南京发业火学动物生物化学实验实验三睡液淀粉酶活性的观察动物医学院动物生化教研室
1 实验三 唾液淀粉酶活性的观察 动物医学院动物生化教研室 动物生物化学实验
、实验目的掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性12了解各种因素（如温度、pH及一些化学物质）对酶活性的影响3睡液淀粉酶的制备和活性观察2
2 ① 掌握酶的催化活性，酶的高效性和特异性 ② 了解各种因素（如温度、pH及一些化学物质）对酶活性 的影响 ③ 唾液淀粉酶的制备和活性观察 一、实验目的
实验原理二、酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化剂。酶活性：酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示酶活性的测定方法：1）定底物2）定时间影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH，激活剂和抑制剂等都会影响酶的催化活性
3 二、实验原理 酶是生物体内具有催化功能的生物大分子，也叫生物催化剂。 酶活性: 酶的催化能力,用催化化学反应的速度表示 酶活性的测定方法：1）定底物 2）定时间 影响酶活性的因素是多方面的，如温度、pH, 激活剂和抑制剂 等都会影响 酶的催化活性
实验原理pH值的影响：能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适pH。温度的影响：在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高的温度即酶的最适温度。激活剂和抑制剂的影响：能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂
二、实验原理 pH值的影响: 能使酶活性达到最高时的pH值，称为该酶的最适 pH。 温度的影响: 在一定温度范围内，随着温度的升高，酶促反应速 度增加，直至达到最大值。在一定条件下，能使酶活性达到最高 的温度即酶的最适温度。 激活剂和抑制剂的影响: 能增高酶活性的物质即称为酶的激活剂， 能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的抑制剂。 4
二、实验原理本实验以淀粉为底物，淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。淀粉酶淀粉酶淀粉+糊精麦芽糖+少量葡萄糖加碘后；（兰色）（紫红色、暗褐色或红色等）（棕黄色，碘本身颜色）CH,OHCH,OHCH,OH000FHOHOHOHHOHOHHOH
本实验以淀粉为底物, 淀粉酶作用下得到各种糊精乃至麦芽糖、 少量葡萄糖等水解产物。用碘液检查酶促淀粉的水解程度，来说 明温度、pH及化学物质对酶活力的影响。 淀粉酶 淀粉酶 淀粉——————→糊精—————→ 麦芽糖+少量葡萄糖 加碘后；（兰色） （紫红色、暗褐色或红色等） （棕黄色，碘本身颜色） 5 二、实验原理
实验原理影响酶活性的因素1）温度2）pH3）激活剂和抑制剂酶的特性（专一性）还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理OHCHiz0 + 2Cu(0H)2C,HuO5.COOH + Cu2O↓ +2H,0加热CH,OHCH,OHCH,OHHOCH0-LKVHHHOHOHOHH1CH,OHOHHOHOHHHOHHOHa-D-葡萄糖β-D-果糖燕糖分子结构（葡萄糖α,β-1,2-果糖苷）麦芽糖分子结构（葡萄糖α-14-葡萄糖苷）
影响酶活性的因素 1）温度 2）pH 3）激活剂和抑制剂 酶的特性（专一性） 还原糖和斑氏（Benedict）试剂的反应原理 C6H12O6 + 2Cu(OH)2 C5H11O5 .COOH + Cu2O + 2H2O OH- 加热 实验原理 1 H O OH H H H OH OH CH2OH H CH2OH H H 2 HO O HOCH2 H O 1 H O OH H H H OH OH CH2OH H O 4 H O H OH H H OH OH CH2OH H α-D-葡萄糖 β-D-果糖 蔗糖分子结构（葡萄糖α,β-1,2-果糖苷） 麦芽糖分子结构（葡萄糖α-1,4-葡萄糖苷） OH
三、试剂及器材1.试剂：（1）0.5%（w/v）淀粉溶液（2）稀碘溶液：（3）不同pH缓冲液（pH5.0、6.8、8.0)·（4）1%（w/v） NaCl溶液·（5）1%（w/v）CuSO4溶液2.器材·比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管
三、试剂及器材 1. 试剂 • （1）0.5% (w/v) 淀粉溶液 • （2）稀碘溶液 • （3）不同pH缓冲液 (pH5.0 、6.8、8.0) • （4）1% (w/v) NaCl溶液 • （5）1% (w/v) CuSO4溶液 2. 器材 • 比色板、水浴锅、刻度吸管及滴管 7
四、操作步骤1.温度对酶活力的影响取3支试管，编号后按下表操作单位：mL123试管编号5550.5%淀粉0.50.50.5PH6.8缓冲液反应条件置冰水浴中置37℃水浴中置沸水浴中111稀释唾液
四、操作步骤 1. 温度对酶活力的影响 取3支试管，编号后按下表操作: 8 试管编号 1 2 3 0.5% 淀粉 5 5 5 pH 6.8 缓冲液 0.5 0.5 0.5 反应条件 置冰水浴中 置37℃水浴中 置沸水浴中 稀释唾液 1 1 1 单位：mL
在于净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，说明温度对酶活性的影响
在干净的比色板上，于各孔穴中分别滴加2滴碘液。 每隔1min从第2支试管中取反应液1滴，与比色板孔穴中 的碘液混合，观察颜色的变化。 待第2支试管中的反应液与比色板孔穴中的碘液混合后颜 色呈棕色时，取出试管，并将在沸水浴中处理的试管用 冷水冷却，然后向各试管中滴加碘液1-3滴。 摇匀后观察并记录各管颜色，比较各管中淀粉水解的程 度，说明温度对酶活性的影响。 9
四、操作步骤2.pH值对酶活力的影响取3支试管，按下表编号后进行实验单位：mL试剂1232220.5%淀粉1pH5.0缓冲液1pH6.8缓冲液1pH8.0缓冲液11稀释唾液110
2. pH值对酶活力的影响 取3支试管，按下表编号后进行实验。 10 四、操作步骤 单位：mL 试剂 1 2 3 0.5% 淀粉 2 2 2 pH 5.0 缓冲液 1 — — pH 6.8 缓冲液 — 1 — pH 8.0 缓冲液 — — 1 稀释唾液 1 1 1