石蜡切片的制作
石蜡切片的制作
石蜡切片的过程 令动物的处死 动物组织取材 令固定 组织固定后的处理 脱水和透明 令包埋 切片
石蜡切片的过程 ❖ 动物的处死 ❖ 动物组织取材 ❖ 固定 ❖ 组织固定后的处理 ❖ 脱水和透明 ❖ 包埋 ❖ 切片
动物的处死 令麻醉 今空气栓塞 今颈椎脱臼或断头 股动脉放血
一、动物的处死 ❖ 麻醉 ❖ 空气栓塞 ❖ 颈椎脱臼或断头 ❖ 股动脉放血
二、动物组织取材 动物组织取材原则: 尽量保持组织的生活状态。 动作要快 不要过度用力夹捏组织, 防止组织变形
二、动物组织取材 ❖ 动物组织取材原则： 尽量保持组织的生活状态。 ❖ 动作要快 ❖ 不要过度用力夹捏组织， 防止组织变形
、固定 1、目的: 尽量保持组织的生前状态,防止组织的死后变 化、自溶。 保持细胞和组织原有的形态结构, 保持组织内部成分特征不发生变化。 2、方式:浸入式 灌注式
三、固定 ❖ 1、目的： 尽量保持组织的生前状态，防止组织的死后变 化、自溶。 保持细胞和组织原有的形态结构， 保持组织内部成分特征不发生变化。 ❖ 2、方式：浸入式 灌注式
灌注式 此法适用于动物实验研究。自左心室插入主 动脉,先以生理盐水冲冼血液后,以泵、吊 筒或50-100m注射器注入固定液。然后取材, 投入固定液。 今灌注法固定可使固定液迅速达到全身各组织。 达到充分固定之目的
灌注式 ❖ 此法适用于动物实验研究。自左心室插入主 动脉，先以生理盐水冲冼血液后，以泵、吊 筒或50-100ml注射器注入固定液。然后取材， 投入固定液。 ❖ 灌注法固定可使固定液迅速达到全身各组织。 达到充分固定之目的
3、固定液 今醛类固定剂 非醛类固定剂 丙酮及醇类固定剂
3、固定液 ❖ 醛类固定剂 ❖ 非醛类固定剂 ❖ 丙酮及醇类固定剂
醛类固定剂 令双功能交联剂,其作用是使组织之间相互交联 令包括:甲醛、多聚甲醛、戊二醛 通常与其他的试剂联合使用 令优点是对组织穿透性强,收缩性小。可以保存 蛋百质、脂肪、黏液物质以及一定量的糖原。 缺点:长期固定使组织过度硬化及细胞核不着 色,并且产生“福尔马林色素”,它是由于血 红蛋百与甲醛转化的酸形成正铁血红素
醛类固定剂 ❖ 双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联。 ❖ 包括：甲醛、多聚甲醛、戊二醛 ❖ 通常与其他的试剂联合使用 ❖ 优点是对组织穿透性强，收缩性小。可以保存 蛋白质、脂肪、黏液物质以及一定量的糖原。 ❖ 缺点：长期固定使组织过度硬化及细胞核不着 色，并且产生“福尔马林色素”，它是由于血 红蛋白与甲醛转化的酸形成正铁血红素
非醛类固定剂 今氯化汞(Hgcl2):蛋白的强固定剂 重铬酸钾:保存类脂、高尔基复合体、及染色体等结构。 令苦味酸:三硝基苯酚,蛋白、糖原固定剂, 令醋酸:固定染色体。软化组织,缓解收缩。 令蔗糖:防止某些细胞成分扩散,保持酶活性,良好形态。 今四氧化锇:保存细胞蛋白质细微结构有良好效应,应用与 电镜观察切片的固定与染色
非醛类固定剂 ❖ 氯化汞（HgCI2）：蛋白的强固定剂 ❖ 重铬酸钾：保存类脂、高尔基复合体、及染色体等结构。 ❖ 苦味酸：三硝基苯酚，蛋白、糖原固定剂， ❖ 醋酸：固定染色体。软化组织，缓解收缩。 ❖ 蔗糖：防止某些细胞成分扩散，保持酶活性，良好形态。 ❖ 四氧化锇：保存细胞蛋白质细微结构有良好效应，应用与 电镜观察切片的固定与染色
丙酮及醇类固定剂 令丙酮:沉淀蛋白质和糖,对组织穿透性很强。可以 单独使用,低温下保持酶活性效果好 乙醇:固定糖原和核酸的作用。低分子蛋白质、多 肽及胞浆内蛋白质保存效果较差。必须与其他试剂 混合使用,单独使用使组织收缩严重,对细胞形态 保存不良
丙酮及醇类固定剂 ❖ 丙酮：沉淀蛋白质和糖，对组织穿透性很强。可以 单独使用，低温下保持酶活性效果好。 ❖ 乙醇：固定糖原和核酸的作用。低分子蛋白质、多 肽及胞浆内蛋白质保存效果较差。必须与其他试剂 混合使用，单独使用使组织收缩严重，对细胞形态 保存不良