 243 C-4-6 182 304 2286±684 36/7/12 17 22/7/201 287 Note:1)P/F/S=Pollinatons/Fruits/Seeds 2)S/F:A verage seeds per fruit 体细胞杂种植株人工辅助自花授粉时，得到的 数体细胞杂种植株所结的种了数明显增多，最多的 种子数较少，而用具有较好育性的四倍体栽培品种 可达每个浆果384粒。由此可以看出，种间体细胞 甘农薯3号作父本进行杂交授粉时，得到的种子较 杂种雄配子（花粉）的育性低，但雌配子的育性却相 多。在3个亲本8l-15、S.phureja和S.chacoense 对较好。 人工辅助自花授粉时，每个浆果所结的种子数平均 22体细胞杂种的回交改良与后代选育 为782560和469。两个组合81-15+S. 用4个综合性状较好的体细胞杂种株系作母 phureja和81-15+S.chacoense自花授粉每个浆果 本，四倍体优良栽培品种甘农薯3号作父本，经过 所结的种子数变化范围为0~125和0~60。用甘 回交及回交后代的选择与鉴定，己选育出了几个农 农薯3号作父本进行杂交授粉时，两个组合的大多 艺性状优良、块茎性状表现较好、高淀粉和低还原 C 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co..Ltd.All rights reserved
低, 所观察的 15 个 81- 15+ S. p hu reja 体细胞杂种 株系花粉育性的范围为 7. 0%～ 42. 8% , 其中有 5 个株系在整个生育期中由于未形成正常花蕾而没有 开花。所观察的 10 个 81- 15+ S. chacoense 体细胞 杂种株系花粉育性最高的只有 20. 1% , 最低的为 8. 0% , 其中也有 2 个株系没有开花。由表 1 还可以 看出, 所有体细胞杂种的花粉中花粉特别小、无正 常花粉外壳结构的小花粉所占的比例明显较高, 最 高的可达 36. 0% , 最低的也占 10. 8% , 而亲本最高 的也只有 8. 9%。体细胞杂种花粉的直径一般大于 二倍体亲本, 并且从花粉粒直径的标准差还可以看 出, 体细胞杂种的花粉粒整齐度差。 表 1 马铃薯种间体细胞杂种的育性 Table 1 Fertil ity of interspecif ic somatic hybr ids of potato 材料 M aterial 花粉育性 Pollen fertility 可育花粉 百分数 Percentage of fertile pollen (% ) 小花粉 百分数 Percentage of sm all pollen (% ) 花粉直径 Pollen diam eter (Λm ) 雌配子育性 Fem ale fertility 自花授粉 Self pollination 授粉花数ö浆 果数ö种子数 PöFöS 1) 种子数ö果 SöF 2) 甘农薯 3 号花粉授粉 Pollinated w ith Gannongshu No. 3 授粉花数ö浆 果数ö种子数 PöFöS 1) 种子数ö果 SöF 2) 亲本 Parents 81215 90. 2 2. 1 20. 05±2. 04 15ö13ö1017 78. 2 - - S. phureja 75. 6 6. 5 22. 12±3. 20 28ö15ö840 56. 0 - - S. chacoense 50. 8 8. 9 19. 56±2. 48 22ö13ö610 46. 9 - - 81215+ S. phureja 体细胞杂种 P2122 15. 5 15. 3 25. 22±4. 82 35ö12ö64 5. 3 40ö12ö304 25. 3 P2124 38. 9 10. 8 19. 30±8. 25 40ö20ö164 8. 2 48ö20ö768 38. 4 P2225 25. 6 22. 5 26. 34±3. 46 11ö7ö13 1. 9 24ö8ö210 26. 3 P22212 11. 4 30. 6 23. 92±5. 38 12ö5ö15 3. 0 30ö7ö215 30. 7 P2826 7. 0 25. 6 28. 36±5. 47 15ö1ö0 0 35ö8ö147 18. 4 P28214 22. 3 34. 0 18. 80±4. 30 30ö7ö38 5. 4 18ö6ö132 22. 0 P21026 42. 8 14. 3 26. 25±6. 40 22ö10ö125 12. 5 26ö12ö422 35. 2 P210212 36. 2 17. 2 22. 03±7. 62 18ö6ö55 9. 2 22ö8ö60 7. 5 P21422 19. 6 24. 8 24. 14±5. 02 25ö4ö19 4. 8 30ö4ö36 9. 0 P21426 25. 0 28. 2 20. 58±8. 03 30ö12ö44 3. 7 38ö10ö276 27. 6 81215+ S. chacoense 体细胞杂种 C2121 16. 5 24. 3 21. 35±4. 83 30ö8ö48 6. 0 26ö8ö90 11. 3 C2126 20. 1 15. 8 22. 60±4. 06 12ö4ö13 3. 3 34ö10ö227 22. 7 C21216 15. 2 30. 2 25. 81±6. 72 15ö3ö14 4. 7 25ö8ö280 35. 0 C21223 9. 8 36. 0 28. 43±7. 46 15ö2ö0 0 18ö6ö75 12. 5 C21228 11. 6 22. 7 20. 85±5. 49 24ö5ö13 2. 6 12ö3ö25 8. 3 C2422 16. 7 14. 2 20. 05±3. 20 32ö8ö14 1. 8 40ö15ö267 17. 8 C2423 8. 0 28. 5 23. 90±6. 22 28ö5ö27 5. 4 38ö8ö194 24. 3 C2426 18. 2 30. 4 22. 86±6. 84 36ö7ö12 1. 7 22ö7ö201 28. 7 Note: 1) PöFöS= PollinationsöF ruitsöSeeds. 2) SöF: A verage seeds per fruit 体细胞杂种植株人工辅助自花授粉时, 得到的 种子数较少, 而用具有较好育性的四倍体栽培品种 甘农薯 3 号作父本进行杂交授粉时, 得到的种子较 多。在 3 个亲本 81- 15、S. p hu reja 和 S. chacoense 人工辅助自花授粉时, 每个浆果所结的种子数平均 为 78. 2、56. 0 和 46. 9。两个组合 81 - 15 + S. p hu reja 和 81- 15+ S. chacoense 自花授粉每个浆果 所结的种子数变化范围为 0～ 12. 5 和 0～ 6. 0。用甘 农薯 3 号作父本进行杂交授粉时, 两个组合的大多 数体细胞杂种植株所结的种了数明显增多, 最多的 可达每个浆果 38. 4 粒。由此可以看出, 种间体细胞 杂种雄配子(花粉) 的育性低, 但雌配子的育性却相 对较好。 2. 2 体细胞杂种的回交改良与后代选育 用 4 个综合性状较好的体细胞杂种株系作母 本, 四倍体优良栽培品种甘农薯 3 号作父本, 经过 回交及回交后代的选择与鉴定, 已选育出了几个农 艺性状优良、块茎性状表现较好、高淀粉和低还原 作 物 学 报 282 29 卷 © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved
2期 司怀军等：马铃薯种间体细胞杂种的育性和遗传改良 283 糖含量的优良株系（表2）。与融合亲本及体细胞杂 大于70%，淀粉含量为148%~178%，还原糖含 种植株相比，所选育的几个优良回交后代的单株块 量均低于Q25%,芽眼深度中等或浅，薯形为圆形 茎重明显提高，单株块茎数适度，其中株系PB22 或椭圆形。由此可以看出，经过回交选择过程，体 39的单株块茎重(1005g)比其双亲的平均值(384g) 细胞杂种的综合性状得到了明显地改良，为进一步 增加了618%。体细胞杂种回交后代的大中薯率均 地选育新品种奠定了基础。 表2 马铃薯体细胞杂种几个优良回交后代的农艺性状 Table 2 The agronom i characters of several backerossed progen ies of potato somatic hybrids 薯块皮色 薯形 单株块茎数单株块茎重大中薯率 芽眼深浅淀粉含量还原糖含量 材料 Tuber Tuber Num ber of Tuber M arketable Tuber Starch Reduced M aterial skin shape tuber/ yield(g)/ tuber perc- eye content sugar cobr plant plant entage(%) depth (%) content(%) 亲本Parent 81-15 黄色具红斑 卵圆形 52 448 552 中 152 015 S.phureja 紫色 圆形 74 320 466 中 142 032 S.chacoense 黄色 圆形 84 382 408 中 165 010 G3 白色 圆形 52 1105 842 浅 162 020 体细胞杂种Somatic hybrids p-1-4 紫色 圆形 68 736 480 中 165 011 P-10-6 黄色 圆形 58 602 524 中 164 018 C-1-16 黄色具紫斑 长椭圆形 92 724 528 中 158 008 C-4-2 黄色 长椭圆形 56 710 586 浅 178 010 回交后代Backcross progeny PB22-2(P-1-4×G)×G 浅紫 圆形 48 890 805 必 160 022 PB22-10(P-1-4×G3)×G3 浅紫 圆形 67 942 784 中 154 015 PB22-39(p-1-4×G3)×G3 黄色 圆形 55 1005 850 中 172 010 PB85-5(P-10-6XG3)×G3 黄色 圆形 13 850 703 浅 168 025 PB85-36(P-10-6×G)×G 黄色 圆形 69 932 821 中 153 018 CB03-9(C-1-16XG)×G3 白色 椭圆形 58 726 754 中 152 010 CB03-12(C-1-16XG3)XG 白色 椭圆形 53 740 740 浅 165 015 CB03-23(C-1-16×G3)×G 黄色 长椭圆形 62 923 802 浅 160 020 CB08-7(C-4-2×G3)×G3 白色 圆形 64 642 786 中 148 015 CB08-32(C-4-2XG)×G3 白色 圆形 73 836 728 中 157 019 注G代表甘农薯3号。 Note:G3 represents Gannongshu No 3 3讨论 pinnatisectmn(抗马铃薯晚疫病)1、S.bulbocastamm (抗马铃薯晚疫病和线虫)B1和S.circaeifolim(抗 马铃薯为同源四倍体无性繁殖作物。长期以 马铃薯晚疫病)]等的原生质体融合也获得了杂种 来，在马铃薯的育种实践中，常规育种技术遇到了 植株。在获得双重经济性状的研究中，M attheij等 许多难以解决的问题，包括高水平的杂合性，基因 (1992)I将马铃薯双单倍体品系与S.phureja的原 分离复杂，隐性基因表现频率较低，花粉常常出现 生质体融合，从其杂种植株中选出了块茎产量比其 不育，杂交结实较难。此外，普通栽培种基因库狭 亲本高3倍的单株。这表明，运用体细胞融合技术 窄，而具有丰富基因资源的野生种质难以与它们进 能够获得有性杂交不亲和的种间体细胞杂种，实现 行有性杂交，因而使外源基因的引进受到很大的限 有用性状向马铃薯栽培种的转移。我们通过近十年 制。近年来发展起来的体细胞融合技术为解决上述 的研究也表明体细胞融合是利用马铃薯野生种优良 问题开辟了一条新途径。在马铃薯体细胞融合的实 基因的一条切实可行的途径。 践中，Butenko等(1980))将栽培品种的原生质体 马铃薯种间体细胞杂种能否用于育种实践中， 与S.chacoense的融合获得了抗马铃薯Y病毒的杂 取决于它们的育性、与栽培品种的可交配性和有益 种植株。此外，马铃薯与二倍体野生种S.brevidense 性状的转移。我们所选用的三个融合亲本的育性都 (抗马铃薯卷叶病毒、Y病毒和晚疫病)、S. 比较高，但由于它们之间亲缘关系较远，有性杂交 C 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co..Ltd.All rights reserved
糖含量的优良株系(表 2)。与融合亲本及体细胞杂 种植株相比, 所选育的几个优良回交后代的单株块 茎重明显提高, 单株块茎数适度, 其中株系 PB222 39 的单株块茎重(1005g) 比其双亲的平均值(384g) 增加了 61. 8%。体细胞杂种回交后代的大中薯率均 大于 70% , 淀粉含量为 14. 8%～ 17. 8% , 还原糖含 量均低于 0. 25% , 芽眼深度中等或浅, 薯形为圆形 或椭圆形。由此可以看出, 经过回交选择过程, 体 细胞杂种的综合性状得到了明显地改良, 为进一步 地选育新品种奠定了基础。 表 2 马铃薯体细胞杂种几个优良回交后代的农艺性状 Table 2 The agronom ic characters of several backcrossed progen ies of potato somatic hybr ids 材料 M aterial 薯块皮色 Tuber skin color 薯形 Tuber shape 单株块茎数 N um ber of tuberö p lant 单株块茎重 Tuber yield (g)ö p lant 大中薯率 M arketable tuber perc2 entage (% ) 芽眼深浅 Tuber eye dep th 淀粉含量 Starch content (% ) 还原糖含量 Reduced sugar content(% ) 亲本 Parent 81215 黄色具红斑 卵圆形 5. 2 448 55. 2 中 15. 2 0. 15 S. phureja 紫色 圆形 7. 4 320 46. 6 中 14. 2 0. 32 S. chacoense 黄色 圆形 8. 4 382 40. 8 中 16. 5 0. 10 G3 白色 圆形 5. 2 1105 84. 2 浅 16. 2 0. 20 体细胞杂种 Som atic hybrids P2124 紫色 圆形 6. 8 736 48. 0 中 16. 5 0. 11 P21026 黄色 圆形 5. 8 602 52. 4 中 16. 4 0. 18 C21216 黄色具紫斑 长椭圆形 9. 2 724 52. 8 中 15. 8 0. 08 C2422 黄色 长椭圆形 5. 6 710 58. 6 浅 17. 8 0. 10 回交后代 Backcross p rogeny PB2222 (P2124×G3) ×G3 浅紫 圆形 4. 8 890 80. 5 中 16. 0 0. 22 PB22210 (P2124×G3) ×G3 浅紫 圆形 6. 7 942 78. 4 中 15. 4 0. 15 PB22239 (P2124×G3) ×G3 黄色 圆形 5. 5 1005 85. 0 中 17. 2 0. 10 PB8525 (P21026×G3) ×G3 黄色 圆形 7. 3 850 70. 3 浅 16. 8 0. 25 PB85236 (P21026×G3) ×G3 黄色 圆形 6. 9 932 82. 1 中 15. 3 0. 18 CB0329 (C21216×G3) ×G3 白色 椭圆形 5. 8 726 75. 4 中 15. 2 0. 10 CB03212 (C21216×G3) ×G3 白色 椭圆形 5. 3 740 74. 0 浅 16. 5 0. 15 CB03223 (C21216×G3) ×G3 黄色 长椭圆形 6. 2 923 80. 2 浅 16. 0 0. 20 CB0827 (C2422×G3) ×G3 白色 圆形 6. 4 642 78. 6 中 14. 8 0. 15 CB08232 (C2422×G3) ×G3 白色 圆形 7. 3 836 72. 8 中 15. 7 0. 19 注: G3 代表甘农薯 3 号。 Note: G3 rep resents Gannongshu No. 3. 3 讨论 马铃薯为同源四倍体无性繁殖作物。长期以 来, 在马铃薯的育种实践中, 常规育种技术遇到了 许多难以解决的问题, 包括高水平的杂合性, 基因 分离复杂, 隐性基因表现频率较低, 花粉常常出现 不育, 杂交结实较难。此外, 普通栽培种基因库狭 窄, 而具有丰富基因资源的野生种质难以与它们进 行有性杂交, 因而使外源基因的引进受到很大的限 制。近年来发展起来的体细胞融合技术为解决上述 问题开辟了一条新途径。在马铃薯体细胞融合的实 践中, Butenko 等(1980) [ 1 ]将栽培品种的原生质体 与 S. chacoense 的融合获得了抗马铃薯 Y 病毒的杂 种植株。此外, 马铃薯与二倍体野生种S. brev id ense ( 抗马铃薯卷叶病毒、Y 病毒和晚疫病) [ 4, 5 ]、S. p innatisectum (抗马铃薯晚疫病) [ 9 ]、S. bu lbocastanum (抗马铃薯晚疫病和线虫) [ 3, 6 ]和 S. circaeif olium (抗 马铃薯晚疫病) [ 8 ]等的原生质体融合也获得了杂种 植株。在获得双重经济性状的研究中, M attheij 等 (1992) [ 7 ]将马铃薯双单倍体品系与 S. p hu reja 的原 生质体融合, 从其杂种植株中选出了块茎产量比其 亲本高 3 倍的单株。这表明, 运用体细胞融合技术 能够获得有性杂交不亲和的种间体细胞杂种, 实现 有用性状向马铃薯栽培种的转移。我们通过近十年 的研究也表明体细胞融合是利用马铃薯野生种优良 基因的一条切实可行的途径[ 14 ]。 马铃薯种间体细胞杂种能否用于育种实践中, 取决于它们的育性、与栽培品种的可交配性和有益 性状的转移。我们所选用的三个融合亲本的育性都 比较高, 但由于它们之间亲缘关系较远, 有性杂交 2 期 司怀军等: 马铃薯种间体细胞杂种的育性和遗传改良 382 © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved
284 作 物 学 报 29卷 比较困难。在马铃薯常规杂交育种中，利用S tuberasim by somatic fuson P lant Sci,1985,39.7582 phureja的优良性状主要是通过S.phureja与六倍 [5]Gibson R W,JonesM G K,Fish N.Resistance to potato leaf 体野生种S.dan issum杂交，获得四倍体杂种，再将 roll virus Y in somatic hybrids between dihapbid Solame tuberosun and S.brev iens Theor Appl Genet,1988,76: 其与四倍体栽培种S.tuberosum继续杂交，或者是 113-117 将四倍体S.tuberosum与S.phureja杂交，利用S. [6]Helgeson J P,Pohman J D,Austin S,et al Somatic hybrids phureja产生的2n配子而获得可育的四倍体杂种。 betw een Solamm bulbocastann and potato:a new source of S.chacoense与二倍体种杂交获得的是很少结自交果 resistance to late blight Theor Appl Genet,1998,96:738 的二倍体杂种后代在与四倍体杂交时，常形成36 742 [7]Mattheij W M.Puite K J.Tetrapbid potato hybrids through 个染色体的杂种预先人工多倍化可提高S. protoplast fuson and analysis of their perfom ance in the fiel chacoense与四倍体S.tuberosum的杂交效果I16。我 Theor A ppl Genet,1992,83:807812 们获得的马铃薯双单倍体品系81-l5与S.phureja [8]Mattheij W M,Eijlander R,de Koning J R A,et al 和S.chacoense的种间体细胞杂种，其花粉育性比二 Interspecific hybridizaton between the cultivated potato 倍体亲本的明显降低，人工辅助自花授粉得到的种 Solammn muberosim subspecies tuberasum L.and the w ild pecies S.circaef olnm subsp circaeifolien B itter exh ibiting resistance 子数较少，而用四倍体栽培品种给杂种植株授粉时 to Phy tophthora infestans (Mont de Bary and Globodera 却得到较多的种子。这些结果表明，种间体细胞杂 pallida (Stonne)Behrens Theor A ppl Genet,1992.83: 种植株具有较高的雄性不育性，而大孢子发生过程 459-466 进行得比较正常，雌配子的育性较高。这与A ustin [9]Sidorov V A,Zubko M K,Kuchko AA.Somatic 等(1993)B1的报道基本一致。由于获得的种间体细 hybrid ization in potato:use of irrad ated protoplast of Solame 胞杂种具有较高的雌配子育性，因而可以进一步地 pinnatisechm in genetic reconstructon Theor Appl Genet, 1987,74:363368 作为杂交育种的亲本用于马铃薯的遗传改良。用四 [10]Thach N Q,FreiU,W enzel G Somatic fuson for com bining 倍体栽培品种作父本经过回交选择过程，从回交后 virus resistance in Solanim tuberosim L-Theor A ppI Genet, 代中己选择出了几个综合性状优良、块茎性状表现 1993,8863r867 较好、块茎产量和淀粉含量较高、还原糖含量较低 [11]W aara S,Pijnacker L,Ferwerda M A,et al A cytogenetic and phenotypic characterization of somatic hybrid plants 的优良株系。这表明，用回交的方法可以对体细胞 obtained after fuson of two different dihapbid cbnes of potato 杂种进行遗传改良，从而使之能够用于马铃薯品种 (Solanm tuberosum L.).Theor A ppIGenet,1992.85:470 改良的育种实践中。由此可见，体细胞融合技术与 479 常规育种技术相结合，可以克服常规育种技术的某 [l2]SiH-J(司怀军)，DaiC-X(载朝曦).Observations on the 些局限性，实现马铃薯有益基因的种间转移和基因 morphobgical and agronom ic characters of interspecific som atic 重组，为选育新品种奠定基础。 hybrid plants in Solamm.Chinese Potato J ournal(马铃薯杂 志)，1997,11(4：193196 [I3]SiH-(司怀军)，DaiC-X(戴朝曦).Cytobgical observaton References and perox idase isoenzyme analysis of interspecific som atic hybrid plants in potato Chinese Potato Joural(马铃薯杂志)，1998 [1]Butenko R,Kuchko A.A dvances in P rotop last Research,Bu 12(4):19199 dapest:A kadem iai Kiado Press,1980,293300 [14]SiH-J(司怀军)，W ang D(王蒂)，LuJ(柳俊)etal [2]DaiC-X(戴朝曦)，Sun SD(孙顺娣)，LiJH(李继红). ldentificaton and application of agronom ic characters of som atic Study on the techniques of somatic electrofuson in potata hybrids in potato In:Chen Yili(ed Potato Industry and Journal of L anhou Unversin (N atural Science Edition)[ W est Development(马铃薯产业与西部开发).Harbin:Harbin 大学学报（自然科学版）]，1994,30(spp1):8287 U niversity of Engineering Press,2001,106110 [3]Austin S,Pohman J D,Brown C R,et al Interspecific [I5]SiH-J(司怀军)，DaiC-X(戴朝曦)，Tian ZD(田振东)etal som atic hybridization betw een Solanen tuberosin L.and S. Effect of storage temperature on reducing sugar content in bulbocastammn Dun as a means of transferring nem atode potato tubers A cta A griculturae B oreali-occidentalis S inica( resistance Am PotatoJ,1993,70:485495 北农业学报)，2001,10(1)：22一24 [4]A ustin S,Baer M A,Helgeson J P.Transfer of resistance to [16]Ross H.Potato B reed ing:P roblems and Perspectives Berlin, potato leaf roll virus from Solammn brevidens into Solamm Bam burg:Parey,1986 C 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co..Ltd.All rights reserved
比较困难。在马铃薯常规杂交育种中, 利用 S. p hu reja 的优良性状主要是通过 S. p hu reja 与六倍 体野生种S. d em issum 杂交, 获得四倍体杂种, 再将 其与四倍体栽培种 S. tuberosum 继续杂交; 或者是 将四倍体 S. tuberosum 与 S. p hu reja 杂交, 利用 S. p hu reja 产生的 2n 配子而获得可育的四倍体杂种。 S. chacoense 与二倍体种杂交获得的是很少结自交果 的二倍体杂种后代; 在与四倍体杂交时, 常形成 36 个染色体的杂种; 预先人工多倍化可提高 S. chacoense 与四倍体 S. tuberosum 的杂交效果[ 16 ]。我 们获得的马铃薯双单倍体品系 81215 与 S. p hu reja 和S. chacoense 的种间体细胞杂种, 其花粉育性比二 倍体亲本的明显降低, 人工辅助自花授粉得到的种 子数较少, 而用四倍体栽培品种给杂种植株授粉时 却得到较多的种子。这些结果表明, 种间体细胞杂 种植株具有较高的雄性不育性, 而大孢子发生过程 进行得比较正常, 雌配子的育性较高。这与A ustin 等(1993) [ 3 ]的报道基本一致。由于获得的种间体细 胞杂种具有较高的雌配子育性, 因而可以进一步地 作为杂交育种的亲本用于马铃薯的遗传改良。用四 倍体栽培品种作父本经过回交选择过程, 从回交后 代中已选择出了几个综合性状优良、块茎性状表现 较好、块茎产量和淀粉含量较高、还原糖含量较低 的优良株系。这表明, 用回交的方法可以对体细胞 杂种进行遗传改良, 从而使之能够用于马铃薯品种 改良的育种实践中。由此可见, 体细胞融合技术与 常规育种技术相结合, 可以克服常规育种技术的某 些局限性, 实现马铃薯有益基因的种间转移和基因 重组, 为选育新品种奠定基础。 References [ 1 ] Butenko R, Kuchko A. A d vances in P rotop last R esearch, Bu2 dapest: A kadem iai Kiado P ress, 1980, 293～ 300 [ 2 ] Dai C2X (戴朝曦) , Sun S2D (孙顺娣) , L i J2H (李继红). Study on the techniques of som atic electrofusion in potato. J ournal of L anzhou U niversity (N atural Science Edition) [兰州 大学学报(自然科学版) ], 1994, 30 (supp l. ): 82～ 87 [ 3 ] A ustin S, Pohlm an J D, B row n C R, et al. Interspecific som atic hybridization betw een S olanum tuberosum L. and S. bulbocastanum Dun. as a m eans of transferring nem atode resistance. A m P otato J , 1993, 70: 485～ 495 [ 4 ] A ustin S, Baer M A , Helgeson J P. T ransfer of resistance to potato leaf roll virus from S olanum brev id ens into S olanum tuberosum by som atic fusion. P lant S ci, 1985, 39: 75～ 82 [ 5 ] Gibson R W , JonesM G K, F ish N. Resistance to potato leaf roll virus Y in som atic hybrids betw een dihap loid S olanum tuberosum and S. brev id ens. T heor A pp l Genet, 1988, 76: 113～ 117 [ 6 ] Helgeson J P, Pohlm an J D, A ustin S, et al. Som atic hybrids betw een S olanum bulbocastanum and potato: a new source of resistance to late blight. T heor A pp l Genet, 1998, 96: 738～ 742 [ 7 ] M attheijW M , Puite K J. Tetrap loid potato hybrids through p rotop last fusion and analysis of their perform ance in the field. T heor A pp l Genet, 1992, 83: 807～ 812 [ 8 ] M attheij W M , E ijlander R, de Koning J R A , et al. Interspecific hybridization betw een the cultivated potato S olanum tuberosum subspecies tuberosum L. and the w ild species S. circaeif olium subsp. circaeif olium B itter exhibiting resistance to P hy tophthora inf estans (M ont. ) de Bary and G lobod era pallid a ( Stonne ) Behrens. T heor A pp l Genet, 1992, 83: 459～ 466 [ 9 ] Sidorov V A , Zubko M K, Kuchko A A. Som atic hybridization in potato: use of irradiated p rotop last of S olanum p innatisectum in genetic reconstruction. T heor A pp l Genet, 1987, 74: 363～ 368 [ 10 ] Thach N Q , F rei U , W enzel G. Som atic fusion for com bining virus resistance in S olanum tuberosum L. T heor A pp l Genet, 1993, 85: 863～ 867 [ 11 ] W aara S, P ijnacker L , Ferw erda M A , et al. A cytogenetic and phenotyp ic characterization of som atic hybrid p lants obtained after fusion of two different dihap loid clones of potato (S olanum tuberosum L. ). T heor A pp l Genet, 1992, 85: 470～ 479 [ 12 ] Si H2J (司怀军) , Dai C2X (戴朝曦). O bservations on the morphological and agronom ic characters of interspecific som atic hybrid p lants in S olanum. Chinese P otato J ournal (马铃薯杂 志) , 1997, 11 (4): 193～ 196 [ 13 ] Si H2J (司怀军) , Dai C2X (戴朝曦). Cytological observation and peroxidase isoenzym e analysis of interspecific som atic hybrid p lants in potato. Chinese P otato J ournal (马铃薯杂志) , 1998, 12 (4): 195～ 199 [ 14 ] Si H2J (司怀军) , W ang D ( 王 蒂) , L iu J ( 柳 俊) et al. Identification and app lication of agronom ic characters of som atic hybrids in potato. In: Chen Yili ( ed. ) P otato Ind ustry and W est D evelopm ent (马铃薯产业与西部开发). Harbin: Harbin U niversity of Engineering P ress, 2001, 106～ 110 [ 15 ] Si H2J (司怀军) , Dai C2X (戴朝曦) , T ian Z2D (田振东) et al. Effect of storage temperature on reducing sugar content in potato tubers. A cta A g riculturae B oreali2occid entalis S inica (西 北农业学报) , 2001, 10 (1): 22～ 24 [ 16 ] Ross H. P otato B reed ing: P roblem s and P erspectives. Berlin, Bam burg: Parey, 1986 作 物 学 报 482 29 卷 © 1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved