实验三果树叶片中活性铁含量的测定—邻啡罗啉法 铁是植物所必须的微量元素之一。在叶绿素形成时，铁起着决定性的触媒剂 作用，因此，植物缺铁时就显出黄叶病，在果树发生缺铁症状时，可以结合对果 树的叶片活性铁含量测定加以判断 一、方法原理 以盐酸羟胺为还原剂，将三价铁还原为二价铁。在PH2一9的范围内，用邻 啡罗啉络合二价铁，生成橙红色的络合物F(C1HsN2P+。其反应如下： Fe++3C12HsN2->[Fe(Cn2HsNz)P (邻啡罗啉) (橙红色) 在一定浓度范围内，红色深浅与亚铁离子含量成正比。在显色溶液中铁含量 在0.16mg·1时符合Beer定律，波长530nm 二、测定步骤 1、测定液的制备 ①测样准备：取果树枝条稍上叶片10一100个（结果枝或不结果枝均可）， 先用自来水冲洗，除去叶面污染物，再用蒸馏水冲洗2一3次，擦干，将洗净的 叶片切成1毫米左右长的小段。 ②精确称取0.5克混合匀的测样，放入试管中。 ③加入2毫升6mol·1,摇匀，静置30分钟 ④加5ml蒸馏水稀释，并过滤于50毫升容量瓶中。 2、在测液容量瓶中，加入1毫升10%盐酸羟胺，还原铁，约2一3分钟。 3、加3滴2.4一一二硝基酚指标剂，加20毫升10%醋酸的溶液，调节待测 溶液的pH为3.5左右。 再加10毫升0.1%邻啡罗林水溶液，进行显色，加蒸馏水至刻度，摇匀，半 小时后比色。 4、在722型分光光度计上，选用530nm波长测定显色液的吸光度。 5、根据测得吸光度，在铁的标准曲线上查得测定液铁的浓度。 三、结果计算
实验三 果树叶片中活性铁含量的测定——邻啡罗啉法 铁是植物所必须的微量元素之一。在叶绿素形成时，铁起着决定性的触媒剂 作用，因此，植物缺铁时就显出黄叶病，在果树发生缺铁症状时，可以结合对果 树的叶片活性铁含量测定加以判断。 一、方法原理 以盐酸羟胺为还原剂，将三价铁还原为二价铁。在 PH2—9 的范围内，用邻 啡罗啉络合二价铁，生成橙红色的络合物[Fe(C12H8N2)3] 2+。其反应如下： Fe2++3C12H8N2 ⎯⎯PH2⎯−9→ [Fe(C12H3N2)3] 2+ (邻啡罗啉) （橙红色） 在一定浓度范围内，红色深浅与亚铁离子含量成正比。在显色溶液中铁含量 在 0.1~6mg· −1 l 时符合 Beer 定律，波长 530nm。 二、测定步骤 1、测定液的制备： ①测样准备：取果树枝条稍上叶片 10—100 个（结果枝或不结果枝均可）， 先用自来水冲洗，除去叶面污染物，再用蒸馏水冲洗 2—3 次，擦干，将洗净的 叶片切成 1 毫米左右长的小段。 ②精确称取 0.5 克混合匀的测样，放入试管中。 ③加入 2 毫升 6 mol· −1 l ，摇匀，静置 30 分钟。 ④加 5ml 蒸馏水稀释，并过滤于 50 毫升容量瓶中。 2、在测液容量瓶中，加入 1 毫升 10%盐酸羟胺，还原铁，约 2—3 分钟。 3、加 3 滴 2.4——二硝基酚指标剂，加 20 毫升 10%醋酸的溶液，调节待测 溶液的 pH 为 3.5 左右。 再加 10 毫升 0.1%邻啡罗林水溶液，进行显色，加蒸馏水至刻度，摇匀，半 小时后比色。 4、在 722 型分光光度计上，选 用 530nm 波长测定显色液的吸光度。 5、根据测得吸光度，在铁的标准曲线上查得测定液铁的浓度。 三、结果计算
果树叶片活性铁含量(mg·kg)=测定液铁的浓度(mg·)×100 表果树铁状况含量 参考指标 极缺 潜在 正常 Mg/L <30 30-60 60-90 90-120 四、标准曲线的制作 1、铁的标准液阶的配制： ①吸取浓度为10mg·1的铁的标准液，0,0.5、1、2.5、5、10毫升，依次 注入6个50毫升溶量瓶中。 ②各加入5毫升蒸馏水，2毫升6mg·~,1毫升10%盐酸羟胺，2一3分 钟后加3滴2,4一二硝基酚指示剂，用10%的碳酸钠溶液调凶溶液至黄色为止， 即溶液ph为3.5左右再加10毫升0.1%邻啡罗啉水溶液进行显色，加蒸馏水至刻 度，摇匀。 则上述溶液铁的浓度分别为：0、0.1、0.5、0.5、1、2mg·1。 2、在722型分光光度计上选用530毫m波长分别测定各级标准液的吸光度。 3、根据色阶各级溶液铁的浓度与吸光度绘制标准曲线。 五、试剂 1、10%盐酸羟胺溶液：称10克化学纯盐酸羟胺(NOH一HC1),溶于100 毫升蒸馏水中。 2、0.1%邻啡罗林显色剂：称0.1克啡林罗林(C12HNH20)溶于100毫升 蒸馏水中。 3、10%醋酸钠溶液：称10克醋酸钠(CH2COONa·3H0)固体，溶于水， 定容至100毫升。 4、6mg·-:量取248毫升（比重为1.91）盐酸，至500毫升容量瓶，加 蒸馏水至刻度。 5、0.2%2,4一二硝基酚溶液：称取0.2克2,4一二硝基酚（又名a一二硝 基酚)溶于100毫升蒸馏水（注：变色PH范围2.8一4.4颜色：无色一黄）
果树叶片活性铁含量（mg·kg-1）=测定液铁的浓度（mg· −1 l ）×100 表 果树铁状况含量 参考指标 极缺 缺 潜在 正常 Mg/L <30 30~60 60~90 90~120 四、标准曲线的制作 1、铁的标准液阶的配制： ①吸取浓度为 10 mg· −1 l 的铁的标准液，0，0.5、1、2.5、5、10 毫升，依次 注入 6 个 50 毫升溶量瓶中。 ②各加入 5 毫升蒸馏水，2 毫升 6 mg· −1 l ，1 毫升 10%盐酸羟胺，2—3 分 钟后加 3 滴 2，4—二硝基酚指示剂，用 10%的碳酸钠溶液调凶溶液至黄色为止， 即溶液 ph 为 3.5 左右再加 10 毫升 0.1%邻啡罗啉水溶液进行显色，加蒸馏水至刻 度，摇匀。 则上述溶液铁的浓度分别为：0、0。1、0。5、0。5、1、2 mg·l-1。 2、在 722 型分光光度计上选用 530 毫 nm波长分别测定各级标准液的吸光度。 3、根据色阶各级溶液铁的浓度与吸光度绘制标准曲线。 五、试剂 1、10%盐酸羟胺溶液：称 10 克化学纯盐酸羟胺（NH2OH—HCl），溶于 100 毫升蒸馏水中。 2、0.1%邻啡罗林显色剂：称 0.1 克啡林罗林（C12H3N2H2O）溶于 100 毫升 蒸馏水中。 3、10%醋酸钠溶液：称 10 克醋酸钠（CH2COONa·3H2O）固体，溶于水， 定容至 100 毫升。 4、6 mg· −1 l ：量取 248 毫升（比重为 1.91）盐酸，至 500 毫升容量瓶，加 蒸馏水至刻度。 5、0.2%2，4 一二硝基酚溶液：称取 0.2 克 2，4 一二硝基酚（又名 a 一二硝 基酚）溶于 100 毫升蒸馏水（注：变色 PH 范围 2.8—4.4 颜色：无色一黄）
6、10mg·~铁的标准溶液：称取0.3511克Fe(NH4(SO2·6HO(疏酸亚 铁铵)，溶于蒸馏水，加入5毫升6NHC1,移入500毫升容量瓶，加蒸馏水定容， 此溶液亚铁浓度为100mg·~。 吸收浓度为100g·~的铁的标准液10毫升，于100毫升容量瓶，加蒸馏 水至刻度，此标准液亚铁浓度为10mg·。 六、实验主要仪器 1、光电比色计或722型分光光度计。 2、容量瓶(50毫升8个)，量筒(10毫升)、试管、漏斗、吸管(1、5、 10毫升)表面皿、剪刀。 3、电子天平（感量0.01g)
6、10 mg· −1 l 铁的标准溶液：称取 0.3511 克 Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O(硫酸亚 铁铵)，溶于蒸馏水，加入 5 毫升 6NHCl，移入 500 毫升容量瓶，加蒸馏水定容， 此溶液亚铁浓度为 100 mg· −1 l 。 吸收浓度为 100 mg· −1 l 的铁的标准液 10 毫升，于 100 毫升容量瓶，加蒸馏 水至刻度，此标准液亚铁浓度为 10 mg· −1 l 。 六、实验主要仪器 1、光电比色计或 722 型分光光度计。 2、容量瓶（50 毫升 8 个），量筒（10 毫升）、试管、漏斗、吸管（1、5、 10 毫升）表面皿、剪刀。 3、电子天平（感量 0.01g）