原位杂交组织化学
原位杂交组织化学
核酸分子杂交技术 固相杂交 菌落原位杂交( colony in situ hybridization) 斑点杂交法( Dot blot Southern印迹杂交( Southern blot ■ Northern印迹杂交( Northern blot) 组织原位杂交( Tissue in situ hybridization) 液相杂交
核酸分子杂交技术 固相杂交: ◼ 菌落原位杂交(colony in situ hybridization) ◼ 斑点杂交法(Dot blot) ◼ Southern印迹杂交(Southern blot) ◼ Northern印迹杂交( Northern blot) ◼ 组织原位杂交(Tissue in situ hybridization) 液相杂交
DNA∽ DNA is digested with a restriction endonuclease 入 Restriction fragments of different sizes are separated by gel electrophoresis. Migration Paper towels Filter The DNa is denatured and transferred to a filter by passage of a salt solution through the gel Salt solution X-ray fil DNA ragments< Filter The filter is hybridized The probe bound to the with a radioactive √A filter is detected by probe, which binds to autoradiography complementary which reveals the DNA DNA sequences. fragment to which the probe hybridized
定义: 特定标记的已知序列的核酸作为探针与细胞或组织 切片中的核酸进行杂交并对标记的探针进行检测的 方法称为原位杂交
定义: 特定标记的已知序列的核酸作为探针与细胞或组织 切片中的核酸进行杂交并对标记的探针进行检测的 方法称为原位杂交
ITotal cell DNA mixture of different double-stranded molecules 95°c Denature 22 Detection of DNA Strands separate by nucleic acid Add radioactive hybridization DNA probe 65°c complementary to Renature specific cell DNA sequence Radioactive probe hybridizes to complementary sequences in cell DNA
Detection of DNA by nucleic acid hybridization
核酸探针标记方法: 放射性探针:2P3H35S 2.非放射性探针:生物素、地高辛 探针的核酸性质不同: 1.DNA探针:单链DNA( Single stranded,sNA)和 双链DNA( Double stranded, dsDNA) CDNA探针: complementary dna probe 3.cRNA探针: complementary rna probe 寡核苷酸探针
分类 核酸探针标记方法: 1. 放射性探针:32P 3H 35S 2. 非放射性探针:生物素、地高辛 探针的核酸性质不同: 1. DNA探针:单链DNA(Single stranded, ssDNA)和 双链 DNA(Double stranded, dsDNA) 2. cDNA探针:complementary DNA probe 3. cRNA探针:complementary RNA probe 4. 寡核苷酸探针
原理 ■探针标记:同位素标记和非同位素标记 的探针(生物素标记和地高辛标记) 探针与靶序列根据碱基互补配对原则特 异性结合 检测标记的探针:放射自显影、荧光检 测和酶法检测
原理 ◼ 探针标记:同位素标记和非同位素标记 的探针(生物素标记和地高辛标记) ◼ 探针与靶序列根据碱基互补配对原则特 异性结合 ◼ 检测标记的探针:放射自显影、荧光检 测和酶法检测
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优点 ■不需要从组织中提取核酸,对组织中含量 极低的靶序列具有极高的敏感性。 能够完整的保持组织和细胞的形态,能更 准确地反映组织细胞的功能状态以及功能 上的相互联系
优点 ◼ 不需要从组织中提取核酸,对组织中含量 极低的靶序列具有极高的敏感性。 ◼ 能够完整的保持组织和细胞的形态,能更 准确地反映组织细胞的功能状态以及功能 上的相互联系
应用 特定的核酸序列在染色体中的精确定位。 ■与细胞内的RNA杂交观察该基因的定位、定量表 达 用特异性的细菌或病毒的核酸作为探针对组织或 细胞进行杂交,以确定有无病原体的感染
应用 ◼ 特定的核酸序列在染色体中的精确定位。 ◼ 与细胞内的RNA杂交观察该基因的定位、定量表 达。 ◼ 用特异性的细菌或病毒的核酸作为探针对组织或 细胞进行杂交,以确定有无病原体的感染