实验六、土壤微生物的分离与 测数及斜面接种
实验六、土壤微生物的分离与 测数及斜面接种
实验目的及要求 ■1.了解土壤微生物的分离纯化及测数的基 本原理 ■2.学习并掌握微生物分离纯化技术方法 ■3学习并掌握微生物平板菌落计数的技术 方法 ·4.学习并掌握无菌操作及微生物接种技术
实验目的及要求 ◼ 1.了解土壤微生物的分离纯化及测数的基 本原理 ◼ 2.学习并掌握微生物分离纯化技术方法 ◼ 3.学习并掌握微生物平板菌落计数的技术 方法 ◼ 4.学习并掌握无菌操作及微生物接种技术
基本原理 通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞 得以生长发育形成菌落，可使用稀释法 或平板划线法进一步纯化，还以通过菌 落计数，推算单位重量土壤样品含有微 生物的数量
基本原理 通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞 得以生长发育形成菌落，可使用稀释法 或平板划线法进一步纯化，还以通过菌 落计数，推算单位重量土壤样品含有微 生物的数量
一、土壤微生物的分离与测数 实验步骤 1土壤样品的采集 2.好气性细菌的分离纯化及测数 A、制备土样稀释液
一、土壤微生物的分离与测数 1.土壤样品的采集 2.好气性细菌的分离纯化及测数 A、制备土样稀释液 实验步骤
吹吸三次混匀 1制备土样稀释液 无菌操作 1ml 1.0ml 1.0ml 1.0ml 99ml 无菌水 9ml H,O 9 ml H,O 9 ml H2O 9 ml H,O 10-3 dilution) 10-4dilution) 10-5 dilution) 10-6 dilution) 另留一管不稀释留作对照(CK)
1 制备土样稀释液 99ml 无菌水 10-2 1克 1ml 10-3 10-4 10-5 10-6 另留一管不稀释留作对照（CK） 吹吸三次混匀 无菌操作
B、培养基的准备 融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在 48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底 贴好标签，注明10-5、10-6、CK(每个稀 释度要两个平行皿，对照要两个平行皿)。 ·标签 班级： 组号： 浓度：
B、培养基的准备 融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在 48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底 贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀 释度要两个平行皿，对照要两个平行皿）。 ◼ 标签 班级： 组号： 浓度：
C、接种（倾注法接种， 涂抹法接种) 先按10-6,10-5的顺序将不同稀释度菌悬 液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml) 再向每个平皿倾注约15l的牛肉膏蛋白 胨培养基(48℃)待冷凝，混合均匀
C、接种（倾注法接种， 涂抹法接种） 先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬 液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml）， 再向每个平皿倾注约15 ml的牛肉膏蛋白 胨培养基（48℃）待冷凝，混合均匀
I m. Iml 1ml 1ml 各9ml无菌水 t0g土样 901m1 无萄水 10 37℃ 10- B 10-4 28℃ 10- 28 10- 10 107 图Ⅱ-6 从土壤中分离微生物的操作过程
基内菌落 表面菌落 稀释倒平皿分 将待分离样品稀释液 加入灭菌的培 县 离法典型结果 加入无菌培养皿中 养基，摇匀 表面菌落 将培养皿倒置培养 的单 取0.1m1或更少菌 涂布平板分离 液加入到无菌固体 用已灭菌的刮铲 法典型结果 培养基表面 在培养基表面涂布 使菌液均匀铺开
■D、保温培养（静置30分钟，37度培养3-5日 观察结果) ·E、纯化（连续划线法分区划线法）》 ·F、计数（选择一适合稀释度，要求在同一稀 释度的重复平皿的菌落数相差不大，且每个 平皿为30-300之间) 倾注法接种=同一稀释度重复菌落数平均值* 稀释倍数 ·土壤样品水分系数=1/(1-样品水分百分数 土壤样品细菌数量（个克干土）=每克湿土 样细菌数量*样品水分系数
◼ D、保温培养（静置30分钟，37度培养3-5日 ， 观察结果） ◼ E、纯化（连续划线法 分区划线法） ◼ F、计数（选择一适合稀释度，要求在同一稀 释度的重复平皿的菌落数相差不大，且每个 平皿为30-300之间） ◼ 倾注法接种=同一稀释度重复菌落数平均值* 稀释倍数 ◼ 土壤样品水分系数=1/（1-样品水分百分数） ◼ 土壤样品细菌数量（个/克干土）=每克湿土 样细菌数量*样品水分系数