医本周爱儒 第六版 第二十二章 常用分子生物学技术的原理 及其应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application
医本周爱儒 第六版 第二十二章 常用分子生物学技术的原理 及其应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application
第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization and Blotting Technology
第一节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization and Blotting Technology
一. 分子杂交(nucleic acid hybridization) 不同来源的单链核酸经退火形成双链结构的过程。 DNA DNA DNA RNA 基础：核酸的变性与退火 二. 核酸探针(probe):标记的DNA或RNA 一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或 全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的 核酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在
一. 分子杂交(nucleic acid hybridization) 不同来源的单链核酸经退火形成双链结构的过程。 DNA DNA DNA RNA 基础：核酸的变性与退火 二. 核酸探针(probe):标记的DNA或RNA 一小段用同位素、生物素或荧光染料标记其末端或 全链的已知序列的多聚核苷酸，与固定在NC膜上的 核酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在
三.印迹技术 将在凝胶中分离的生物大分子转移(印迹)或直 接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。 链接 DNA印迹技术(Southern bloting) RNA印迹技术(Northern bloting) 蛋白质印迹技术(Western bloting) 链接 其它: 斑点印迹、原位杂交 、DNA chip。 杂交及印迹技术的意义: 亲缘关系分析, 遗传病分析等
三.印迹技术 将在凝胶中分离的生物大分子转移(印迹)或直 接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。 链接 DNA印迹技术(Southern bloting) RNA印迹技术(Northern bloting) 蛋白质印迹技术(Western bloting) 链接 其它: 斑点印迹、原位杂交 、DNA chip。 杂交及印迹技术的意义: 亲缘关系分析, 遗传病分析等
第二节 PCR技术的原理与应用 Polymerase chain reaction
第二节 PCR技术的原理与应用 Polymerase chain reaction
一. 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR) ➢ 全称为聚合酶链反应,是一种对特定的DNA 片段在体外进行快速扩增的技术,可以将微量 目的DNA片段扩增一百万倍以上。 ➢ Taq DNA聚合酶
一. 聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR) ➢ 全称为聚合酶链反应,是一种对特定的DNA 片段在体外进行快速扩增的技术,可以将微量 目的DNA片段扩增一百万倍以上。 ➢ Taq DNA聚合酶
Region to be copied Heat denaturation Primer annealing Primer extension Cycle #2 Cycle #3
二、PCR的基本反应步骤 变性 95˚C 延伸 72˚C 退火 Tm-5˚C 2 n
二、PCR的基本反应步骤 变性 95˚C 延伸 72˚C 退火 Tm-5˚C 2 n
❖ 模板DNA ❖ 特异性引物 ❖ 耐热DNA聚合酶 ❖ 底物dNTPs ❖ Mg2+ 三. PCR体系基本组成： 一对引物决定了所扩增的DNA的区域
❖ 模板DNA ❖ 特异性引物 ❖ 耐热DNA聚合酶 ❖ 底物dNTPs ❖ Mg2+ 三. PCR体系基本组成： 一对引物决定了所扩增的DNA的区域
四. PCR的主要用途 ❖ 目的基因的克隆 ❖ 基因的体外突变 ❖ DNA和RNA的微量分析 ❖ DNA序列测定 ❖ 基因突变分析
四. PCR的主要用途 ❖ 目的基因的克隆 ❖ 基因的体外突变 ❖ DNA和RNA的微量分析 ❖ DNA序列测定 ❖ 基因突变分析