生物技术综合实验教学大纲 生命科学学院 系 实验室（中心） 大纲制定人：朱新霞 课程名称生物技术综合实验英文名称 课程编码S213101 实验总学时 48 开设实验项目数 4 课程性质 必修 《生物技术综合实验讲 实验教材或指导书 义》（自编教材） 实验考核方式 考试 适用专业 生物技术 开出实验项目 序号 实验项目名称 实验类型学时 1生物技术实验课简介 基本操作训练4 生物技术实验室基本知识 生物技术实验仪器基本原理和使用方法 相关溶液的配制 2质粒DNA的提取和酶切电泳鉴定 综合性实验 10 质粒DNM的小量制备 质粒DNA电泳鉴定 质粒DA的酶切及鉴定 3目的基因的获得和重组载体的构建 综合性实验 10 PCR扩增制备目的基因 目的基因的检测和回收 目的基因片段与载体连接 4感受态细胞的制备和转化及筛选鉴定 综合性实验 14 感受态细胞的制备 质粒DNA的转化 转化克隆的筛选和鉴定（双酶切法和菌落PCR法） 5 目的基因在原核细胞中的表达和检测 综合性实验 6 GP蛋白的诱导表达 6 观察分析结果，总结实验
生物技术综合实验教学大纲 生命科学学院 系 实验室（中心） 大纲制定人： 朱新霞 课程名称 生物技术综合实验 英文名称 Biotechnology experiment 课程编码 S213101 实验总学时 48 开设实验项目数 4 课程性质 必修 实验教材或指导书 《生物技术综合实验讲 义》（自编教材） 实验考核方式 考试 适用专业 生物技术 开出实验项目 序号 实验项目名称 实验类型 学时 1 生物技术实验课简介 基本操作训练 4 生物技术实验室基本知识 生物技术实验仪器基本原理和使用方法 相关溶液的配制 2 质粒 DNA 的提取和酶切电泳鉴定 综合性实验 10 质粒 DNA 的小量制备 质粒 DNA 电泳鉴定 质粒 DNA 的酶切及鉴定 3 目的基因的获得和重组载体的构建 综合性实验 10 PCR 扩增制备目的基因 目的基因的检测和回收 目的基因片段与载体连接 4 感受态细胞的制备和转化及筛选鉴定 综合性实验 14 感受态细胞的制备 质粒 DNA 的转化 转化克隆的筛选和鉴定(双酶切法和菌落 PCR 法) 5 目的基因在原核细胞中的表达和检测 综合性实验 6 GFP 蛋白的诱导表达 6 观察分析结果，总结实验 4
生物技术实验课简介实验 实验类型 基本操作训练 学时 4 开出时间第六学期 计划每组 2人 人数 现有每组人数2人 实验目的： 1、了解生物技术实验室基本知识： 2、学习生物技术实验仪器基本原理和使用方法： 3、学习相关溶液的配制。 实验内容： 1、生物技术综合实验课程简介： 2、生物技术实验室基本知识和注意事项： 3、生物技术实验仪器基本原理和使用方法： 4、质粒提取、感受体细胞制备和转化、琼脂糖凝胶电泳等实验相关溶液和培养基的配制。 实验操作要点及注意事项： 1、严格按仪器说明书使用相关仪器： 2、试剂称量要准确、配制要符合相关规范要求 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 1 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 2 超净工作台 4 3 离心机 12000转/分 4 紫外可见分光光度计 2 5 电泳仪 DW-II 2 6 水平电泳槽 DW-II 4 7 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 8 制冰机 1 9 恒温摇床 10 电子天平 11 高压锅 1 12 PCR扩增仪 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
生物技术实验课简介 实 验 实验类型 基本操作训练 学时 4 开出时间 第六学期 计划每组 人数 2 人 现有每组人数 2 人 实验目的： 1、了解生物技术实验室基本知识； 2、学习生物技术实验仪器基本原理和使用方法； 3、学习相关溶液的配制。 实验内容： 1、生物技术综合实验课程简介； 2、生物技术实验室基本知识和注意事项； 3、生物技术实验仪器基本原理和使用方法； 4、质粒提取、感受体细胞制备和转化、琼脂糖凝胶电泳等实验相关溶液和培养基的配制。 实验操作要点及注意事项： 1、严格按仪器说明书使用相关仪器； 2、试剂称量要准确、配制要符合相关规范要求。 主要仪器设备 序 号 主要设备名称 规格型号 数量 1 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 2 超净工作台 4 3 离心机 12000 转/分 4 4 紫外可见分光光度计 2 5 电泳仪 DW-Ⅱ 2 6 水平电泳槽 DW-Ⅱ 4 7 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 8 制冰机 1 9 恒温摇床 1 10 电子天平 11 高压锅 1 12 PCR 扩增仪 1 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
质粒DNM的提取和酶切电泳鉴定_实验 实验类型综合性实验学时 10开出时间第六学期 计划每组 人数 2人 现有每组人数2人 实验目的： L、学习采用碱裂解法提取和纯化质粒DNA的方法： 2、掌握一种最常用的分离，鉴定，纯化DNA片段的比较方便，省时的技术：琼脂糖凝胶电泳 的基本原理和操作方法： 3、学习使用限制型内切酶进行DNA酶切的原理和方法 实验内容： 1、细菌的生长和质粒的扩增：菌体的收集裂解：质粒DNA的分离：质粒DNA的纯化： 2、质粒的琼脂糖凝胶电泳检测 3、质粒DNA的双酶切及鉴定。 实验操作要点及注意事项 1、溶液二现用现配：加入溶液三后，注意控制复性时间：吸取上清液时，不要带入蛋白沉淀 2、若所提取质粒DNA不能被限制性内切酶切割，可通过酚/氯仿再次抽提，以清除杂质来解 决问题： 3、进行酶切消化时，将除酶以外的所有反应成分加入后混匀，再加入内切酶，用完后立即将 放回-20C冰箱。 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 1 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 2 超净工作台 4 3 离心机 12000转/分 4 4 紫外可见分光光度计 2 电泳仪 DW-II 2 6 水平电泳槽 DW-II 4 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 8 制冰机 1 9恒温摇床 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
质粒 DNA 的提取和酶切电泳鉴定 实 验 实验类型 综合性实验 学时 10 开出时间 第六学期 计划每组 人数 2 人 现有每组人数 2 人 实验目的： 1、学习采用碱裂解法提取和纯化质粒 DNA 的方法； 2、掌握一种最常用的分离，鉴定，纯化 DNA 片段的比较方便，省时的技术：琼脂糖凝胶电泳 的基本原理和操作方法； 3、学习使用限制型内切酶进行 DNA 酶切的原理和方法。 实验内容： 1、细菌的生长和质粒的扩增；菌体的收集裂解；质粒 DNA 的分离；质粒 DNA 的纯化； 2、质粒的琼脂糖凝胶电泳检测； 3、质粒 DNA 的双酶切及鉴定。 实验操作要点及注意事项： 1、溶液二现用现配；加入溶液三后，注意控制复性时间；吸取上清液时，不要带入蛋白沉淀； 2、若所提取质粒 DNA 不能被限制性内切酶切割，可通过酚/氯仿再次抽提，以清除杂质来解 决问题； 3、进行酶切消化时，将除酶以外的所有反应成分加入后混匀，再加入内切酶，用完后立即将酶 放回-20℃冰箱。 主要仪器设备 序 号 主要设备名称 规格型号 数量 1 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 2 超净工作台 4 3 离心机 12000 转/分 4 4 紫外可见分光光度计 2 5 电泳仪 DW-Ⅱ 2 6 水平电泳槽 DW-Ⅱ 4 7 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 8 制冰机 1 9 恒温摇床 1 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
且的基因的获得和重组载体的构建实验 实验类型 综合性实验 学时 10 开出时间 第六学期 计划每组 2人 现有每组人数2人 人数 实验目的： 1、掌握聚合酶链式反应(PCR)快速特异扩增任何己知目的基因或DNA片段的原理和方法： 2、学习掌握DNA电泳片段回收和纯化的原理和技术： 3、学习掌握根据载体的遗传特征构建重组子，如α-互补、抗生素基因等。 实验内容： 1、PCR扩增目的基因： 2、PCR产物的电泳检测： 3、DNA回收试剂盒对目的基因进行回收和纯化： 4、构建重组子。 实验操作要点及注意事项： I、PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行 2、要获得目的基因的TA克隆，PCR产物的特异性要好： 3、在PCR产物回收、纯化过程中要使用无DNA污染的新刀片，防止外源DNA的污染：紫外 灯下切下待回收DNA的凝胶时，动作要快，防止DNA的降解： 4、连接反应要注意温度。 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 1 高压灭菌锅 25L 1 2 涡旋器 小型 4 3 电泳仪 DW-Ⅱ 4 水平电泳槽 DW-Ⅱ 4 5 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 6 PCR扩增仪 96孔 2 7 超净工作台 4 8 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 9 移液枪 101000u1 10 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
目的基因的获得和重组载体的构建 实 验 实验类型 综合性实验 学时 10 开出时间 第六学期 计划每组 人数 2 人 现有每组人数 2 人 实验目的： 1、掌握聚合酶链式反应（PCR）快速特异扩增任何已知目的基因或 DNA 片段的原理和方法； 2、学习掌握 DNA 电泳片段回收和纯化的原理和技术； 3、学习掌握根据载体的遗传特征构建重组子，如α-互补、抗生素基因等。 实验内容： 1、PCR 扩增目的基因； 2、PCR 产物的电泳检测； 3、DNA 回收试剂盒对目的基因进行回收和纯化； 4、构建重组子。 实验操作要点及注意事项： 1、PCR 反应应该在一个没有 DNA 污染的干净环境中进行； 2、要获得目的基因的 TA 克隆，PCR 产物的特异性要好； 3、在 PCR 产物回收、纯化过程中要使用无 DNA 污染的新刀片，防止外源 DNA 的污染；紫外 灯下切下待回收 DNA 的凝胶时，动作要快，防止 DNA 的降解； 4、连接反应要注意温度。 主要仪器设备 序 号 主要设备名称 规格型号 数量 1 高压灭菌锅 25L 1 2 涡旋器 小型 4 3 电泳仪 DW-Ⅱ 2 4 水平电泳槽 DW-Ⅱ 4 5 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 6 PCR 扩增仪 96 孔 2 7 超净工作台 4 8 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 9 移液枪 10～1000µl 10 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化及筛选鉴定实验 实验类型 综合性实验 学时 14 开出时间 第六学期 计划每组 2人 人数 现有每组人数2人 实验目的： 1、了解和掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法的原理和操作要点： 2、 学习和掌握质粒DA转化大肠杆菌细胞的原理和方法： 3、了解和掌握菌落PCR法鉴定重组质粒DNA的基本原理和操作步罪，以及双酶切法鉴定重组 质粒DNA的基本原理和操作步骤。 实验内容： 1、感受态细胞的制备 2、转化和平板培养： 3、重组质粒DNA的鉴定： (I)、南落PCR鉴定重组子：①南落培养：②PCR反应：③琼脂糖凝胶电泳检测。 (2)酶切鉴定重组子：①重组体质粒DNA的分离：②重组子的酶切鉴定：③琼脂糖凝胶电泳 拾。 实验操作要点及注意事项： 1、实验中凡涉及溶液的移取、分装等需散开实验器皿的操作，均应在无菌超净工作台中进行 2、受体菌生长情况的Aw值和细胞数之间的关系随菌株的不同而不同，要注意不同菌株的合适 A6m值是不同的： 3、白色菌落中重组质粒内插入片段是否是目的片段需通过鉴定。 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 1 恒温摇床 2 2 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 超净工作台 4 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 5 722型分光光度计 S22-Dc型 4 6 低温离心机 4000转/分 4 7 移液枪 5>10001 10 8 PCR扩增仪 96孔 2 9电泳仪 DW-Ⅱ 2 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化及筛选鉴定 实 验 实验类型 综合性实验 学时 14 开出时间 第六学期 计划每组 人数 2 人 现有每组人数 2 人 实验目的： 1、了解和掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法的原理和操作要点； 2、学习和掌握质粒 DNA 转化大肠杆菌细胞的原理和方法； 3、了解和掌握菌落 PCR 法鉴定重组质粒 DNA 的基本原理和操作步骤,以及双酶切法鉴定重组 质粒 DNA 的基本原理和操作步骤。 实验内容： 1、感受态细胞的制备； 2、转化和平板培养； 3、重组质粒 DNA 的鉴定： (1)、菌落 PCR 鉴定重组子：①菌落培养；②PCR 反应；③琼脂糖凝胶电泳检测。 (2)、酶切鉴定重组子：①重组体质粒 DNA 的分离；②重组子的酶切鉴定；③琼脂糖凝胶电泳 检测。 实验操作要点及注意事项： 1、实验中凡涉及溶液的移取、分装等需敞开实验器皿的操作，均应在无菌超净工作台中进行； 2、受体菌生长情况的 A600值和细胞数之间的关系随菌株的不同而不同，要注意不同菌株的合适 A600值是不同的； 3、白色菌落中重组质粒内插入片段是否是目的片段需通过鉴定。 主要仪器设备 序 号 主要设备名称 规格型号 数量 1 恒温摇床 2 2 电热恒温培养箱 20-100℃ 2 3 超净工作台 4 4 凝胶成像仪或紫外透射仪 2 5 722 型分光光度计 S22-pc 型 4 6 低温离心机 4000 转/分 4 7 移液枪 5～1000µl 10 8 PCR 扩增仪 96 孔 2 9 电泳仪 DW-Ⅱ 2 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
GFP蛋白的诱导表达实验 实验类型 综合性实验 学时 6 开出时间 第六学期 计划每组 人数 2人 现有每组人数 2人 实验目的： 【、掌握用PTG诱导GFP基因表达的基本原理： 2、了解用PTG诱导GFP基因表达的基本操作步骤 实验内容： 1、取阳性克隆质粒DNA转化BL21培养： 2、挑取单菌落，振荡培养过夜稀释培养至生长期 3、加入PTG诱导： 4、观察蛋白表达。 实验操作要点及注意事项： 1、避免外来污染： 2、注意观察菌体的生长情况。 主要仪器设备 序号 主要设备名称 规格型号 数量 1 冷冻高速离心机 DG-16 2 电热恒温水浴锅 37-100℃ 4 3 紫外多功能检测仪 2 恒温摇床 2 5 无菌操作超净工作台 4 6 722型分光光度计 S22-pc型 4 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验
GFP 蛋白的诱导表达 实 验 实验类型 综合性实验 学时 6 开出时间 第六学期 计划每组 人数 2 人 现有每组人数 2 人 实验目的： 1、掌握用 IPTG 诱导 GFP 基因表达的基本原理； 2、了解用 IPTG 诱导 GFP 基因表达的基本操作步骤。 实验内容： 1、 取阳性克隆质粒 DNA 转化 BL21 培养； 2、 挑取单菌落，振荡培养过夜;稀释培养至生长期； 3、 加入 IPTG 诱导； 4、 观察蛋白表达。 实验操作要点及注意事项： 1、避免外来污染； 2、注意观察菌体的生长情况。 主要仪器设备 序 号 主要设备名称 规格型号 数量 1 冷冻高速离心机 DG-16 2 2 电热恒温水浴锅 37-100℃ 4 3 紫外多功能检测仪 2 4 恒温摇床 2 5 无菌操作超净工作台 4 6 722 型分光光度计 S22-pc 型 4 注：实验类型包括：基本操作训练、验证性实验、综合性实验、设计性实验、开放性实验、其 它类型实验