第三章基因工程的载体 一、 概述 二、质粒载体 三、表达载体
第三章 基因工程的载体 一、概述 二、质粒载体 三、表达载体
一、 概述 ·1概念 ·载体：携带外源目的基因或DNA片段进入宿主细 胞进行复制和表达的工具称之为载体，化学本质 是DNA分子。 克隆载体：主要用来克隆和扩增DNA片段，能带 动外源基因在宿主细胞中复制扩增。 。 表达载体：除具有克隆载体的基本元件外，还具 有转录、翻译所必需的DNA元件，使外源基因在 宿主细胞中有效表达
一、概述 • 1 概念 • 载体：携带外源目的基因或DNA片段进入宿主细 胞进行复制和表达的工具称之为载体，化学本质 是DNA分子。 • 克隆载体：主要用来克隆和扩增DNA片段，能带 动外源基因在宿主细胞中复制扩增。 • 表达载体：除具有克隆载体的基本元件外，还具 有转录、翻译所必需的DNA元件，使外源基因在 宿主细胞中有效表达
多克隆位点(multiple cloning site) L MCS 复制起始点 ori PUC 遗传标记
一、概述 ·2功能 ·运送外源基因高效转入受体细胞； ·为外源基因提供复制能力和整合能力； ·为外源基因的扩增或表达提供必要的条件
一、概述 • 2 功能 • 运送外源基因高效转入受体细胞； • 为外源基因提供复制能力和整合能力； • 为外源基因的扩增或表达提供必要的条件
一、概述 ·3分类 按来源分：质粒载体、噬菌体载体、病毒载体 、酵母人工染色体载体 ·按功能和用途分：克隆载体和表达载体 ·按性质分：融合型载体和非融合型载体 ·按受体细胞分：原核细胞载体和真核细胞载体
一、概述 • 3 分类 • 按来源分：质粒载体、噬菌体载体、病毒载体 、酵母人工染色体载体 • 按功能和用途分：克隆载体和表达载体 • 按性质分：融合型载体和非融合型载体 • 按受体细胞分：原核细胞载体和真核细胞载体
一、概述 。4特性 载体能在宿主细胞内进行独立稳定的DNA自我 复制；或整合到染色体DNA上，随着染色体 DNA的复制而同步复制；在载体中插入外源基 因后，仍然保持稳定的复制状态和遗传特性； ·载体容易从宿主细胞中分离纯化； 。1 有限制性酶切的克隆位点，以便于目的基因的 组装，即多克隆位点；
一、概述 • 4 特性 • 载体能在宿主细胞内进行独立稳定的DNA自我 复制；或整合到染色体DNA上，随着染色体 DNA的复制而同步复制；在载体中插入外源基 因后，仍然保持稳定的复制状态和遗传特性； • 载体容易从宿主细胞中分离纯化； • 有限制性酶切的克隆位点，以便于目的基因的 组装，即多克隆位点；
一 、概述 。4特性 ● 能赋予细胞特殊的遗传标记，以便于对导入的重组 体进行鉴定和检测 ● 载体在细胞内的拷贝数高，方便外源基因在细胞内 大量扩增 载体在细胞内稳定性高，保证重组体稳定传代而不 易丢失； 用于表达目的基因的载体还应具有启动子、增强子 和L了英
一、概述 • 4 特性 • 能赋予细胞特殊的遗传标记，以便于对导入的重组 体进行鉴定和检测； • 载体在细胞内的拷贝数高，方便外源基因在细胞内 大量扩增； • 载体在细胞内稳定性高，保证重组体稳定传代而不 易丢失； • 用于表达目的基因的载体还应具有启动子、增强子 和终止子等；
二、质粒载体 1、质粒的基本特性 2、常用的质粒载体 3、质粒DNA的提取 4、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
二、质粒载体 1、质粒的基本特性 2、常用的质粒载体 3、质粒DNA的提取 4、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
二、质粒载体 质粒载体是以质粒DNA分子为基础构建而 成的基因载体，主要用于原核生物和真核生物 的基因转移及建立基因组文库和cDNA文库
二、质粒载体 质粒载体是以质粒DNA分子为基础构建而 成的基因载体，主要用于原核生物和真核生物 的基因转移及建立基因组文库和cDNA文库
1、质粒的基本特性 (1)概念 ① 染色体外的遗传因子，能进行自我复制（但 依赖于宿主编码的酶和蛋白质)； ② 大多数为双链，闭环DNA分子，少数为线形； ③ 大小为1kb-200kb,也有更大的
1、质粒的基本特性 （1）概念 ① 染色体外的遗传因子，能进行自我复制（但 依赖于宿主编码的酶和蛋白质）； ② 大多数为双链，闭环DNA分子，少数为线形； ③ 大小为1 kb-200 kb，也有更大的