细胞生物学实验指导 细胞生物学实验课程介绍 细胞生物学是高等院校生命科学的主要课程之一，是一门实验性很强的学科。细胞生物学实验 课是理论教学的重要补充。细胞生物学实验课的教学目的主要是，通过基本技能训练及观察分析实 验结果，使学生了解并掌握有关的实验技术原理和操作方法，进而培养学生动手能力、提高学生发 现、分析和解决问题的能力。 参考书目：细胞生物学实验（第二版）杨汉民主编高等教育出版社 细胞生物学实验（第二版）李芬、胡海燕主编科学出版社 细胞生物学（第五版）丁明孝等主编高等教育出版社 实验室规则与操作要求 为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希 望实验者能严格遵守。 (一)显微镜的使用及保护 1.显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防 湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用 擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇=7：3）轻轻擦拭干净
细胞生物学实验指导 细胞生物学实验课程介绍 细胞生物学是高等院校生命科学的主要课程之一，是一门实验性很强的学科。细胞生物学实验 课是理论教学的重要补充。细胞生物学实验课的教学目的主要是，通过基本技能训练及观察分析实 验结果，使学生了解并掌握有关的实验技术原理和操作方法，进而培养学生动手能力、提高学生发 现、分析和解决问题的能力。 参考书目：细胞生物学实验（第二版）杨汉民主编 高等教育出版社 细胞生物学实验（第二版）李芬、胡海燕主编 科学出版社 细胞生物学（第五版）丁明孝等主编 高等教育出版社 实验室规则与操作要求 为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希 望实验者能严格遵守。 （一）显微镜的使用及保护 1. 显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防 湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用 擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇＝7：3）轻轻擦拭干净
2.带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微 镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调 至最小，然后再关闭显微镜电源开关。 3.镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。用擦镜纸蘸取少量镜头清洗 液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2一3次。 4.载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。聚光器 上的污物的去除亦可采用类似的方法。 5.使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋放回原处。本桌的显微镜一律不准搬离 本实验桌。若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。 如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。 (一)实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作， 仔细做好各项观察与记录。 (二)实验室内的一切仪器、物品必须爱护。节约材料、药品，取用时不要过 量。公用物品不得独自占用，用后归还原处。 (三)注意安全。使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。易燃物 品远离火源。禁止湿手拿取电源开关或接触电源。如发生触电等事故，及时报告。 (四)取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。按献宝取出所需之药品或溶液后，不 得将原液倒回瓶内。滴管、玻棒、吸管不可混用。 (五)实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规 程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。 (六)本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否 采用，视具体情况而定。任何人未经老师许可，不得自作主张，改动任何实验步骤与 操作方法
2. 带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微 镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调 至最小，然后再关闭显微镜电源开关。 3. 镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。用擦镜纸蘸取少量镜头清洗 液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2－3次。 4. 载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。聚光器 上的污物的去除亦可采用类似的方法。 5. 使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋放回原处。本桌的显微镜一律不准搬离 本实验桌。若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。 如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。 （一）实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作， 仔细做好各项观察与记录。 （二）实验室内的一切仪器、物品必须爱护。节约材料、药品，取用时不要过 量。公用物品不得独自占用，用后归还原处。 （三）注意安全。使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。易燃物 品远离火源。禁止湿手拿取电源开关或接触电源。如发生触电等事故，及时报告。 （四）取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。按献宝取出所需之药品或溶液后，不 得将原液倒回瓶内。滴管、玻棒、吸管不可混用。 （五）实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规 程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。 （六）本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否 采用，视具体情况而定。任何人未经老师许可，不得自作主张，改动任何实验步骤与 操作方法
(七)实验完毕后，须摆齐药品，洗净器皿，做好实验桌清洁。整个实验室清洁 由本班班长安排。离开前要关好门、窗、水、电。 目录 实验一细胞膜的通透性实验， .1 实验二细胞的凝集实验 3 实验三动物细胞的融合实验， .5 实验四植物细胞骨架的光学显微镜观察 .7 实验五线粒体的超活染色. 9 实验六植物染色体标本的制备及有丝分裂过程的观察.11 实验七细胞器和亚细胞组分的分离及观察。 13 实验八氧电极法测定植物的光合和呼吸速率。 17 实验九DNA的Feulgen染色观察， 23 实验十液泡系的活体染色观察. .25 实验十一植物组织培养及愈伤组织的分化诱导27 实验十二小鼠骨髓间充质细胞的分离培养及观察.31
（七）实验完毕后，须摆齐药品，洗净器皿，做好实验桌清洁。整个实验室清洁 由本班班长安排。离开前要关好门、窗、水、电。 目 录 实验一 细胞膜的通透性实验. 1 实验二 细胞的凝集实验. 3 实验三 动物细胞的融合实验. 5 实验四 植物细胞骨架的光学显微镜观察. 7 实验五 线粒体的超活染色. 9 实验六 植物染色体标本的制备及有丝分裂过程的观察. 11 实验七 细胞器和亚细胞组分的分离及观察. 13 实验八 氧电极法测定植物的光合和呼吸速率. 17 实验九 DNA的Feulgen染色观察. 23 实验十 液泡系的活体染色观察. 25 实验十一 植物组织培养及愈伤组织的分化诱导. 27 实验十二 小鼠骨髓间充质细胞的分离培养及观察. 31
实验一细胞膜的通透性实验 一、实验目的 1.了解动物细胞膜的特性 2.掌握观察细胞膜通透性的原理和方法 二、实验原理 动物细胞膜是具有流动性、半通透性的双膜结构，有些小分子能自由通过如水分子，而有些小分 子不能自由透过如钠离子，钾离子、蔗糖等。水是地球上大部分生命物质存在的基础，水能自由通 过细胞膜。钠离子是阳离子不能自由通过，水与细胞接触时，细胞外钠离子浓度低于细胞，细胞内 为高渗状态，水分子自由进入红细胞，细胞吸水膨胀，最后细胞膜破裂。高渗的NC1水溶液与红细 胞接触，红细胞相对于溶液处于低渗状态，细胞内水分子自由出细胞，细胞缩水。 三、实验仪器、材料和试剂 1仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管：镊子、吸水纸、擦镜 纸、吸管、烧杯、量筒、冰箱。 2.材料：鸡血（采血） 3试剂：氯化钠，氯化钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠 (1)PBS缓冲液 称取7.2gNaC1,1.48gNaH2PO4,0.46gKH2PO4,用蒸馏水定容至1000ml,调pH为7.2。 (2)0.9%NaC1 称取0.9 g NaCl,.加水定容至1O0ml
实验一 细胞膜的通透性实验 一、实验目的 1. 了解动物细胞膜的特性 2. 掌握观察细胞膜通透性的原理和方法 二、实验原理 动物细胞膜是具有流动性、半通透性的双膜结构，有些小分子能自由通过如水分子，而有些小分 子不能自由透过如钠离子，钾离子、蔗糖等。水是地球上大部分生命物质存在的基础，水能自由通 过细胞膜。钠离子是阳离子不能自由通过，水与细胞接触时，细胞外钠离子浓度低于细胞，细胞内 为高渗状态，水分子自由进入红细胞，细胞吸水膨胀，最后细胞膜破裂。高渗的NaCl水溶液与红细 胞接触，红细胞相对于溶液处于低渗状态，细胞内水分子自由出细胞，细胞缩水。 三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管；镊子、吸水纸、擦镜 纸、吸管、烧杯、量筒、冰箱。 2.材料：鸡血（采血） 3.试剂：氯化钠，氯化钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠 （1）PBS缓冲液 称取7.2g NaCl，1.48 g NaH PO ， 0.46 g KH PO ，用蒸馏水定容至1000 ml，调pH为7.2。 （2）0.9% NaCl 称取0.9 g NaCl，加水定容至100 ml。 2 4 2 4
(3)饱和NaCI 称取36gNaC1,加水定容至100ml。 四、实验方法与步骤 (1)用PBS充分洗涤新鲜采集的鸡血，PBS洗涤3次以上，除去血液中的纤溶蛋白，离心后细胞 沉淀用0.9%NaCI溶液稀释成0.5%血细胞。 (2)准备纯净水，0.9%和饱和NaCI溶液 (3)取3片载玻片，分别滴入一滴鸡血红细胞。 (4)在鸡血滴上分别滴加一滴不同溶液，轻轻混匀，10min后，盖上盖玻片，在显微镜下观察 细胞形态变化。 五、注意事项 1从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2.红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1观察不同浓度盐水下细胞膜的变化，同时分析其中的原因 实验二细胞的凝集实验 一、实验目的 1.了解植物凝集素的本质： 3.掌握细胞凝集的原理和方法。 红细胞凝集：红细胞凝集包括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三种类型的细胞凝集现象。 凝集素(lectin)是从各种植物的种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖蛋白，因为能凝集红 细胞，故名凝集素
（3）饱和NaCl 称取36 g NaCl，加水定容至100 ml。 四、实验方法与步骤 （1）用PBS充分洗涤新鲜采集的鸡血， PBS洗涤3次以上，除去血液中的纤溶蛋白，离心后细胞 沉淀用0.9% NaCl溶液稀释成0.5%血细胞。 （2）准备纯净水，0.9%和饱和NaCl溶液 （3）取3片载玻片，分别滴入一滴鸡血红细胞。 （4）在鸡血滴上分别滴加一滴不同溶液，轻轻混匀，10 min后，盖上盖玻片，在显微镜下观察 细胞形态变化。 五、注意事项 1.从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2.红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1.观察不同浓度盐水下细胞膜的变化，同时分析其中的原因 实验二 细胞的凝集实验 一、实验目的 1.了解植物凝集素的本质； 3. 掌握细胞凝集的原理和方法。 红细胞凝集：红细胞凝集包括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三种类型的细胞凝集现象。 凝集素（lectin）是从各种植物的种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖蛋白，因为能凝集红 细胞，故名凝集素
凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞 表面的糖基。通过与细胞表面的糖分子相连，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞的凝集。一种凝集素 只对某一种特异的糖基具有特异结合的能力，如马铃薯凝集素专一结合的是N乙酰氨基葡萄糖二聚 体和N乙酰氨基半乳糖。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集作用。 另外，凝集素还具有多价结合的能力，能与荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合而不影响 其生物活性，可用于光镜或电镜水平的免疫细胞化学研究。 三、实验仪器、材料和试剂 1仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管：镊子、解剖针、刀 片、吸水纸、擦镜纸、吸管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2.材料：士豆块茎，鸡（采血） 3试剂： (1)PBS缓冲液 称取7.2gNaC1,148gNaH2PO4,0.46gKH2P04,用蒸馏水定容至1000ml,调pH为7.2。 (2)0.9%NaCI 称取0.9 g NaCl,.加水定容至100ml。 四、实验方法与步骤 1.凝集素的制备： 用天平称取2g去皮土豆块茎，加10 ml PBS缓冲液，在烧杯中浸泡2h,浸出的粗提液中即含有士 豆凝集素。 2.5%鸡血红细胞的制备： A无菌方法取鸡血于烧杯中，加入抗凝剂，轻轻搅拌，防止血凝： B.用1.5ml的离心管取血液1ml,2000rpm,离心5min,用移液器轻轻吸取上清去除，加入1ml 生理盐水水洗5次。 C.在小试剂瓶中加入9.5m生理盐水，用移液器吸取500血红细胞加入小试剂瓶中，混匀，即 是5%的红细胞悬液。贴上标签备用。 3凝集反应现象：
凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞 表面的糖基。通过与细胞表面的糖分子相连，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞的凝集。一种凝集素 只对某一种特异的糖基具有特异结合的能力，如马铃薯凝集素专一结合的是N-乙酰氨基葡萄糖二聚 体和N-乙酰氨基半乳糖。加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集作用。 另外，凝集素还具有多价结合的能力，能与荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合而不影响 其生物活性，可用于光镜或电镜水平的免疫细胞化学研究。 三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管；镊子、解剖针、刀 片、吸水纸、擦镜纸、吸管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2.材料：土豆块茎，鸡（采血） 3.试剂： （1）PBS缓冲液 称取7.2g NaCl，1.48 g NaH PO ， 0.46 g KH PO ，用蒸馏水定容至1000 ml，调pH为7.2。 （2）0.9% NaCl 称取0.9 g NaCl，加水定容至100 ml。 四、实验方法与步骤 1. 凝集素的制备： 用天平称取2 g去皮土豆块茎，加10 ml PBS缓冲液，在烧杯中浸泡2 h，浸出的粗提液中即含有土 豆凝集素。 2. 5%鸡血红细胞的制备： A. 无菌方法取鸡血于烧杯中，加入抗凝剂，轻轻搅拌，防止血凝； B. 用1.5 ml的离心管取血液1 ml，2000 rpm，离心5 min，用移液器轻轻吸取上清去除，加入1 ml 生理盐水水洗5次。 C. 在小试剂瓶中加入9.5 ml生理盐水，用移液器吸取500 μl血红细胞加入小试剂瓶中，混匀，即 是5%的红细胞悬液。贴上标签备用。 3.凝集反应现象： 2 4 2 4
用滴管吸取红细胞悬液，在两片载玻片上各滴一滴，其中一片加一滴土豆凝集素，一片加一滴 PBS缓冲液（对照），充分混匀。静止20mn。盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 红细胞凝集现象 五、注意事项 1从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1绘制加土豆凝集素和PBS缓冲液后红细胞的变化图，并发生凝集的分析原因。 实验三动物细胞的融合实验 一、实验目的 1.了解PEG诱导动物细胞融合的原理
用滴管吸取红细胞悬液，在两片载玻片上各滴一滴，其中一片加一滴土豆凝集素，一片加一滴 PBS缓冲液（对照），充分混匀。静止20 min。盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 红细胞凝集现象 五、注意事项 1.从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2.红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1.绘制加土豆凝集素和PBS缓冲液后红细胞的变化图，并发生凝集的分析原因。 实验三 动物细胞的融合实验 一、实验目的 1.了解PEG诱导动物细胞融合的原理；
2.掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。 二、实验原理 细胞膜的流动性是细胞融合的基础。人工诱导动物细胞融合的方法有生物法、化学法和物理法。聚 乙二醇(PEG)分子首先引起细胞的集聚与黏连，能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点 处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张 力作用，使细胞发生融合，胞质流通，最后形成融合细胞。 PEG的水溶性强，在液相介质中，其分子表面的醚键带有微弱的负电荷，在Ca+离子的参与 下，可将带正电的表面蛋白或带负电荷的糖蛋白通过C:2+桥相连，从而使细胞发生聚集、融合。在 50%PEG中，自由水消失，可导致细胞脱水而引起质膜结构变化和细胞融合 PEG用于细胞融合中的优点为：通用性强，可用于动、植物和微生物各种细胞：比仙台病毒等易 制备和控制：活性稳定，使用方便。 三、实验仪器、材料和试剂 1仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管：吸水纸、擦镜纸、吸 管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2材料：鸡血（采血）》 3试剂：PEG(MW4000),葡萄糖，柠檬酸钠，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，酚红 (1)PBS缓冲液
2.掌握PEG诱导动物细胞融合的方法。 二、实验原理 细胞膜的流动性是细胞融合的基础。人工诱导动物细胞融合的方法有生物法、化学法和物理法。聚 乙二醇（ PEG ）分子首先引起细胞的集聚与黏连，能改变各类细胞的生物膜结构，使两细胞接触点 处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张 力作用，使细胞发生融合，胞质流通，最后形成融合细胞。 PEG的水溶性强，在液相介质中，其分子表面的醚键带有微弱的负电荷，在Ca 离子的参与 下，可将带正电的表面蛋白或带负电荷的糖蛋白通过Ca 桥相连，从而使细胞发生聚集、融合。在 50%PEG中，自由水消失，可导致细胞脱水而引起质膜结构变化和细胞融合。 PEG用于细胞融合中的优点为：通用性强，可用于动、植物和微生物各种细胞；比仙台病毒等易 制备和控制；活性稳定，使用方便。 三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管；吸水纸、擦镜纸、吸 管、烧杯、量筒、恒温水浴锅、冰箱。 2.材料：鸡血（采血） 3.试剂：PEG（MW 4000），葡萄糖，柠檬酸钠，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，酚红 （1）PBS缓冲液 2+ 2+
称取7.2gNaC1,1.48gNaH2P04,0.46gKH2P04,用蒸馏水定容至1000ml,调pH为7.2 (2)ALseveri液：葡萄糖2.05g,柠檬酸钠0.8g,氯化钠0.42g,加无菌双蒸水至100ml (3)GKN液氯化钠18g,氯化钾0.4g,7水磷酸氢二钠1.77g,2水磷酸二氢钠0.69g,葡萄糖2 g,酚红0.01g (4)50%聚乙二醇：称取PEG10g放入试管，在100℃中水浴完全溶解，温度降至50℃，加入 等体积50℃预热的GKN液，震荡混匀。 四、实验方法与步骤 (1)鸡血混悬液制备 抽取鸡血2ml,缓慢加入8 ml Alseveri液中混匀备用。 (2)实验时吸取1ml鸡血混悬液，加入4ml0.85%生理盐水，1200pm离心5min血细胞沉淀， 弃上清，再次用相同的方法制作细胞悬液，10O0pm离心8min,用血球计数板计数，调整细胞数量 为1×10个ml,(红细胞计数：5个小方格细胞数量x5×稀释倍数×104m),吸取调整的细胞1ml, 在37℃中水浴滴加1ml50%PEG,边滴边摇匀，加入结束后静置1mim,取1ml融合的细胞显微镜下 观察其形态。 五、注意事项 滴加PEG时要边滴边轻轻摇匀。 六、结果与分析
称取7.2g NaCl，1.48 g NaH PO ， 0.46 g KH PO ，用蒸馏水定容至1000 ml，调pH为7.2。 （2）ALsever液：葡萄糖 2.05 g，柠檬酸钠0.8 g，氯化钠 0.42 g，加无菌双蒸水至100 ml （3）GKN液氯化钠 18 g，氯化钾 0.4 g，7水磷酸氢二钠1.77 g，2水磷酸二氢钠 0.69 g，葡萄糖 2 g，酚红 0.01 g （4）50%聚乙二醇：称取PEG 10 g放入试管，在100 ℃中水浴完全溶解，温度降至50 ℃，加入 等体积50 ℃预热的GKN液，震荡混匀。 四、实验方法与步骤 （1）鸡血混悬液制备 抽取鸡血2 ml，缓慢加入8 ml Alsever液中混匀备用。 （2）实验时吸取1 ml鸡血混悬液，加入4 ml 0.85%生理盐水，1200 rpm 离心5 min 血细胞沉淀， 弃上清，再次用相同的方法制作细胞悬液，1000 rpm离心8 min，用血球计数板计数，调整细胞数量 为1×10 个/ml，（红细胞计数：5个小方格细胞数量×5×稀释倍数×10 /ml），吸取调整的细胞1 ml， 在37 ℃中水浴滴加1 ml 50% PEG，边滴边摇匀，加入结束后静置1 min，取 1 ml融合的细胞显微镜下 观察其形态。 五、注意事项 滴加PEG时要边滴边轻轻摇匀。 六、结果与分析 2 4 2 4 7 4
观察细胞膜融合的结果，分析其中原因。 实验四植物细胞骨架观察 一、实验目的 1.了解细胞骨架的结构特征： 2.掌握细胞骨架样品制备技术 二、实验原理 细胞骨架染色：细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分 为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输， 能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。用适当浓度的Triton X-100处理细胞，可将细胞质 膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用 戊二醛固定，考马斯亮蓝250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构， 这就是细胞骨架。 三、实验用品 1,材料：洋葱鳞茎 2.试剂： (1)6 mmol/L(pH6.8)磷酸缓冲液（用NaHCO3调PH)。 (2)M缓冲液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKC1、0.5mmol/LMgC12、1mmol/L EGTA[乙二醇双(a-氨基乙基醚)四乙酸]、0.1 mmol/L EDTA、1mmo/L巯基乙醇或DTT (二硫苏糖醇)。 (3)1%Triton X-100,用M缓冲液配制。 (4)0.2%考马斯亮蓝R250,其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml
观察细胞膜融合的结果，分析其中原因。 实验四 植物细胞骨架观察 一、实验目的 1. 了解细胞骨架的结构特征； 2. 掌握细胞骨架样品制备技术。 二、实验原理 细胞骨架染色：细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分 为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输， 能量转换，信息传递，基因表达等起到重要作用。用适当浓度的Triton X-100处理细胞，可将细胞质 膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用 戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构， 这就是细胞骨架。 三、实验用品 1. 材料：洋葱鳞茎 2. 试剂： (1) 6 mmol/L（pH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO 调PH）。 (2) M缓冲液：50 mmol/L 咪唑、50 mmol/L KCl、0.5 mmol/L MgCl 、1 mmol/L EGTA[乙二醇双（α-氨基乙基醚）四乙酸]、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L 巯基乙醇或DTT （二硫苏糖醇）。 (3) 1%Triton X-100，用M缓冲液配制。 (4) 0.2%考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5 ml、冰醋酸7 ml、蒸馏水46.5 ml。 3 2