南京发业大学动物医学院College ofVeterinary Medicine,Nanjing Agricultural University兽医微生物学实验马家乐jialema@njau.edu.cn教学楼OIE实验室B421
兽医微生物学实验 马家乐 jialema@njau.edu.cn 教学楼OIE实验室 B421
南京发业大学动物医学院College ofVeterinary Medicine,Nanjing Agricultural University实验二细菌抹片的制备及染色
实验二 ◆ 细菌抹片的制备及染色
南京農业大学动物医学院College ofVeterinary Medicine,Nanjing Agricultural University实验目的1、掌握细菌抹片的制备方法2、掌握几种常用的染色方法及无菌操作技术3、巩固显微镜的使用，并了解细菌的染色及形态特性
1、掌握细菌抹片的制备方法 2、掌握几种常用的染色方法及无菌操作技术 3、巩固显微镜的使用，并了解细菌的染色及形态特性 实验目的
南京農业大学。动物医学院College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University实验材料1、大肠杆菌、葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；2、革兰染色液；3、载玻片、接种棒、酒精灯等
1、大肠杆菌、葡萄球菌、枯草芽孢杆菌； 2、革兰染色液； 3、载玻片、接种棒、酒精灯等。 实验材料
南京農业大学·动物医学院College ofVeterinary Medicine,NanjingAgricultural University细菌抹片的制备取干净玻片抹片干燥固定染色干燥镜检
➢ 细菌抹片的制备 ◼ 取干净玻片 ◼ 抹片 ◼ 干燥 ◼ 固定 ◼ 染色 ◼ 干燥镜检
南京農业大学·动物医学院College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University+1、玻片的处理旧玻片有油，用95%酒精擦洗，然后在酒精灯上灼烧待其自然冷却后可用
1、玻片的处理 旧玻片有油，用95%酒精擦洗，然后在酒精灯上灼烧； 待其自然冷却后可用
南京農大学动物医学院ry Medicine,Nanjing Agricultural UniversityollegeofVeteri+2、细菌抹片的制备根据所用材料不同，抹片的方法也有差异。■固体培养物用经酒精灯火焰烧过的接种环，蘸取生理盐水1-2环于清洁无油脂的载玻片中央，再勾取细菌的固体培养物少许混于生理盐水中，涂抹成直径为1-1.5cm大小的均匀的抹片
2、细菌抹片的制备 根据所用材料不同，抹片的方法也有差异。 ◼ 固体培养物 用经酒精灯火焰烧过的接种环，蘸取生理盐水1-2 环于清洁无油脂的载玻片中央，再勾取细菌的固体培 养物少许混于生理盐水中，涂抹成直径为1-1.5cm大小 的均匀的抹片
南京農业大学·动物医学院Collegeof VeterinaryMedicine,NanjingAgriculturalUniversity■液体培养物可直接用灭菌接种环勾取细菌培养物1-2环，涂抹于玻片上即可。但要注意将管底沉淀物摇匀，以免影响涂片效果。■组织涂片用灭菌的剪刀、镊子取被检组织一小块，以其断面在玻片上压印或涂抹成适当大小的薄片。如为脓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上
◼ 液体培养物 可直接用灭菌接种环勾取细菌培养物1-2环，涂抹于 玻片上即可。但要注意将管底沉淀物摇匀，以免影响涂 片效果。 ◼ 组织涂片 用灭菌的剪刀、镊子取被检组织一小块，以其断面 在玻片上压印或涂抹成适当大小的薄片。如为脓汁、血 液、乳汁等可直接涂抹于玻片上
南京農业大学动物医学院cine,NanjingAgricultural UniversityollegeofVeterirMe+3、固定■目的:1）除去抹片上的水分，使菌体蛋白附着在载玻片上，以防染色过程中被水冲掉，2）使抹片易于着色，变性的蛋白质着色力强。3）能杀死抹片中的部分微生物
3、固定 ◼ 目的： 1) 除去抹片上的水分，使菌体蛋白附着在载玻 片上，以防染色过程中被水冲掉。 2) 使抹片易于着色，变性的蛋白质着色力强。 3) 能杀死抹片中的部分微生物
南京发业大学·动物医学院Collegeof Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University■方法：1）火焰固定将已干燥的抹片菌膜向上，以钟摆速度在酒精灯火焰上通过数次（以不烫手背为宜）。2）化学固定加数滴甲醇于玻片上，固定2-3分钟，自然干燥
◼ 方法： 1) 火焰固定 将已干燥的抹片菌膜向上，以钟 摆速度在酒精灯火焰上通过数次（以不烫手背 为宜）。 2) 化学固定 加数滴甲醇于玻片上，固定2-3分 钟，自然干燥