实验 显微镜的使 用和细菌形态与染色
实验二 显微镜的使 用和细菌形态与染色
实验目的 1.学习、掌握油镜的使用 2.学习、掌握细菌涂片染色; 3.学习、掌握细菌的革兰氏染色 4.建立“无菌操作”的概念,学习 其技术
一、实验目的 • 1．学习、掌握油镜的使用； • 2．学习、掌握细菌涂片染色； • 3．学习、掌握细菌的革兰氏染色； • 4．建立“无菌操作”的概念，学习 其技术
法强芽目景 实验原理1 堡彩夹荷彭 好详 矿两量童阳时立 显微镜的构造 1光学部分:目镜、物镜、 器来 旧转蠡 照明装置(聚光镜、虹彩光 閣、反光镜等)。它使检视 物放大,生成物象 时两字十台酵 旧脚丑申 关形主 作妈三身大你字告 ()故好路格3(2-图) 转换器 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒 械物台 蜘台 物镜转换器、载物台、载物台 转移器、粗调节器、细调节器 等部件.它起着支持调节固定 等作用 (围1-4)欲林巴斯蓝设镜结构()
二、实验原理1 •显微镜的构造 1.光学部分:目镜、 物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光 圈、 反光镜等)。它使检视 物放大,生成物象。 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、 物镜转换器、载物台、载物台 转移器、粗调节器、细调节器 等部件.它起着支持 调节 固定 等作用
油镜使用的原理 油镜,即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时,由于空气与 香柏油n=1.52 玻片的密度不同,使光线受"=L0 载玻片n=1.52 到曲折,发生散射,降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油(其折射率与玻 空气n=1.00 片的相近),则几乎不发生 折射,增加了视野的进光量,图1-3千燥物镜与油漫统 从而使物象更加清晰 镜光线通路 ◆根据公式2nsin(a/2),增大分母,使得D值 减小,分辨率增大
• 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油（其折射率与玻 片的相近），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量， 从而使物象更加清晰。 ◆ 根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D值 减小，分辨率增大
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数:物镜放大倍数×目镜 放大倍数 2显微镜的分辨率:是表示显微镜辨 析两点之间距离的能力。可用公式 表示为 D=y2n sin(2) 式中D:物镜分辨出物体两点间的最 短距离。 2可见光的波长(平均0.55m) m物镜和被检标本间介质的折射率。图1-2物的光线入射角 镜口角(即入射角) 小,分辨率越高,看到的物象越清晰
• 显微镜的放大倍数和分辨率 1. 放大倍数：物镜放大倍数×目镜 放大倍数 2. 显微镜的分辨率:是表示显微镜辨 析两点之间距离的能力。可用公式 表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最 短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。 D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
显微镜保养和使用中的注意事项 1不准擅自拆卸显微镜的任何部件以免损坏 2镜面只能用擦镜纸擦,不能用手指或粗布, 以保证光洁度 3观察标本时,必须依次用低、中、高倍镜, 最后用油镜。当目视接目镜时,特别在使用 油镜时,切不可使用粗调节器,以免压碎玻 片或损伤镜面。 拿显微镜时,一定要右手拿镜臂,左手托镜 座,不可单手拿,更不可倾斜拿。 显微镜应存放在阴凉干燥处,以免镜片滋生 霉菌而腐蚀镜片
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布， 以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜， 最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用 油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻 片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜 座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 5.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生 霉菌而腐蚀镜片。 显微镜保养和使用中的注意事项
单染色法:只能观察微生物的大小、形状 和细胞排列状况,但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等 9复染色法:用两种或两种以上染色液进行 染色,有协助鉴别微生物的作用,故也称 鉴别染色法。常用的有: 抗酸染色法、芽孢染色法 鞭毛染色法等
• 单染色法：只能观察微生物的大小、形状、 和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及 它的特殊构造等。 • 复染色法：用两种或两种以上染色液进行 染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称 鉴别染色法。常用的有： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 鞭毛染色法等
革兰氏染色 一丹麦CGam创立,用于细菌分类学研究 细菌细胞壁的结构 positive plasma (a)Gram-postive Proten Peptidoglycan Gram. negati cell wad Lt ceil wall Periplasmic (b)Gram-negative
革兰氏染色 • 丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究 • 细菌细胞壁的结构
G一肽聚糖层较薄,交联度低,含较多脂 质,故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质,增加了细胞的通透性,使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出,经沙 黄复染呈红色。 G+细胞壁结构致密,用脱色剂处理后, 肽聚糖层孔径缩小,通透性降低,故细 菌仍保留初染时的紫色
• G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂 质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了 类脂质，增加了细胞的通透性，使初染 的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙 黄复染呈红色。 • G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后， 肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细 菌仍保留初染时的紫色
实验材料 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、桔草芽孢杆菌 24h培养物) 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯 擦镜纸、吸水纸等。 革兰氏染色液一套
三、实验材料 • 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 （24h培养物） • 载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、 擦镜纸、吸水纸等。 • 革兰氏染色液一套